預(yù)處理方式對(duì)高效液相色譜法測(cè)定稻谷中黃曲霉毒素B1的影響

周婷婷，鄒建成，楊 娟，劉 浩

（湖南中儲(chǔ)糧糧油質(zhì)監(jiān)有限公司，湖南 寧鄉(xiāng) 410600）

稻谷，即未去除稻殼的子實(shí)，屬禾本科稻，是普通栽培稻亞屬中的普通稻亞種，在我國有著廣泛的種植。稻谷由稻殼和穎果（糙米）兩部分組成，經(jīng)礱谷機(jī)脫去稻殼后即可得到糙米，糙米再經(jīng)加工碾去皮層和胚，留下的胚乳，即變成人們經(jīng)常食用的精白米，其加工過程中脫落的糙米外表部分為米糠，主要包括果皮、種皮、胚芽、糊粉層及少部分的胚乳等[1-3]。

黃曲霉素（ aflatoxin，AF）是一類由黃曲霉（A. flavus）、寄生曲霉（A. parasiticus）等霉菌在霉變的谷物中產(chǎn)生的結(jié)構(gòu)類似的有毒代謝物，常見的有B1、B2、G1、G2等4種形式，其中以黃曲霉毒素B1（AFB1）毒性最強(qiáng)，具有強(qiáng)致畸、致癌和致突變等特性，被國際癌癥研究組織（IARC）劃定為Ⅰ類致癌物[4-5]。稻谷作為我國的主要糧食作物之一，因儲(chǔ)存條件等原因極易引起黃曲霉毒素的超標(biāo)[6-7]。本試驗(yàn)參考GB 5009.22—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測(cè)定》中高效液相色譜/柱后衍生（光化學(xué)衍生法）的基本方法，在黃曲霉毒素B1檢測(cè)超標(biāo)的稻谷樣品中隨機(jī)選取8份樣品，改用精米機(jī)處理的方式（得到精米）與礱谷機(jī)處理（得到糙米）進(jìn)行分析對(duì)比，以期確定黃曲霉毒素B1的檢測(cè)結(jié)果是否受到不同預(yù)處理方式的影響，為稻谷黃曲霉毒素B1的準(zhǔn)確檢測(cè)、稻谷防霉及科學(xué)食用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)支持。

1 材料和方法

1.1 試劑和材料

1.1.1 主要試劑及溶液

甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純）：德國默克公司；甲醇—水溶液（70+30）、乙腈—甲醇溶液（50+50）、黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品（純度大于98%）：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司。

實(shí)驗(yàn)用水均為去離子水。

1.1.2 主要儀器和設(shè)備

1200液相色譜儀：美國安捷倫公司；HF2500光化學(xué)柱后衍生器：北京華安麥科生物技術(shù)有限公司；HCM0125B免疫親和柱：北京華安麥科生物技術(shù)有限公司；JJ200電子天平：常熟市雙杰測(cè)試儀器廠；0.22 μm微孔過濾器：美國安捷倫公司；JLG-Ⅱ礱谷機(jī)：中儲(chǔ)糧成都糧食儲(chǔ)藏科學(xué)研究所；Ltjm-2009電動(dòng)定時(shí)稻米精米機(jī)：上海銀澤儀器設(shè)備有限公司；Advanced超純水機(jī)：成都康寧實(shí)驗(yàn)室專用純水設(shè)備廠。

1.1.3 色譜條件

色譜柱：C18柱（25 cm）；流動(dòng)相：A為水，B為乙腈—甲醇液（50+50）；等梯度洗脫條件：70% A+30% B；流速1.0 mL/min；柱溫40 ℃；進(jìn)樣體積20 μL；激發(fā)波長360 nm；發(fā)射波長440 nm。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液：分別準(zhǔn)確移取100 ng/mL的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)工作液100、500、1 000、2 000、4 000 μL至10 mL容量瓶中，用初始流動(dòng)相定容至刻度（含黃曲霉毒素B1濃度為1.0、5.0、10.0、20.0、40.0 ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液）。

1.2.2 試驗(yàn)步驟

試驗(yàn)從超標(biāo)黃曲霉毒素的稻谷樣品中隨機(jī)選取8個(gè)樣品，編號(hào)H001，H002，H003，…，H008。取8個(gè)稻谷樣品，依據(jù)礱谷機(jī)和精米機(jī)工作需求分別加入，精米機(jī)和礱谷機(jī)分別處理樣品5 min，之后過1 mm 篩，混勻備用。稱取上述樣品25 g，加入5 g氯化鈉與125 mL甲醇—水溶液（70+30）混勻，在高速均質(zhì)（＞10 000 r/min）1 min，用快速定性濾紙過濾，收集濾液，取10 mL濾液加入20 mL水稀釋，再用玻璃纖維濾紙過濾，收集濾液作為上清液，取15 mL上樣液過免疫親和柱凈化，取1 mL甲醇過柱，收集洗脫液并定容至1 mL，洗脫液用0.22 μm 微孔過濾器過濾后轉(zhuǎn)移至樣品瓶用于上機(jī)測(cè)定。

1.2.3 空白試驗(yàn)

除不稱取試樣外，其余步驟按照1.2.2進(jìn)行，做空白試驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線和色譜圖

試驗(yàn)以糙米為測(cè)定樣品，分別選0.99、4.95、9.90、19.80、39.60 ng/mL 5個(gè)濃度點(diǎn)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果顯示，試驗(yàn)方法線性回歸方程為y= 58 410x- 12 859，R2=0.999 8，滿足國家標(biāo)準(zhǔn)（需達(dá)到0.99以上）所需要求。試驗(yàn)所得稻谷樣品的黃曲霉毒素B1色譜圖見圖1。

2.2 預(yù)處理方法對(duì)黃曲霉毒素B1檢測(cè)結(jié)果的影響

通過精米機(jī)和礱谷機(jī)2種不同的方式對(duì)稻谷進(jìn)行預(yù)處理，而后進(jìn)行同樣的檢測(cè)步驟，最終測(cè)定并比較其中的黃曲霉毒素B1的含量，對(duì)比2種不同的預(yù)處理方式對(duì)黃曲霉毒素B1的檢測(cè)結(jié)果是否有影響，2次試驗(yàn)結(jié)果取算術(shù)平均值作為結(jié)果。

圖2結(jié)果顯示，通過礱谷機(jī)和精米機(jī)進(jìn)行預(yù)處理后再進(jìn)行檢測(cè)的稻谷，其黃曲霉毒素的檢測(cè)結(jié)果差異非常大。GB 5009.22—2016 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測(cè)定》中規(guī)定稻谷中黃曲霉毒素B1的限量不得超過10 μg/kg，經(jīng)過精米機(jī)處理后，8個(gè)原本超標(biāo)的樣本結(jié)果有5個(gè)降至10 μg/kg 以下。

由圖3可以看出，通過精米機(jī)處理后的稻谷，相對(duì)礱谷機(jī)處理后的稻谷，8個(gè)樣品的黃曲霉毒素B1檢測(cè)結(jié)果均有不同程度的降低。其中有4個(gè)樣品通過精米機(jī)處理后的稻谷樣品相對(duì)礱谷機(jī)處理后的稻谷樣品黃曲霉毒素B1的檢測(cè)結(jié)果降低了80%以上，H005和H008樣品降幅更是達(dá)到達(dá)100%，檢測(cè)結(jié)果變化最少的是H006號(hào)樣品，其黃曲霉毒素B1降低了6.36%。

3 結(jié) 論

通過礱谷機(jī)和精米機(jī)預(yù)處理后稻谷的黃曲霉毒素B1含量差距非常大，推測(cè)隨著加工精度的深入，稻谷表皮脫除得越多，黃曲霉毒素B1含量越少。

在糧食儲(chǔ)存方面，優(yōu)先以稻谷的方式保存，因稻谷具有完整的稻殼，在儲(chǔ)藏過程中穩(wěn)定性較強(qiáng)，對(duì)防霉、防蟲以及緩解吸濕等，均有更好的效果，在儲(chǔ)藏保管過程中，谷粒越完整則耐儲(chǔ)存性質(zhì)越好，完整顆粒的稻谷加工成精米的同時(shí)也去掉了其表面的許多有害成分[8]，這與本次試驗(yàn)結(jié)果相符合。而從營養(yǎng)健康角度出發(fā)，選擇精米還是糙米則應(yīng)該統(tǒng)籌考慮營養(yǎng)健康和食品安全這兩者關(guān)系。