HBV感染不同狀態者血清Tim-3的差異及與HBeAg和HBV DNA的關系

譚 倩 段雨函 李錦貌

湖北省恩施土家族苗族自治州中心醫院臨床檢驗中心 (湖北 恩施， 445000)

T細胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(Tim-3)是近年新發現的一種免疫負調控因子，主要表達于T細胞表面，通過激活Tim-3/Galectin-9(Tim -3L)信號通路參與免疫調控，與病毒感染密切相關，但尚不清楚其在乙型肝炎患者中的價值[1，2]。本研究選取180例不同狀態HBV感染者和50例健康體檢者作為研究對象，探討不同狀態HBV感染者血清Tim-3差異，并分析其與HBeAg和HBV DNA的關系，為乙型肝炎患者診療提供更多理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年6月至2019年6月于本院門診及住院診治的180例HBV不同感染狀態者作為研究對象。入組標準：①診斷標準符合中華醫學會肝病學分會和中華醫學會感染病學分會聯合制定的《慢性乙型肝炎防治指南(2015年版)》[3]；②排除合并其他肝炎患者；③排除合并人類免疫缺陷病毒等其他病毒感染者；④排除合并嚴重內科疾病者；⑤排除合并惡性腫瘤者。其中HBV攜帶者50例(攜帶組)、慢性乙型肝炎60例(CHB組)、慢性乙型肝炎急性發作者40例(急性發作組)和肝硬化組30例(肝硬化組)。攜帶組患者男28例，女22例，平均年齡(48.27±9.43)歲；CHB組患者男35例，女25例，平均年齡(48.61±9.27)歲；急性發作組患者男24例，女16例，平均年齡(49.17±9.25)歲；肝硬化組患者男19例，女11例，平均年齡(49.41±10.18)歲。同期選取50例健康體檢者作為對照組，其中男27例，女23例，平均年齡(48.29±9.67)歲。5組人員在性別和年齡等一般資料上比較，差異無統計學意義(P>0.05)。本研究所有研究對象均簽署知情同意書，并通過本院倫理委員會批準。

1.2 觀察指標與檢測方法

1.2.1 標本收集 5組人員入組次日晨起空腹抽取靜脈血5 ml，靜置30 min，4 000r/min離心10 min，將血清分為4部分，分裝凍存于-80℃冰箱，待所有標本集齊后集中檢測。

1.2.2 血清ALT檢測 采用連續檢測法檢測血清ALT，試劑盒購自北京利德曼生化股份有限公司，儀器為美國雅培C8000全自動生化儀，由檢驗科專業人員參考說明書進行操作及分析，參考值為5～50 U/L。

1.2.3 血清HBeAg檢測 采用酶聯免疫吸附法檢測血清HBeAg，試劑盒購自廈門英科新創科技公司，儀器為美國Biotek公司Cytation 5多功能酶標儀，由檢驗科專業人員參考說明書進行操作及分析，采用樣本臨界值的比值(S/CO)進行判定：當S/CO<1時判定為陰性，其中CO值=OD(陰性對照組均值)×2.1。

1.2.4 血清HBV DNA定量檢測 采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應檢測血清HBV DNA水平，試劑盒購自上海江萊生物科技有限公司，儀器為美國ABI公司7500實時熒光定量PCR檢測儀，嚴格按說明書進行操作及分析，其檢測下限定為500 copies/ml，當結果低于500 copies/ml時判定為陰性。

1.2.5 血清Tim-3檢測 采用酶聯免疫吸附法檢測檢測血清Tim-3，試劑盒購自上海瓦蘭生物科技有限公司，檢測儀器為美國Thermo Fisher Scientific公司Multiskan MK3酶標儀，操作按說明書進行。

2 結果

2.1 5組人員血清Tim-3和ALT檢測結果 見表1。

表1 5組人員血清Tim-3和ALT比較

2.2 HBeAg陽性與陰性患者Tim-3檢測結果 見表2。

表2 HBeAg陽性與陰性患者Tim-3比較

2.3 HBV DNA陽性與陰性患者Tim-3檢測結果 見表3。

表3 HBV DNA陽性與陰性患者Tim-3比較

2.4 血清Tim-3在HBV感染中的診斷價值 繪制ROC曲線發現，血清Tim-3在診斷HBV感染上具有一定價值(P<0.05)，其曲線下面積為0.789，95%CI為0.711～0.842，截斷值為16.45 pg/ml，敏感度為83.5%，特異度為80.1%。見圖1。

圖1 血清Tim-3診斷HBV感染的ROC曲線圖

2.5 血清Tim-3對HBV感染進程的影響 經Logistic回歸分析發現，血清Tim-3是導致HBV進展的獨立危險因素(P<0.05)，OR值為1.83(95%CI：1.24～2.32)。

3 討論

至今為止，血清學指標(HBV-M)仍是診斷乙型肝炎患者最常用的指標，可反映患者體內病毒轉變過程，但不能作為判斷患者是否具有傳染性的直接證據[4]。近年，臨床將HBV DNA定量檢測作為判斷HBV病毒感染、復制和診斷的直接可靠依據，這是因為其檢測方法靈敏度高、特異性強，即使在HBV病毒含量極低的情況下也可檢測到其復制情況，是確定HBV感染不同復制狀態的“金標準”[5，6]。盡管如此，HBV DNA并非完全理想指標，且單項檢測存在其劣勢及不足，尋找更多敏感有效指標仍是乙型肝炎診療的重要方向[7]。人Tim基因位于人染色體5q33.2，首次由McIntire等[8]在研究哮喘時發現，隨后發現該位點與過敏反應和自身免疫性疾病密切相關，主要編碼Tim-1、Tim-3和Tim-4 3種受體蛋白[9]。其中Tim-3為Ⅰ型膜蛋白，包括胞漿區、跨膜區、黏蛋白區、免疫球蛋白Ⅴ區和信號肽區，其中，胞漿區是主要參與信號傳遞，免疫球蛋白Ⅴ區則主要與配體結合[10]。既往研究認為，Tim-3主要表達于分化成熟Th1細胞上，作為一個負性調節因子負性調節免疫反應，在抗病毒反應中占有一定地位[11，12]。最新研究表明，Tim基因家族是磷脂酰絲氨酸(PS)一個新的受體家族，與Ps結合可介導凋亡T細胞識別和清除[13，14]。

眾所周知，HBV感染人體后是否發病 、病情輕重及轉歸、臨床類型與遺傳因素和宿主免疫功能相關，尤以細胞免疫為主[15]。研究發現，HBV感染時Tim-3可高表達，與病毒復制相關[16]。但Wu等[17]學者認為Tim-3表達與機體病毒載量無明顯相關，卻意外地發現與血清ALT水平呈正相關。在本研究中，5組人員血清Tim-3和ALT水平比較差異有統計學意義，提示血清Tim-3和ALT水平與HBV感染狀態相關，與上述結論基本一致。但后續研究發現，血清Tim-3與HBeAg和HBV DNA相關，HBeAg陽性者血清Tim-3水平明顯高于HBeAg陰性者，HBV DNA陽性者血清Tim-3水平高于HBV DNA陰性者，差異均有統計學意義，與Wu等學者研究結論不一致，不排除地區差異。此外，本研究還繪制了ROC曲線，發現血清Tim-3在診斷HBV感染上具有一定價值，其敏感度和特異度分別為83.5%和80.1%，有望成為HBV DNA聯合指標指導乙型肝炎患者診療。最后，本研究還進行了Logistic回歸分析，發現血清Tim-3是導致HBV進展的獨立危險因素，提示臨床工作者診療過程中可增大對血清Tim-3檢測的關注度。

綜上認為，Tim-3在HBV感染不同狀態差異明顯，且與HBeAg和HBV DNA狀態相關，是導致HBV進展的獨立危險因素。但考慮到所選研究對象樣本量、居住地和觀察時間等，其推廣價值有待后續進一步研究。