宮頸癌患者血清miRNA-21和miRNA-218表達水平及與預后的關系

陳劍

研究發現[1]，宮頸癌的發生和發展涉及到多基因的異常調控。微小RNA（miRNA）是一類能參與疾病調控的短鏈非編碼RNA，其可通過靶向識別mRNA的非翻譯區，調控轉錄后水平，進而影響靶基因的表達[2]。miRNA參與多種復雜生物學過程，且不同腫瘤具有不同的miRNA的表達譜。miRNA-21是在膠質瘤中發現的一種促癌基因，通過抑制細胞凋亡來促進腫瘤的發生發展[3]。研究發現[4]，miRNA-218在乳腺癌、肝癌、胃癌及神經膠質瘤等多種惡性腫瘤中表達下調。本研究擬分析宮頸癌患者外周血清中miRNA-21及miRNA-218的表達水平及與預后的關系。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2015年8月至2017年8月浙江省金華廣福醫院收治的宮頸癌患者140例（觀察組），納入標準：（1）確診為原發性宮頸癌；（2）未經歷過藥物、手術及放療等治療；（3）不合并其他腫瘤患者；（4）均行手術治療者。排除標準：（1）肝、腎及心等重要器官功能障礙者；（2）精神類疾病者；（3）不能配合術后隨訪者。其中年齡29～60歲，平均（45.1±14.1）歲；FIGO臨床分期為I型91例，II型28例，III型21例；病理類型為鱗癌65例，腺癌37例，鱗腺癌38例；分化程度為高分化24例，中分化85例，低分化31例；脈管浸潤程度為一半及以上浸潤75例，其余65例；淋巴結轉移77例，無轉移63例。

另選同期本院行子宮全切手術治療的子宮肌瘤患者30例設為對照組，納入標準：（1）術后宮頸篩查無癌變且無宮頸癌家族史患者；（2）無合并其他腫瘤或肝腎心等重要器官功能障礙者；（3）無精神類疾病者。其中年齡28～59歲，平均（44.3±13.8）歲。本研究經醫院醫學倫理委員會審批批準，入組患者及其家屬均同意并在知情同意書上簽字。

1.2 方法 采集觀察組術前及手術1周后空腹靜脈血5 ml，對照組術前空腹靜脈血5 ml，室溫靜置1 h后以3 000 r/min離心10 min，分離血清并置于―70℃下保存，待測。采用實時熒光定量PCR（qPCR）法測量血清內miRNA-21和miRNA-218的表達水平：將抽提的細胞總RNA經嚴格遵守試劑盒操作，根據A260定量結果進行逆轉錄，并根據目標基因mRNA序列引物設計原則，用軟件primer express3.0設計合并qPCR檢測引物及探針。miRNA-21和miRNA-218引物序列見表1，目標基因探針和內參基因探針均為5’端采用FAM報告熒光標記，3’采用TAMRA淬滅熒光標記。采用2-Ct法計算miRNA的相對表達量。本研究試劑盒均采購于美國Applied Biosystems公司。

表1 miR-21和miR-218的引物序列

1.3 隨訪 觀察組出院后采用電話及復查等多種形式隨訪36個月，3個月/次，隨訪期間記錄患者生存情況。以下情況之一視為隨訪終點：36個月內患者死亡；36個月內患者退出該項目；36個月隨訪結束。

1.4 統計方法 數據采用SPSS 21.0軟件分析，計量資料以均數±標準差表示，采用t檢驗；計數資料采用2檢驗；生存分析采用Kaplan-Meier生存曲線；影響因素分析采用Logistic分析。P＜0.05為差異統計學意義。

2 結果

2.1 血清miRNA-21和miRNA-218表達水平比較術前及術后，觀察組血清miRNA-21表達水平均高于對照組（均P＜0.05），miRNA-218表達水平均低于對照組（均P＜0.05）。兩組手術前后血清miRNA-21和miRNA-218表達水平差異均有統計學意義（t≥4.18，均P＜0.05）。見表2。

表2 兩組血清miRNA-21和miRNA-218表達水平

2.2 血清miRNA-21和miRNA-218與臨床特征的關系 觀察組miRNA-21表達水平中位數為4.56，miRNA-218表達中位數為3.34，以此為依據，將觀察組分為miRNA-21高表達組（miRNA-21表達≥4.56，n=85）和miRNA-21低表達組（miRNA-21表達＜4.56，n=55），miRNA-218高表達組（miRNA-218≥3.34，n=90）和miRNA-218低表達組（miRNA-218＜3.34，n=50）。

miRNA-21高、低表達組FIGO分期、脈管浸潤程度及淋巴結轉移差異均有統計學意義（均P＜0.05）；miRNA-218高、低表達組FIGO分期、脈管浸潤程度及淋巴結轉移差異均有統計學意義（均P＜0.05），見表3。

表3 血清miRNA-21和miRNA-218表達與臨床特征的關系 例

2.3 血清miRNA-21和miRNA-218表達與預后的關系 miRNA-21高表達組36個月總生存率顯著低于低表達組（52.9%vs 76.4%，2=11.55，P＜0.05）；miRNA-218低表達組36個月總生存率顯著低于高表達組（55.3%vs 72.7%，2=6.40，P＜0.05）。見封二彩圖3～4。

2.4 宮頸癌預后獨立危險因素分析 Logistics回歸分析顯示，FIGO期、淋巴結有轉移、miRNA-21高表達及miRNA-218低表達均是影響宮頸癌患者預后的獨立危險因素（均P＜0.05）。見表4。

表4 宮頸癌預后獨立危險因素Logistics回歸分析

3 討論

miRNA表達水平被認為與多種腫瘤的發生發展密切相關[5]，其通過調控RNA的轉錄水平、調節蛋白質編碼基因的表達，而使目的基因mRNA翻譯上調、下降或降解。研究顯示，在宮頸癌組織及正常宮頸組織中miRNA具有不同的表達特征。miRNA-21是發現最早，研究較多的一種小分子RNA，王紅等[6]通過總結近年來對miRNA-21的研究中發現，其在生長發育、癌癥發生、免疫反應和骨分化等生物過程中均發揮重要作用。萬淑瓊等[7]在檢測宮頸癌變組織中miRNA含量時發現，宮頸癌組織中HPV陽性區域miRNA-21含量顯著高于HPV陰性區域，證實了miRNA-21在宮頸癌變組織中的作用。本研究結果顯示，術前及術后，觀察組血清miRNA-21表達水平均高于對照組（均P＜0.05）。

近年來，多項國外研究證實miRNA與惡性腫瘤的臨床分期、淋巴結轉移、脈管浸潤及預后等臨床特征密切相關。Karakatsanis等[8]研究指出，肝癌腫瘤分期和預后情況與miRNA-21高表達相關。本研究結果顯示，miRNA-21高、低表達組FIGO分期、脈管浸潤程度及淋巴結轉移差異均有統計學意義（均P＜0.05）。

近年來miRNA-218在腫瘤組織中的異常表達引起研究者的廣泛關注。Liu等[9]研究顯示，miRNA-218在腫瘤的發生過程中起到了抑癌基因的作用。Gao等[10]認為HPV高危型感染可以下調miRNA-218的表達水平，且其低表達水平可能與宮頸癌發病機制相關。本研究結果顯示，本研究結果顯示，術前及術后，觀察組血清miRNA-218表達水平均低于對照組（均P＜0.05）。同時在研究miRNA-218與臨床癥狀關系時發現，miRNA-218表達的高低與宮頸癌FIGO分期、脈管浸潤程度、淋巴結轉移具有密切聯系。

研究顯示[11]，年齡、腫瘤大小、脈管浸潤程度、宮旁浸潤程度及FIGO分期等均為影響宮頸癌預后的相關因素。本研究結果顯示，FIGO期、淋巴結有轉移、miRNA-21高表達及miRNA-218低表達均是影響宮頸癌患者預后的獨立危險因素（均P＜0.05）。其中miRNA-21高表達組36個月總生存率顯著低于低表達組（P＜0.05），miRNA-218低表達組36個月總生存率顯著低于高表達組（P＜0.05）。結果提示miRNA-21高表達與miRNA-218低表達與宮頸癌預后情況密切相關。

綜上所述，宮頸癌患者血清miRNA-21呈表達上調，血清miRNA-218表達下調，二者表達量與FIGO分期、淋巴結有轉移及宮頸癌患者術后36個月生存率密切相關。