急性心肌梗死患者外周血miR-208 sST2 CLU與左室重構(gòu)的相關(guān)性

王麗娟,關(guān)曉燕,張峰波

(新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗中心,新疆 烏魯木齊市 830054)

急性心肌梗死(Acute myocardial infarction，AMI)是指冠狀動脈急性閉塞、血流快速性中斷所造成的心肌缺血缺氧性壞死，是較嚴(yán)重的心血管疾病之一[1]。主要表現(xiàn)劇烈而持久的心前區(qū)及胸骨后疼痛，并伴有心源性休克、惡性心律失常、心力衰竭等并發(fā)癥。由于心臟射血能力下降和冠狀動脈灌注不足，部分患者還可能出現(xiàn)脈搏微弱和血壓降低，同時伴有進(jìn)行性心電圖變化及血清心肌酶活性增高，而休息及硝酸酯類藥物無法完全緩解[2]。在AMI發(fā)病過程中，細(xì)胞外基質(zhì)、膠原纖維網(wǎng)絡(luò)和心肌細(xì)胞的結(jié)構(gòu)(形態(tài)、厚度、體積)、功能和表型在神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)、炎癥因子和力學(xué)因子的作用下發(fā)生改變，即心室重構(gòu)(Ventricular remodeling，VR)[3]。當(dāng)發(fā)生左心室重構(gòu)(Left ventricular remodeling，LVR)時，患者左心室收縮功能常呈進(jìn)行性下降。AMI起病急且病情發(fā)展迅速，已成為國內(nèi)外重要的公共健康問題。王宙等[4]研究報道，多種細(xì)胞因子與心肌損傷后心力衰竭及心肌細(xì)胞慢性損傷有關(guān)，但關(guān)于微小核糖核酸-208(Microrna-208，miR-208)、可溶性生長刺激表達(dá)基因2蛋白(Soluble growth stimulating gene 2，sST2)、簇集蛋白(Clusterin，CLU)與左室重構(gòu)關(guān)系的報道較少。本研究通過檢測外周血sST2、CLU在AMI患者體內(nèi)的水平，旨在探討其與AMI發(fā)病后左室重構(gòu)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料:選取2019年1月至2020年2月到本院就診并首次確診為AMI的患者62例為AMI組，其中男39例，女23例，年齡41～75歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有AMI患者診斷標(biāo)準(zhǔn)均參照中華醫(yī)學(xué)會心血管病學(xué)分會于2019年制定《急性ST段抬高型心肌梗死診斷和治療指南》[5]；②心前區(qū)或胸骨后劇烈壓榨性疼痛持續(xù)時間≥10～20min，且可向左肩、左上肢、背部及下頜等部位放射；③所有患者均于發(fā)病24h內(nèi)入院。排除標(biāo)準(zhǔn)：①可能引起左室重構(gòu)的其他疾病(心臟瓣膜病、心肌疾病、心力衰竭、心律失常、先天性心臟病及心肌炎等)；②合并肝腎功能障礙或不全、自身免疫性疾病、血液疾病、腫瘤等。所有AMI患者入院后立即行急性冠狀動脈造影檢查并給予經(jīng)皮冠狀動脈介入治療(Percutaneous coronary intervention，PCI)，實現(xiàn)TIMI血流Ⅱ及以上。且于術(shù)后無禁忌癥的情況下接受阿司匹林、低分子肝素抗凝、他汀類調(diào)脂固斑、氯吡格雷抗血小板聚集、ACEI/ARB 類藥物及β受體阻滯劑等抑制心室重構(gòu)治療。同時選取同時期到本院就診并經(jīng)冠狀動脈造影檢查病變?yōu)殛幮?狹窄程度<50%)且無任何心臟基礎(chǔ)疾病的患者35例作為對照組，其中男21例，女14例。本研究均經(jīng)所有患者及患者家屬同意并簽訂知情同意書，并通過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。見表1。

表1 AMI組與對照組一般資料比較

1.2方法:超聲心動圖檢查：取左側(cè)臥位，進(jìn)行超聲心動檢查，所測超聲心動圖參數(shù)均取3個連續(xù)心動周期的平均值，測定左心室收縮末期直徑(Left ventricular end systolic diameter ，LVESD)、左心室舒張末期直徑(Left ventricular end diastolic diameter，LVEDD)；M型超聲檢查左心室收縮末期容積(Left ventricular end systolic volume ，LVESV)、左心室舒張末期容積(Left ventricular end diastolic volume，LVEDV)、左心室射血分?jǐn)?shù)(Left ventricular ejection fraction ，LVEF)，并根據(jù)Simpson法計算左室心肌質(zhì)量指數(shù)(Left ventricular mass index，LVMI)。并根據(jù)LVR標(biāo)準(zhǔn)(LVEDV變化率≥15%)將AMI組分為左室重構(gòu)組(LVR組)與左室非重構(gòu)組(No-LVR組)。采用血糖儀(購于上海羅氏診斷產(chǎn)品有限公司)檢測空腹血糖(Fasting blood glucose，F(xiàn)PG)水平。采用血液分析儀(美國貝克曼庫爾特DxH800血細(xì)胞分析儀)檢測白細(xì)胞(White blood cell，WBC)及血小板(Platelet，PLT)水平。采用酶聯(lián)免疫法(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)(試劑采購于上海酶聯(lián)生物科技有限公司)檢測高密度脂蛋白-膽固醇(High-density lipoprotein ，HDL-C)、低密度脂蛋白-膽固醇(Low density lipoprotein ，LDL-C)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、總膽固醇(Total Cholesterol ，TC)、sST2 及CLU水平。采用實時熒光定量PCR法測定外周血miR-208水平：取患者外周血，提取RNA，并測定RNA分子濃度，按照miScript Reverse Transcription Kit操作步驟進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，按照miRNA SYBR Green PCR Kit操作步驟進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)，反應(yīng)體系：總反應(yīng)體系為25μL，其中PCR Master Mix 濃度為2X，體積為12.5μL；引物F(10uM)濃度為10μM，體積為0.5μL；引物R(10uM)濃度為10μM，體積為0.5μL；探針P(10uM)濃度為10μM，體積為0.5μL；ddH2O體積為2μL；Template(CDNA)體積為2μL；Total體積為25μL。冰浴中充分混勻混合反應(yīng)體系。反應(yīng)條件：95℃ 2min變性，95℃ 10sec，60℃ 60ses，共計40個循環(huán)。采集熒光貫穿與整個過程，反應(yīng)結(jié)束后對PCR曲線進(jìn)行分析，使用2-△△Ct法計算目的基因的相對表達(dá)量。見表2。

表2 逆轉(zhuǎn)錄引物miR-208 內(nèi)參基因U6序列

2 結(jié) 果

2.1三組患者臨床特征比較:三組在年齡、性別、體重指數(shù)、高血壓史、糖尿病史、吸煙史、WBC、PLT、FPG、TG、TC、HDL-C水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。與對照組對比，LVR組LDL-C水平明顯升高，且LVR組明顯高于No-LVR組(P<0.05)，見表3。

表3 三組患者臨床特征比較

2.2三組患者外周血miR-208、sST2、CLU比較:與對照組對比，LVR組患者的外周血miR-208、sST2、CLU水平均明顯增高(P<0.05)，且LVR組均明顯高于No-LVR組(P<0.05)。見表4。

表4 三組患者外周血miR-208 sST2 CLU比較

2.3三組患者超聲心動圖測量指標(biāo)水平比較:與對照組對比，No-LVR組與LVR組患者的LVESD、LVEF均明顯增高(P<0.05)，且LVR組明顯高于No-LVR組(P<0.05)，No-LVR組與LVR組患者的LVEDD、LVESV、LVEDV及LVMI水平明顯降低(P<0.05)，且LVR組明顯低于No-LVR組(P<0.05)。見表5。

表5 三組患者超聲心動圖測量指標(biāo)水平比較

2.4外周血miR-208、sST2、CLU與超聲心動圖測量指標(biāo)水平的相關(guān)性分析:經(jīng)Pearson相關(guān)性分析，LVESD、LVEF與外周血miR-208、sST2、CLU呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，LVESV、LVEDD、LVEDV、LVMI與外周血miR-208、sST2、CLU呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見表6。

表6 外周血miR-208 sST2 CLU與超聲心動圖測量指標(biāo)水平的相關(guān)性分析

3 討 論

AMI預(yù)后差且死亡率高，嚴(yán)重威脅人類的生活質(zhì)量與生命健康。當(dāng)發(fā)生AMI后，部分心肌缺血壞死，收縮能力喪失，引起左心室壁收縮運動不協(xié)調(diào)，左室內(nèi)的血液無法有效的排空射出，加重心室內(nèi)壓力負(fù)荷，進(jìn)而引起整個左室梗死區(qū)心肌擴張與非梗死區(qū)代償性肥厚的慢性適應(yīng)性反應(yīng)，嚴(yán)重時甚至導(dǎo)致心室容積增大、心力衰竭等[6]。LVR是心臟的一種適應(yīng)性代償機制，研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)發(fā)生LVR時，患者可出現(xiàn)惡性心律失調(diào)、室壁瘤形成、及心臟破裂常等一系列急性并發(fā)癥，致死率較高且預(yù)后較差[7]。因此，積極診斷及治療AMI、降低LVR發(fā)生率、減輕患者死亡率率對改善患者預(yù)后具有重要作用。

miRNAs是一類內(nèi)源性非編碼單鏈RNA，miRNAs可通過靶向特定的標(biāo)靶對基因進(jìn)行表達(dá)調(diào)控，從而參與疾病的發(fā)生、發(fā)展[8]。miRNAs包含miR-208具有高度的組織特異性。miR-208在心臟重構(gòu)的心肌中表達(dá)水平明顯升高[9]。此外，葉茂等[10]研究認(rèn)為，miR-208表達(dá)水平與心肌膠原的堆積、心肌肥大、心律失常等心肌損傷過程具有重要關(guān)系，miR-208可以作為預(yù)測心臟功能的重要指標(biāo)。

ST2屬于白細(xì)胞介素-1受體家族，是心臟生物機械應(yīng)力誘導(dǎo)產(chǎn)生的心肌蛋白，包括ST2L與sST2兩種異構(gòu)體，具有免疫調(diào)節(jié)及控制炎癥的作用。研究發(fā)現(xiàn)，ST2L能夠與sST2競爭性結(jié)合，從而發(fā)揮減少心肌凋亡、改善心功能以及拮抗心肌重構(gòu)等生物學(xué)作用[11]。T2作為一種誘騙受體存在于人體內(nèi)，當(dāng)血清中的sST2水平增高時，可阻斷ST2L與IL-33結(jié)合，并與IL-33/ST2L信號通路發(fā)揮的心臟保護(hù)作用相拮抗，從而促進(jìn)AMI患者病情的發(fā)生與發(fā)展，影響預(yù)后恢復(fù)[12]。

CLU是一種急性期反應(yīng)蛋白，主要存在于人體血漿的高密度和極高密度脂蛋白中，并參與構(gòu)成高密度脂蛋白復(fù)合物，有調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、延緩細(xì)胞凋亡以及調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮穩(wěn)定性等作用。Kropackova Tereza等[13]研究發(fā)現(xiàn)，CLU可減輕細(xì)胞壞死后周圍組織產(chǎn)生的繼發(fā)性炎癥反應(yīng)，保護(hù)組織并促進(jìn)損傷后的組織修復(fù)以及補體抑制等生物學(xué)功能。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著患者病情的發(fā)展，外周血miR-208、sST2、CLU水平均明顯升高，上述指標(biāo)均可作為反應(yīng)患者病情發(fā)展的重要指標(biāo)。AMI發(fā)病早期及時干預(yù)miR-208、sST2、CLU的表達(dá)可抑制心室重構(gòu)的發(fā)生發(fā)展。目前臨床上用于診斷AMI的方法很多，其中超聲心動圖是一種利用超聲波回聲探查心臟及大血管并獲取相關(guān)信息的一組檢查方法，其操作簡單、安全無創(chuàng)、準(zhǔn)確率高，是冠狀動脈造影檢查的金標(biāo)準(zhǔn)。

綜上所述，外周血miR-208、sST2及CLU在AMI患者體內(nèi)呈高表達(dá)狀態(tài)，且與AMI后LVR關(guān)系密切，及時檢測這兩種因子的水平有助于抑制AMI后LVR情況的發(fā)生及發(fā)展。本研究樣本量較少，抽樣誤差可能較大，尚需進(jìn)一步臨床研究來證實。