透骨草提取物對小麥葉蜂的毒殺活性初步研究

□文/邢浩春魏娜李同慶白浩偉郭淑霞付靜李志亮謝全森

小麥葉蜂（Dolerus tritici C.）屬于膜翅目葉蜂科昆蟲，是小麥抽穗前最常見的害蟲。在北方3～4月份發(fā)生一代，幼蟲主要危害小麥葉片，每平方米30多頭時發(fā)生較嚴重，會使小麥減產(chǎn)。目前農(nóng)村要求用低毒的高效氫氯菊酯來防治麥葉蜂，但也有用禁用農(nóng)藥的情況，而且供選用的生物農(nóng)藥種類比較少。因此研發(fā)高效低毒環(huán)保、廣譜、成本低、符合老百姓心意的生物農(nóng)藥很有必要，近幾年植物源農(nóng)藥的研發(fā)更是受到科研工作者的青睞，比如白屈菜、透骨草、川烏等。透骨草（Phryma leptostachya L.）為我國傳統(tǒng)中藥材，有一定毒性。國內外學者陸續(xù)研究了透骨草全株、根、地上部分的提取物對家蠅、黏蟲、淡色庫蚊、菇蠅和小菜蛾幼蟲等的毒殺活性，表明透骨草對上述害蟲均有明顯的活性。對有殺蟲活性的透骨草提取物進行了進一步分離鑒定和分析，顯示不同提取、萃取方法和萃取劑等條件分離出來的化學成分也不同，分離得到的主要化學成分有木質素類化合物、黃酮類化合物、三萜類化合物等。其中木質素類化合物具有極高的殺蟲活性，對家蠅的觸殺活性和商業(yè)化的擬除蟲菊酯相當，雙氧木質素A主要對多種鱗翅目害蟲有效。目前透骨草提取物對小麥葉蜂的毒殺作用還未見報道。本實驗采用透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物對小麥葉蜂進行毒殺實驗，了解其殺蟲活性，為中草藥的利用及生物農(nóng)藥的開發(fā)提供參考依據(jù)。

一、實驗材料和方法

1.實驗材料

透骨草：全株，購自藥店。

小麥葉蜂幼蟲：采集于未噴灑藥液的小麥田中，在實驗室飼養(yǎng)。

2.實驗方法

（1）透骨草的甲醇提取物制備

將全株透骨草干品打粉過60目篩。準確稱取透骨草干燥粉末與90%甲醇溶液混合冷漬1天，60℃條件下超聲波輔助提取，再抽濾，完成后收集濾液，用旋轉蒸發(fā)儀減壓濃縮成浸膏，干燥后收集稱重計算得率。放入4℃冰箱中保存。得到浸膏即為透骨草甲醇提取物。

（2）甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物制備

將透骨草甲醇提取物浸膏加水溶解，加入等量乙酸乙酯溶液，用超聲波輔助萃取，分離水相和乙酸乙酯相，最后將乙酸乙酯相用旋轉蒸發(fā)儀減壓濃縮得到浸膏稱重，計算萃取得率，公式如下：

（3）透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物殺蟲活性測定方法

殺蟲活性測定采用載毒葉片法。用丙酮將透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物配成1毫克∕毫升、2毫克∕毫升、4毫克∕毫升、8毫克∕毫升四個濃度梯度的藥液作為實驗組，用等量的蒸餾水和丙酮溶劑作為對照組，每組三個重復，每個重復用10頭小麥葉蜂，共30頭。將新鮮麥葉浸入藥液20秒拿出，等溶劑揮發(fā)后，放置在盛有濾紙的干凈培養(yǎng)皿中，然后放入停食一天、健康活潑、等大的小麥葉蜂。觀察小麥葉蜂在食用葉片2小時、12小時、24小時后的反應。如觀察到發(fā)生麻痹現(xiàn)象用解剖針觸其身體不再作出反應即為死亡。計算小麥葉蜂死亡率和校正死亡率。（如表1）

表1 透骨草提取物的乙酸乙酯萃取物對小麥葉蜂的處理效果

（4）數(shù)據(jù)統(tǒng)計和分析

用excel軟件統(tǒng)計數(shù)據(jù)及分析。

二、結果討論

1.透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物對小麥葉蜂的中毒特征

通過載毒葉片法處理小麥葉蜂，發(fā)現(xiàn)正常的小麥葉蜂活潑健康，喜歡啃食葉片，身體微透明淺米色。藥液處理后出現(xiàn)掙扎、蜷曲、聚堆、遠離葉片的現(xiàn)象，死亡時身體柔軟收縮、不動、顏色發(fā)黑等。

2.不同濃度梯度乙酸乙酯萃取物對小麥葉蜂的毒殺活性

不同濃度梯度透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物處理小麥葉峰24小時后，1毫克∕毫升、2毫克∕毫升、4毫克∕毫升、8毫克∕毫升濃度時死亡數(shù)為10頭、12頭、18頭、20頭，可以發(fā)現(xiàn)藥液對小麥葉蜂有比較明顯的胃毒、觸殺活性。濃度在8毫克∕毫升24小時校正死亡率最高為58.32%。實驗中也發(fā)現(xiàn)，除了透骨草提取物對小麥葉蜂的毒殺作用外，丙酮因為沒有完全揮發(fā)也起了一些作用，丙酮對照組死亡率就達20%，所以24小時校正死亡率相對死亡率來說小一些。

上圖分析看出，隨著透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物濃度的增加，小麥葉蜂的24小時死亡率和校正死亡率也逐漸上升。但在本實驗條件下4毫克∕毫升和8毫克∕毫升濃度處理組相比，沒有太多增加，可能是因為8毫克∕毫升濃度處理時透骨草提取物的浸膏摻雜了雜質所致，也可能濃度過高效果也不太明顯，因此濃度等于或高于8毫克∕毫升其毒殺活性還有待進一步研究。

圖1 透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物對小麥葉蜂的毒殺活性折線圖

三、結論

本實驗利用甲醇提取和乙酸乙酯萃取方法得到透骨草的有效化學物質，即透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物，用載毒葉片法次檢測了其對北方3～4月份危害小麥比較嚴重的小麥葉峰的毒殺活性。結果顯示：害蟲表現(xiàn)出一定的中毒特征。藥液濃度為1毫克∕毫升、2毫克∕毫升、4毫克∕毫升和8毫克∕毫升梯度時，隨濃度的增加其死亡率和校正死亡率也增加，8毫克∕毫升時校正死亡率最高達58.32%。從本實驗條件下初步研究結果顯示，透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物對小麥葉蜂有一定的殺蟲活性，殺蟲活性與其濃度呈正相關。而高濃度時或其他不同溶劑提取物的活性及透骨草化學成分分離和鑒定還有待進一步研究。