遼西地區(qū)老年冠心病患者PCSK9基因E670G位點(diǎn)多態(tài)性與冠狀動(dòng)脈狹窄、血脂代謝的相關(guān)性

楊文艷 張素文 薛凌

(錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院，遼寧 錦州 121000)

冠心病是以冠狀動(dòng)脈硬化、狹窄為主要病理生理基礎(chǔ)，并且機(jī)體血脂代謝紊亂是疾病的主要危險(xiǎn)因素，并且與病情的進(jìn)展過程存在密切關(guān)系〔1，2〕。研究表明，血脂代謝紊亂與多種調(diào)控機(jī)制有關(guān)，其中人枯草溶菌素轉(zhuǎn)化酶(PCSK)9可促使低密度脂蛋白在動(dòng)脈血管中沉積，參與冠狀動(dòng)脈硬化、狹窄進(jìn)程，進(jìn)而增加冠心病等多種心血管疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)〔3,4〕。本研究探討PCSK9基因E670G位點(diǎn)基因多態(tài)性與冠狀動(dòng)脈狹窄和脂代謝的關(guān)系，分析遼西地區(qū)老年冠心病患者的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

1 資料和方法

1.1研究對(duì)象 選取2016年7月至2019年12月年錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院217例老年冠心病患者作為病例組，均符合《冠心病合理用藥指南(第 2 版)》診斷標(biāo)準(zhǔn)〔5〕，排除非遼西地區(qū)常住居民、患有惡性腫瘤、急性心肌梗死、惡性心律失常、嚴(yán)重感染、肝腎功能嚴(yán)重異常、近期服用調(diào)節(jié)血脂藥物及有經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入(PCI)史患者，包括男118例，女99例，年齡60～79歲，平均(68.47±5.56)歲。選取同期健康體檢的220例遼西地區(qū)老年人為對(duì)照組，其中男115例，女105例，年齡60～78歲，平均(69.84±5.62)歲。兩組一般資料無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，均對(duì)本研究知情同意，并通過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批通過。

1.2實(shí)驗(yàn)方法 (1)PCSK9基因E670G位點(diǎn)基因型分型。由大連寶生物公司合成PCSK9基因E670G位點(diǎn)引物，上游5′-GAGATACACGGTTGTGTCCCAA-3′，下游5′-TGAGAGAGGGACAAGTCGGAA-3′〔6〕。兩組抽取空腹靜脈血2 ml，放置-20 ℃保存，使用試劑盒提取外周血DNA(北京天根生化科技有限公司)，然后取3 μl DNA模板配制成30 μl反應(yīng)體系，進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增，具體PCR反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性5 min，然后進(jìn)行40個(gè)循環(huán)(95℃變性30 s、52℃退火30 s、72℃延伸45 s)，然后再進(jìn)行72℃延伸10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物使用限制性內(nèi)切酶消化，分AA基因型、AG基因型和GG基因型。(2)PCSK9和血脂指標(biāo)的檢測(cè)。兩組取空腹靜脈血3 ml，取血清后使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)PCSK9水平，試劑盒購(gòu)自艾博抗(上海)貿(mào)易有限公司，并使用貝克曼庫爾特自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和載脂蛋白(apo)B等血脂指標(biāo)。(3)Gensini評(píng)分。病例組均行冠狀動(dòng)脈造影檢查，并計(jì)算Gensini評(píng)分=每支冠狀動(dòng)脈評(píng)分×相應(yīng)的加權(quán)系數(shù)之和。狹窄程度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：<25%為1分，≥25%且<50%為2分，≥50%且<75%為4分，≥75%且<90%為8分，≥90%且<99%為16分，≥99%為32分。加權(quán)系數(shù)為：左主干為5，左前降支近端和左回旋支近端均為2.5，左前降支中段為1.5，對(duì)角支D1、左回旋支遠(yuǎn)端、左回旋支后降支、右冠狀動(dòng)脈近端、右冠狀動(dòng)脈中端、右冠狀動(dòng)脈遠(yuǎn)端、右冠狀動(dòng)脈后降支均為1，對(duì)角支D2和左回旋支后側(cè)均為0.5。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS24.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)、Pearson相關(guān)性分析。

2 結(jié) 果

2.1PCSK9基因E670G位點(diǎn)基因多態(tài)性 病例組PCSK9基因E670G位點(diǎn)G等位基因頻率顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；病例組PCSK9基因E670G位點(diǎn)AG+GG突變基因型頻率顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。見表1。

2.2兩組血清PCSK9和血脂指標(biāo)水平比較 病例組血清PCSK9、TC、LDL-C和apoB水平均顯著高于對(duì)照組，HDL-C水平顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組PCSK9基因E670G位點(diǎn)等位基因及基因型頻率分布、PCSK9和血脂指標(biāo)水平比較

2.3病例組PCSK9基因E670G位點(diǎn)基因多態(tài)性與Gensini評(píng)分、血脂指標(biāo)水平比較 AG+GG 基因型組Gensini評(píng)分及血清TC、LDL-C、apoB水平均顯著高于AA基因型組，HDL-C水平顯著低于AA基因型組(P<0.05)。見表2。

表2 病例組PCSK9基因E670G位點(diǎn)基因多態(tài)性與Gensini評(píng)分、血脂指標(biāo)的比較

2.4病例組血清PCSK9與Gensini評(píng)分、血脂指標(biāo)的相關(guān)性 病例組患者血清PCSK9與Gensini評(píng)分、TC、LDL-C和apoB呈正相關(guān)(r=0.558、0.404、0.490、0.461，均P<0.05)，與HDL-C呈明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.438，P<0.05)。

3 討 論

冠心病發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，是由年齡、遺傳因素、血脂代謝異常、高血壓等多種因素共同導(dǎo)致〔7〕，其中血脂代謝異常被認(rèn)為是冠狀動(dòng)脈狹窄和硬化的核心因素，其中降低LDL-C是治療冠狀動(dòng)脈相關(guān)疾病的基礎(chǔ)，TC、HDL-C、LDL-C及apoB等血脂指標(biāo)水平的異常變化，使代謝產(chǎn)物和脂質(zhì)在動(dòng)脈管腔壁上沉積，增加粥樣硬化和斑塊形成風(fēng)險(xiǎn)〔8,9〕。PCSK9作為一種血脂調(diào)節(jié)蛋白，主要在肝臟中合成并分泌，屬于前蛋白轉(zhuǎn)化酶家族成員之一，PCSK9通過與低密度脂蛋白受體相結(jié)合，發(fā)揮調(diào)控機(jī)體脂質(zhì)代謝的作用和功能〔10,11〕。研究發(fā)現(xiàn)LDL-C、脂蛋白(a)和PCSK9是冠心病發(fā)生的危險(xiǎn)因素，HDL-C是獨(dú)立保護(hù)因素，并且冠心病患者血清PCSK9的水平與TC、LDL-C、Apo B等血脂指標(biāo)呈正相關(guān)〔12〕；冠心病患者血清PCSK9異常升高，并與冠狀動(dòng)脈病變范圍和狹窄程度的關(guān)系密切〔13〕。本研究結(jié)果說明老年冠心病患者存在PCSK9表達(dá)異常的現(xiàn)象，其分泌增加會(huì)造成血脂代謝不平衡，使得血脂水平隨之升高，加重高脂血癥和高膽固醇血癥，導(dǎo)致膽固醇、低密度脂蛋白等在血管內(nèi)皮下大量堆積，進(jìn)而引起內(nèi)皮功能障礙和結(jié)構(gòu)改變及動(dòng)脈粥樣硬化和血管管腔狹窄，并與狹窄程度密切關(guān)系，是冠心病發(fā)生的危險(xiǎn)因素。

PCSK9基因多態(tài)性與心血管疾病的相關(guān)性研究也越來越多〔14〕，PCSK9編碼基因位于染色體1q32區(qū)，包含12個(gè)外顯子，編碼產(chǎn)物為692個(gè)氨基酸糖蛋白，包括信號(hào)肽、前結(jié)構(gòu)域、催化結(jié)構(gòu)域和富含半胱氨酸/組氨酸結(jié)構(gòu)域，E670G位點(diǎn)位于第12外顯子，其基因多態(tài)性研究較多〔15〕。本研究結(jié)果說明E670G位點(diǎn)A→G突變，會(huì)增加冠狀動(dòng)脈病變和管腔狹窄的風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致冠心病發(fā)生；PCSK9基因E670G位點(diǎn)A等位基因突變，會(huì)對(duì)機(jī)體血脂代謝過程產(chǎn)生較大影響，并加重冠狀動(dòng)脈狹窄的嚴(yán)重程度，與冠心病發(fā)生和病情發(fā)展存在密切關(guān)系。綜上，遼西地區(qū)老年冠心病患者血清PCSK9水平異常增高，導(dǎo)致機(jī)體血脂代謝紊亂，加重冠狀動(dòng)脈狹窄程度，并且PCSK9基因E670G位點(diǎn)存在A向G的基因突變，AG和GG突變基因型是冠心病的危險(xiǎn)基因型。