白屈菜堿對四氯化碳誘導肝纖維化模型大鼠的改善作用及機制

李曉明 王文豹 郭麗娜 宋波 董巍 徐天嬌 王曉麗

中圖分類號 R285 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2021）23-2868-07

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.23.09

摘 要 目的：研究白屈菜堿對四氯化碳誘導肝纖維化模型大鼠的改善作用及可能機制。方法：將48只大鼠按隨機數字表法隨機分成正常對照組，模型組，白屈菜堿低、中、高劑量組（0.125、0.25、0.50 mg/kg）和陽性對照組（護肝片，0.42 g/kg），每組8只。除正常對照組外，其余各組大鼠均采用腹腔注射四氯化碳-橄欖油溶液8周建立肝纖維化模型。于造模第5周開始，正常對照組和模型組大鼠灌胃水，各給藥組大鼠灌胃相應藥液，每天1次，連續10周。末次灌胃后，計算大鼠肝指數;測定大鼠血清中天冬氨酸轉氨酶（AST）、丙氨酸轉氨酶（ALT）、透明質酸（HA）和肝組織中羥脯氨酸（Hyp）水平;觀察大鼠肝組織中膠原纖維蛋白染色情況;測定大鼠肝組織中α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）、微管相關蛋白1輕鏈3（LC3）、p62蛋白表達水平和磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的磷酸化水平，以及上述蛋白對應的mRNA表達水平。結果：與正常對照組比較，模型組大鼠肝指數，血清中AST、ALT、HA、Hyp水平，肝組織中膠原纖維蛋白陽性染色面積百分比和α-SMA、LC3-Ⅱ的mRNA及其蛋白表達水平均顯著升高（P<0.05）;p62蛋白表達水平，PI3K、Akt、mTOR的蛋白磷酸化水平以及p62、PI3K、Akt、mTOR mRNA表達水平均顯著降低（P<0.05）。與模型組比較，白屈菜堿低劑量組大鼠PI3K、mTOR的蛋白磷酸化水平均顯著降低（P<0.05）;白屈菜堿中、高劑量組上述指標（除中劑量組肝指數、HA水平外）的變化均被顯著逆轉（P<0.05）。結論：白屈菜堿對四氯化碳所致大鼠肝纖維化具有一定的改善作用;其機制可能與激活PI3K/Akt/mTOR信號通路、抑制細胞自噬有關。

關鍵詞 白屈菜堿;肝纖維化;磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白信號通路;自噬

Improvement Effects of Chelidonine on CCl4-induced Hepatic Fibrosis Model Rats and Its Mechanism

LI Xiaoming1，WANG Wenbao2，GUO Lina2，SONG Bo2，DONG Wei2，XU Tianjiao1，WANG Xiaoli2（1. Institute of Medicine， Qiqihar Medical College， Heilongjiang Qiqihar 161006， China; 2. School of Pharmacy， Qiqihar Medical College， Heilongjiang Qiqihar 161006， China）

ABSTRACT&nbsp; ?OBJECTIVE： To study the improvement effects and potential mechanism of chelidonine on CCl4-induced hepatic fibrosis model rats. METHODS： According to the random number table method， a total of 48 rats were randomly divided into normal control group， model group， chelidonine low-dose， middle-dose and high-dose groups （0.125， 0.25， 0.50 mg/kg）， positive control group （Liver-protecting tablet，0.42 g/kg）， with 8 rats in each group. Except for normal control group， other groups were given CCl4-olive oil solution intraperitoneally for 8 weeks to induce hepatic fibrosis model. From the fifth week of modeling， normal control group and model group were given water intragastrically; administration groups were given relevant medicine intragastrically， once a day， for consecutive 10 weeks. After last intragastric administration， hepatic index of rats was calculated. The levels of aspartate aminotransferase （AST）， alanine aminotransferase （ALT） and hyaluronic acid （HA） in serum and the level of hydroxyproline （Hyp） in liver tissue were determined. The staining of collagen fibrin in rat liver was observed. The protein expression of α-smooth muscle actin （α-SMA），microtubule-associated protein 1 light chain 3 （LC3） and p62 as well as the phosphorylation level of phosphoinositide 3 kinase （PI3K），protein kinase B （Akt） and mammalian target of rapamycin （mTOR） in liver tissue were determined; mRNA expression corresponding to above protein were also determined. RESULTS： Compared with normal control group， the hepatic index， the serum levels of AST， ALT， HA and Hyp， the percentage of positive staining area for collagen fibrin， the mRNA and protein expression of α-SMA and LC3-Ⅱ were increased significantly （P<0.05）. Protein expression of p62， phosphorylation levels of PI3K， Akt and mTOR as well as mRNA expression of p62， PI3K， Akt and mTOR were significantly down-regulated （P<0.05）. Compared with model group， phosphorylation levels of PI3K and mTOR were decreased significantly in chelidonine low-dose group （P<0.05）. The changes of above indexes in chelidonine middle-dose and high-dose groups （except for liver index， HA level in middle-dose group） were reversed significantly （P<0.05）. CONCLUSIONS： Chelidonine can attenuate CCl4-induced liver fibrosis in rats; the mechanism of it may be associated with activating PI3K/Akt/mTOR signaling pathway and inhibiting autophagy.

KEYWORDS? ?Chelidonine; Hepatic fibrosis; PI3K/Akt/mTOR signaling pathway; Autophagy

肝纖維化是由多種原因導致的急性或慢性肝病的共同病理過程，如病毒性肝炎、酒精肝、脂肪肝以及自身免疫性疾病等均可引起肝組織細胞外基質（ECM）過度沉積，最終導致肝纖維化[1-2]。肝纖維化是一個動態發展的過程，當肝臟受到損傷時，會刺激肝星狀細胞（HSC）活化，進而分泌α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）、Ⅰ型膠原蛋白和纖維連接蛋白等ECM，加快肝纖維化進程，甚至會發展成為肝硬化-肝細胞癌;若肝臟在發生纖維化時經過積極治療，可終止或逆轉肝纖維化的病理學改變[3-4]。細胞自噬是通過自我消化受損的細胞器等來維持細胞內、外環境的穩定，可為HSC提供能量，促進HSC的活化、增殖，進而促進肝纖維化的發展[5]。磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）在肝纖維化的進程中扮演著重要角色，其中mTOR是PI3K和Akt下游的重要靶點，同時也是自噬的關鍵負調節因子，因此可通過PI3K/Akt/mTOR信號通路來調節細胞自噬[6]。

白屈菜為罌粟科白屈菜屬多年生草本植物白屈菜Chelidonium majus L.的全草，味苦，性涼，有小毒，歸肺、心、腎經，具有鎮痛、止咳、平喘、消腫之功效[7]。白屈菜堿是中藥白屈菜中的主要活性成分之一[8]。現代藥理學研究表明，白屈菜堿具有抗纖維化、抗炎、抗腫瘤、抗菌、鎮痛、解痙等多種藥理作用[9]，尤其是其抗纖維化、抗腫瘤作用，近年受到了越來越多學者的關注。相關研究顯示，白屈菜堿可調節丙氨酸轉氨酶（ALT）等肝酶活性，抑制大鼠肝纖維化[10]。本課題組前期研究也表明，白屈菜堿對活化的大鼠HSC——CFSC-8B細胞的增殖和細胞中的膠原合成具有抑制作用[11]。但目前關于白屈菜堿抗肝纖維化的作用機制尚未完全闡明。鑒于此，本研究擬以四氯化碳（CCl4）誘導建立大鼠肝纖維化模型，探討白屈菜堿的抗肝纖維化作用及其對PI3K/Akt/mTOR信號通路和自噬的調控作用，為進一步闡明白屈菜堿抗肝纖維化的作用機制提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用的主要儀器有Stratagene Mx3005P型實時熒光定量聚合酶鏈式反應（PCR）儀（美國Agilent公司），JY-ZY2型轉移電泳槽、JY-CZ1型單垂直電泳槽（北京君意東方電泳設備有限公司）、CKX41型倒置顯微鏡（日本Olympus公司）、SmartChemiTM Ⅱ型一體式化學發光圖像分析系統（北京賽智創業科技有限公司）、ELX800型全自動酶標儀（美國Bio Tek公司）、XPE504型分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）。

1.2 主要藥品與試劑

本研究所用的主要藥品與試劑包括：白屈菜堿對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號18041303，純度≥98%），護肝片（黑龍江葵花藥業股份有限公司，批號201609128，規格為每片0.35 g），苦味酸-酸性品紅（VG）染色試劑盒、BCA蛋白定量試劑盒（北京索萊寶科技有限公司，批號分別為20161121、20160519），透明質酸（HA）檢測試劑盒（武漢默沙克生物科技有限公司，批號201709），肝組織羥脯氨酸（Hyp）檢測試劑盒、ALT檢測試劑盒、天冬氨酸轉氨酶（AST）檢測試劑盒、兔抗鼠p62多克隆抗體（南京建成生物工程研究所，批號分別為20180103、20171220、20171216、20200113），PrimeScript RT Reagent Kit反轉錄試劑盒[寶生物工程（大連）有限公司，批號AJ10935A]，細胞核蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑盒、兔抗鼠Akt多克隆抗體、兔抗鼠磷酸化Akt（p-Akt）多克隆抗體（上海碧云天生物技術有限公司，批號分別為052720200827、033018200921、033018200921），TRIzol試劑（美國Ambion公司，批號229009），兔抗鼠微管相關蛋白1輕鏈3（LC3）多克隆抗體（美國Abcam公司，批號GR219724-1），兔抗鼠α-SMA多克隆抗體、兔抗鼠PI3K多克隆抗體、兔抗鼠磷酸化PI3K（p-PI3K）多克隆抗體、兔抗鼠mTOR多克隆抗體、兔抗鼠磷酸化TOR（p-mTOR）多克隆抗體、兔抗鼠3-磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH）多克隆抗體（美國Cell Signaling公司，批號分別為19245、4257、4228、2983、2974、2118S），生物素標記的山羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）二抗、ECL超敏發光檢測試劑盒（北京康為世紀生物科技有限公司，批號分別為00051405、40532），歐麗薇蘭橄欖油（益海嘉里食品營銷有限公司，批號F20160814）;PCR實驗中引物均由生工生物工程（上海）股份有限公司合成;其余試劑均為分析純，水為自制雙蒸水。

1.3 動物

本研究所用動物為SPF級雄性Wistar大鼠，共48只，5～6周齡，體質量為（180±10） g，由齊齊哈爾醫學院動物實驗中心提供，動物生產許可證號為SCXK（黑）- 2016-001。全部大鼠飼養于SPF級動物實驗室中，實驗室溫度為20～25 ℃，12 h照明/12 h黑暗交替。大鼠飼養期間常規進食、飲水，適應性飼養1周后進行正式實驗。

2 方法

2.1 分組、造模與給藥

將48只大鼠按隨機數字表法隨機分為正常對照組，模型組，白屈菜堿低、中、高劑量組（0.125、0.25、0.50? ?mg/kg，劑量根據前期預實驗結果設定）和陽性對照組 （護肝片，0.42 g/kg[12]），每組8只。除正常對照組外，其余各組大鼠均采用腹腔注射CCl4-橄欖油溶液誘導建立肝纖維化模型（造模前禁食12 h）。本研究所用的造模方法是在文獻[13]的基礎上加以改進后得到，具體為：造模大鼠首次按8 mL/kg的劑量腹腔注射50%CCl4-橄欖油溶液，之后均繼續以5 mL/kg的劑量注射，每3天1次，持續8周。于造模第5周開始，各給藥組大鼠灌胃相應藥物（均以水溶解），正常對照組和模型組大鼠灌胃水，灌胃體積均為1 mL，每天1次，連續10周。

2.2 樣本采集與處理

于第14周末次灌胃后，大鼠禁食不禁水24 h，稱其體質量后以乙醚麻醉，于股動脈取血。將血液以3 000? r/min離心5 min，收集上層血清，備用。將大鼠處死，摘取其肝組織并稱定質量，然后于冰盒上取一小塊肝組織并置于4%甲醛溶液中固定24 h，用于病理組織學檢查;將一部分肝組織置于液氮中快速凍存，用于Western blot和PCR實驗相關指標檢測;剩余肝組織直接用于Hyp水平測定。

2.3 肝指數測定

根據大鼠體質量和肝組織質量計算大鼠肝指數：肝指數（%）=肝組織質量/體質量×100%。

2.4 血清中AST、ALT和HA水平測定

取“2.2”項下血清適量，分別按相應試劑盒說明書方法操作，測定大鼠血清中AST、ALT和HA水平。

2.5 肝組織中Hyp水平測定

取“2.2”項下肝組織，參照文獻[14]方法進行處理后，按相應試劑盒說明書方法操作，測定大鼠肝組織中Hyp水平。

2.6 肝組織中膠原纖維蛋白表達情況觀察

取“2.2”項下于甲醛溶液中固定24 h后的肝組織，常規制備石蠟切片（厚度約3 μm），經二甲苯及梯度乙醇脫蠟至水后，按照VG染色試劑盒說明書方法對切片進行染色（VG陽性染色呈鮮紅色）。將切片置于倒置顯微鏡下觀察、拍照，利用Image-Pro Plus 6.0軟件計算膠原纖維蛋白陽性染色面積和染色總面積，并計算膠原纖維蛋白陽性染色面積百分比（膠原纖維蛋白陽性染色面積/染色總面積×100%）。結果處理時，以正常對照組數據為標準（100%）計算其余各組結果的相對值。

2.7 肝組織中α-SMA、LC3-Ⅱ、p62的蛋白表達水平和PI3K、Akt、mTOR的蛋白磷酸化水平測定

采用Western blot法進行測定。取“2.2”項下凍存的肝組織，于冰上常規解凍后，按細胞核蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑盒說明書方法提取肝組織中的總蛋白。采用BCA法測定總蛋白濃度后，煮沸5 min使其變性。取變性后的蛋白進行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離（濃縮膠電壓75 V、電泳時間30 min，分離膠電壓110 V、電泳時間90 min），然后電轉至硝酸纖維素膜上（電流350 mA，轉膜時間2 h），加入含5%脫脂奶粉的TBST溶液，于4 ℃封閉過夜;分別加入α-SMA、LC3、p62、p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR、GAPGH一抗（稀釋比例均為1 ∶ 1 000），于37 ℃孵育4 h;以TBST洗膜3次、每次10 min，然后加入生物素標記的IgG二抗（稀釋比例1 ∶ 1 000），于37 ℃孵育2 h;以TBST洗膜3次、每次10 min，然后加入ECL熒光檢測劑，采用一體式化學發光圖像分析系統測定各蛋白條帶的灰度值。以α-SMA、LC3-Ⅱ、p62與內參GAPDH的蛋白條帶灰度值的比值表示這3種蛋白的表達水平，以p-PI3K與PI3K、p-Akt與Akt、p-mTOR與mTOR的蛋白條帶灰度值的比值表示這3種蛋白的磷酸化水平。

2.8 肝組織中α-SMA、LC3-Ⅱ、p62、PI3K、Akt、mTOR的mRNA表達水平測定

采用實時熒光定量PCR法進行測定。取“2.2”項下凍存的肝組織，于冰上常規解凍后，采用TRIzol試劑提取肝組織中總RNA，然后按反轉錄試劑盒說明書方法反轉錄合成cDNA，并以cDNA為模板進行PCR擴增（引物序列及擴增產物片段長度見表1）。PCR反應體系為：cDNA模板2 μL，dNTP溶液1.6 μL，上、下游引物各0.8 μL， BeyoTaq Buffer 2 μL，BeyoTaq DNA Polymerase 0.1 μL，加雙蒸水至總體積為20 μL。PCR反應條件為：95 ℃預變性4 min;95 ℃變性20 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共40個循環。最后進行溶解曲線分析。以GAPDH為內參，采用2-ΔΔCt法計算肝組織中α-SMA、LC3、p62、PI3K、Akt、mTOR的mRNA表達水平（公式中Ct表示每個反應管內熒光信號強度達到設定閾值時所經歷的循環次數），并以正常對照組數據為標準（1.00）計算其余各組結果的相對值。

2.9 統計學方法

采用SPSS 13.0軟件進行統計分析。實驗數據以x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK檢驗。檢驗水準α=0.05。

3 結果

3.1 大鼠肝指數和血清中AST、ALT、HA水平

與正常對照組比較，模型組大鼠肝指數和血清中AST、ALT、HA水平均顯著升高（P<0.05）。與模型組比較，白屈菜堿中劑量組大鼠血清中AST、ALT水平均顯著降低（P<0.05）;白屈菜堿高劑量組和陽性對照組大鼠肝指數和血清中AST、ALT、HA水平均顯著降低（P<0.05）。各組大鼠肝指數和血清中AST、ALT、HA水平測定結果見表2。

3.2 大鼠肝組織中Hyp水平

與正常對照組比較，模型組大鼠肝組織中Hyp水平顯著升高（P<0.05）。與模型組比較，白屈菜堿中、高劑量組和陽性對照組大鼠肝組織中Hyp水平均顯著降低（P<0.05）。各組大鼠肝組織中Hyp水平測定結果見表3。

3.3 大鼠肝組織中纖維蛋白染色情況

正常對照組大鼠肝組織結構正常，匯管區及中央靜脈周圍無纖維增生。模型組大鼠肝組織匯管區擴大，膠原纖維大量增生。與模型組比較，各給藥組大鼠肝組織匯管區不同程度地縮小，膠原沉積不同程度地減少;其中白屈菜堿高劑量組和陽性對照組大鼠肝組織匯管區及中央靜脈周圍僅有極少量的膠原沉積。與正常對照組比較，模型組大鼠肝組織中膠原纖維蛋白陽性染色面積百分比顯著升高（P<0.05）;與模型組比較，白屈菜堿中、高劑量組和陽性對照組大鼠肝組織中膠原纖維蛋白陽性染色面積百分比均顯著降低（P<0.05） 。各組大鼠肝組織中膠原纖維蛋白染色顯微圖見圖1，膠原纖維蛋白陽性染色面積百分比測定結果見表3。

3.4 大鼠肝組織中α-SMA、LC3-Ⅱ、p62蛋白表達水平和PI3K/Akt/mTOR信號通路相關蛋白磷酸化水平

與正常對照組比較，模型組大鼠肝組織中α-SMA、LC3-Ⅱ蛋白表達水平均顯著升高（P<0.05），p62蛋白表達水平和PI3K、Akt、mTOR的蛋白磷酸化水平均顯著降低（P<0.05）。與模型組比較，白屈菜堿低劑量組大鼠肝組織中PI3K、mTOR的蛋白磷酸化水平均顯著升高（P<0.05） ;白屈菜堿中、高劑量組和陽性對照組大鼠肝組織中α-SMA、LC3-Ⅱ蛋白表達水平均顯著降低（P<0.05），p62蛋白表達水平和PI3K、Akt、mTOR的蛋白磷酸化水平均顯著升高（P<0.05）。各組大鼠肝組織中α-SMA、LC3-Ⅱ、p62和PI3K/Akt/mTOR信號通路相關蛋白表達的電泳圖見圖2，蛋白表達水平或磷酸化水平測定結果見表4。

3.5 大鼠肝組織中α-SMA、LC3、p62和PI3K/Akt/mTOR信號通路相關基因mRNA表達水平

與正常對照組比較，模型組大鼠肝組織中α-SMA、LC3 mRNA表達水平均顯著升高（P<0.05），p62、PI3K、Akt、mTOR mRNA表達水平均顯著降低（P<0.05）。與模型組比較，白屈菜堿中、高劑量組和陽性對照組大鼠肝組織中α-SMA、LC3 mRNA表達水平均顯著降低（P<0.05），p62、PI3K、Akt、mTOR mRNA表達水平均顯著升高（P<0.05）。各組大鼠肝組織中α-SMA、LC3、p62和PI3K/Akt/mTOR信號通路相關基因mRNA表達水平測定結果見表5。

4 討論

CCl4進入體內后，可在肝臟中生成三氯甲基自由基和氯自由基，進而溶解肝細胞膜，使肝細胞中大量肝內酶（AST、ALT等）滲入血液，造成肝損傷和肝纖維化[15]。因此，本研究選擇腹腔注射CCl4-橄欖油溶液來建立大鼠肝纖維化模型。護肝片具有保護肝損傷的作用，在肝損傷相關研究中常用作陽性對照藥物進行對照觀察[16-17]。

血清中肝內酶（AST、ALT）水平是評價肝損傷和肝纖維化程度的重要指標，輕度的肝細胞損傷即可使血液中肝內酶的濃度增加數倍[18]。肝損傷后會導致組織中HSC激活并合成α-SMA，產生大量以膠原蛋白為主的ECM沉積。Hyp是膠原蛋白特有的氨基酸，HA是ECM中糖胺聚糖的主要成分，隨著ECM的不斷沉積，肝組織中Hyp、HA含量也隨之增加，因此檢測肝組織中α-SMA、Hyp、HA水平對于判斷肝組織損傷和肝纖維化程度具有重要意義[19]。本研究結果顯示，模型組大鼠肝指數和血清中AST、ALT水平以及肝組織中α-SMA、Hyp、HA水平較正常對照組均顯著升高，肝組織纖維化明顯，表明肝纖維化大鼠模型制備成功。當給予不同劑量白屈菜堿處理后，大鼠肝指數和血清中AST、ALT水平以及肝組織中α-SMA（mRNA及其蛋白表達）、Hyp、HA水平較模型組均不同程度地降低，肝組織纖維化程度減輕，說明白屈菜堿對CCl4誘導的大鼠肝纖維化損傷具有較好的改善作用。

肝內自噬是肝細胞對自身結構蛋白及細胞器進行降解的一種方式，在肝纖維化損傷中具有重要作用[20-21]。自噬可以通過分解、減少脂滴而促進HSC活化[22]。Thoen等[23]用3-甲基腺嘌呤抑制HSC自噬時，細胞內脂滴的數量和體積明顯增加、脂肪酸合成明顯減弱，HSC的活化受到抑制。上述結果提示，通過調節細胞自噬，可抑制HSC活化，進而抑制肝纖維化。自噬相關蛋白LC3在自噬小體的形成中具有重要作用，是細胞自噬的特異性標志物[24]。LC3可分為Ⅰ型（LC3-Ⅰ）和Ⅱ型（LC3-Ⅱ），當自噬發生時，LC3于細胞質內轉變為可溶性LC3-Ⅰ;LC3-Ⅰ被自噬相關蛋白Atg7識別并活化后，再經泛素化加工修飾生成LC3-Ⅱ——LC3-Ⅱ的表達水平與自噬體數量成正比，且LC3-Ⅱ在自噬過程的晚期階段表達，因此常作為反映自噬強度的指標[25]。p62蛋白作為自噬降解的底物之一，也是反映自噬水平的重要指標[26]。本研究結果顯示，給予不同劑量白屈菜堿處理后，肝纖維化模型大鼠肝組織中LC3 mRNA及其蛋白的表達水平均不同程度地降低，p62 mRNA及其蛋白的表達水平均不同程度地升高，提示白屈菜堿能夠對肝內自噬產生影響。

PI3K/Akt/mTOR信號通路在自噬過程中起到關鍵的調節作用，其中PI3K是一種存在于細胞質中的復合體，是該信號通路的重要組成部分[27]。激活的PI3K（即p-PI3K）會將磷脂酰肌醇二磷酸（PIP2）磷酸化為磷脂酰肌醇三磷酸（PIP3），PIP3再將目標蛋白Akt募集到細胞膜上，進而磷酸化激活Akt分子;激活后的Akt分子再磷酸化激活下游的mTOR;而mTOR是抑制自噬過程的關鍵蛋白，可阻礙自噬小體的形成，進而抑制細胞自噬[28]。本研究結果顯示，給予不同劑量白屈菜堿處理后，肝纖維化模型大鼠肝組織中PI3K、Akt、mTOR的蛋白磷酸化水平及相應基因的mRNA表達水平均不同程度地升高。這表明白屈菜堿能夠調節PI3K/Akt/mTOR通路相關基因mRNA及其蛋白的表達，進而影響細胞自噬標志蛋白LC3、p62的表達，阻止HSC的活化，并抑制肝纖維化的發生。

綜上所述，白屈菜堿可改善CCl4誘導大鼠的肝纖維化，其機制可能與激活PI3K/Akt/mTOR信號通路、抑制細胞自噬有關。然而，自噬是一把“雙刃劍”，其與肝纖維化的關系復雜。因此，白屈菜堿通過調控自噬抗肝纖維化的作用機制還需后續進一步深入研究。

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（收稿日期：2021-05-25 修回日期：2021-10-20）

（編輯：林 靜）