Lp-PLA2 基因多態性與心肌梗死的相關性分析

馬莎 楊建

摘 ?要：目的 ?探究漢族人群脂蛋白相關磷脂酶A2（Lp-PLA2）基因A379V位點多態性與心肌梗死的相關性。方法 ?研究時間為2019年1月～2020年12月，以期間濟寧市兗州區人民醫院收治的200例心肌梗死患者和200名健康體檢者為對象開展研究。心肌梗死患者設為觀察組，健康體檢者設為對照組，采集兩組受試者的血液標本，采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性（PCR-RFLP）技術進行Lp-PLA2基因A379V位點上的單核苷酸多態性檢測，并采用logistics回歸模型分析Lp-PLA2基因突變與心肌梗死的相關性。結果 ?觀察組的總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、Lp-PLA2水平與對照組相比，差異均有統計學意義（P<0.05）;A379V位點上檢測到CC、CT、TT三種基因型，觀察組A379V位點上的TT、CT基因分布頻率明顯高于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）;logistics回歸分析結果顯示，Lp-PLA2基因A379V位點的基因多態性與急性心肌梗死的發生密切相關（P<0.05）。結論 ?Lp-PLA2基因多態性與心肌梗死的發生密切相關，Lp-PLA2基因A379V位點突變可能是導致心肌梗死發生的重要原因。

關鍵詞：心肌梗死;脂蛋白相關磷脂酶A2;基因多態性;基因突變

中圖分類號：R542.2+2 ? ?文獻標識碼：A ? ?文章編號：1009-8011（2021）-16-0158-02

心肌梗死（MI）是冠心病分型中致死率最高的一種，也是目前威脅群眾生命安全的主要疾病。MI的發生與多種因素有關，如環境因素、飲食因素、心理因素、遺傳因素等，臨床目前認為，動脈粥樣硬化是導致MI的主要病理基礎，但MI的遺傳因素影響一直是臨床研究的重點課題[1]。發現MI的遺傳特點，能夠幫助臨床快速完成高危人群的篩查和預防，減少MI的發生。相關研究證明[2]，單核苷酸多態性（SNPs）可能是導致機體易感性差異的主要原因，同時也可能影響機體動脈粥樣硬化進程和炎癥反應等，這都是導致MI發生的重要因素。脂蛋白相關磷脂酶A2（Lp-PLA2）屬于磷脂酶超家族，與血小板的激發和活性密切相關，目前已有研究證實Lp-PLA2主要受基因因素調控，部分基因位點的突變會影響Lp-PLA2活性，從而影響MI的發生率[3]。但Lp-PLA2的基因多態性受到地域、種族等因素的影響，因此在Lp-PLA2多態性與MI的相關性上仍存有爭議。本文就漢族人群Lp-PLA2基因多態性與MI的相關性進行了研究分析，現報道如下。

1 ?資料與方法

1.1 ?一般資料

研究時間為2019年1月～2020年12月，以濟寧市兗州區人民醫院收治的200例心肌梗死患者和200例健康體檢者為對象開展研究，心肌梗死患者設為觀察組，健康體檢者設為對照組。觀察組包括男性112例，女性88例;年齡45～81歲，平均年齡（62.40±9.70）歲。對照組包括男性109例，女性91例;年齡38～82歲，平均年齡（61.80±10.40）歲。兩組基本資料對比，差異無統計學意義（P>0.05）。本次研究已通過醫院醫學倫理委員會審批。

1.2 ?納入與排除標準

納入標準：①經冠脈造影確診為MI;②符合中華醫學會心血管病學分會提出的MI診斷標準[4-5];③漢族;④本地居住時間超過20年。

排除標準：①合并主動脈夾層、擴張型心肌病等心臟疾病者;②合并嚴重臟器功能不全、惡性腫瘤、自身免疫疾病或嚴重感染者;③與同組間其他受檢者有血緣關系;④合并精神疾病者。

1.3 ?方法

1.3.1 ?血清采集

觀察組在入院后24 h內采集血液樣本，對照組則在預約體檢當天采集樣本，均取空腹靜脈血7 mL，其中5 mL分離血清，保存于-80 ℃下備用，做總膽固醇（TC）、甘油三酯膽固醇（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）及Lp-PLA2檢測，其余2 mL樣本進行DNA提取。

1.3.2 ?DNA提取

取0.3 mL血液樣本置于1.5 mL EP管，加0.7 mL的TBP緩沖液，混勻后在3000 rpm條件下離心5 min，棄上清，加入0.5 mL的TBP緩沖液及10 μL蛋白酶K，55℃下孵育1 h，振蕩混勻后離心，取上清，與0.3 mL無水乙醇混勻，將混合液置入收集管，離心后棄液體，取DNSC柱加入0.5 mL的AW1緩沖液，離心后棄液體并重復以上步驟1次，取DNSC柱并加入0.2 mL的AE緩沖液，離心后棄液體并重復以上步驟1次，提取獲得的DNA做凝膠電泳，進行濃度測定。

1.3.3 ?PCR-RFLP

查找NCBI中關于Lp-PLA2的Primer 5.0設計引物信息，A379V目的基因片段的PCR引物序列為：上游5-CAGACCAACAAGACCAGTACCTT-3，下游5-GACAGCTTTGTCCTGAGATTCAT-3，擴增長度300 bp。

1.4 ?觀察指標

對比兩組TC、TG、HDL-C、LDL-C及Lp-PLA2指標，對比兩組Lp-PLA2在A379V位點上的T基因分布頻率差異性。

1.5 ?統計學分析

數據采用SPSS 22.0軟件做統計學處理，組間計量資料以（x±s）表示，對比用t檢驗，計數資料以[n（%）]表示，對比用χ2檢驗，以MI為因變量進行多因素logistics回歸分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 ?結果

2.1 ?血脂及Lp-PLA2水平對比

觀察組的TC、TG、LDL-C、HDL-C、Lp-PLA2水平與對照組相比，差異均有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2.2 ?基因型和等位基因頻率分布

A379V位點上檢測到CC、CT、TT三種基因型，觀察組A379V位點上的TT、CT基因分布頻率明顯高于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）。見表2。

2.3 ?logistics回歸分析

結果顯示，Lp-PLA2基因A379V位點的基因多態性（TT、CT）與急性心肌梗死的發生密切相關，差異有統計學意義（P<0.05）。見表3。

3 ?討論

心血管疾病（CVD）是全球范圍內的主要死亡原因之一，在CVD中，冠心病占所有心血管疾病死亡的一半，是發達國家最常見的死亡原因[6]。

目前臨床認為，動脈粥樣硬化是導致MI的主要病理基礎，但遺傳因素也在MI的發生發展中起到了重要的作用。Lp-PLA2屬于磷脂酶超家族成員，通過與脂蛋白結合形成非酯化脂肪酸，能夠誘發慢性炎癥，而炎癥反應也是導致MI發生的主要原因之一。Lp-PLA2對內皮功能、炎癥、氧化應激、纖溶和斑塊穩定性都有不利影響，導致血栓形成和CVD發生。Lp-PLA2基因遺傳變異可增加脂蛋白水平，同時也會增加冠心病發病的風險。A379V是Lp-PLA2上的一個重要基因位點，相關研究認為該位點突變能夠影響Lp-PLA2的活性，但由于地域、民族等因素的影響，Lp-PLA2與漢族人群MI的發生率是否相關尚未有定論。從本次研究數據來看，觀察組患者Lp-PLA2的A379V位點的CC型基因頻率降低，而CT、TT型基因頻率增加，與對照組的等位基因也有明顯差異（P<0.05），而且兩組受檢者的血脂水平、Lp-PLA2水平也有顯著差異（P<0.05），這說明Lp-PLA2的A379V位點基因突變可能會影響機體的血脂水平，該部分基因分型具有作為高脂血癥人群MI發生的預測指標。從多因素logistics回歸分析結果來看，機體的Lp-PLA2水平和基因型是導致MI發生的獨立危險因素，進一步提示Lp-PLA2的A379V位點的基因突變與MI密切相關。

綜上所述，Lp-PLA2基因多態性與心肌梗死的發生密切相關，Lp-PLA2基因A379V位點突變可能是導致心肌梗死發生的重要原因。目前蛋白調控參與心血管疾病發展，同時基因調控蛋白發生，我們以期希望從基因水平上，研究蛋白表達，來進一步研究心血管疾病的發病機制，為心血管疾病的診治提供策略參考。

參考文獻

[1]馬賀，張家禧，高雯.心肌橋近段冠狀動脈粥樣硬化性狹窄臨床特點及危險因素研究[J].中國循證心血管醫學，2017，9（6）：748-750.

[2]Masatoshi F，Tatsuya Y，Fazlul KM，etal.SIRT7 has a critical role in bone formation by regulating lysine acylation of SP7/Osterix[J].Nat Commun，2018，9（1）：2833.

[3]Vazquez BN，Blengini CS，Hernandez Y，etal.SIRT7 promotes chromosome synapsis during prophase I of female meiosis[J].Chromosoma，2019，128（3）：2833.

[4]中華醫學會心血管病學分會，中華心血管病雜志編輯委員會.急性ST段抬高型心肌梗死診斷和治療指南（2019）[J].中華心血管病雜志，2019，47（10）：766-783.

[5]中華醫學會心血管病學分會，中華心血管病雜志編輯委員會.非ST段抬高型急性冠狀動脈綜合征診斷和治療指南（2016）[J].中華心血管病雜志，2017，45（5）：359-376.

[6]Persic V， Raljevic D， Markova-Car E， etal. Vitamin D-binding protein （rs4588） T/T genotype is associated with anteroseptal myocardial infarction in coronary artery disease patients.Ann Transl Med.2019，7（16）：374.