菊花筒儲存法在生殖中心胚胎凍存管理中的應用

李明明，熊豪森，丁媛

(鄭州大學第一附屬醫院 生殖醫學中心，河南 鄭州 450052)

胚胎冷凍保存是指將胚胎放置于-196 ℃的液氮環境中保存，使細胞新陳代謝和分裂暫時停止，從而達到長期保存的目的[1-2]。近年來，隨著體外受精-胚胎移植周期數的不斷增長，以及促排卵方案和實驗室技術的改善，加之對于生育力保存的重視、避免IVF的并發癥和一些特殊技術的需要，使得冷凍胚胎數量不斷增加[3-5]，占用各生殖中心大量的醫療資源(液氮、液氮罐、冷凍室面積等)。鄭州大學第一附屬醫院生殖醫學中心始建于1997年，包括新老兩個院區，設立有3個培養室(培養室Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)，至目前已使用近百個液氮罐。隨著胚胎凍存空間的日趨飽和及編排冷凍位置的復雜化，給輔助生殖中心的實際工作帶來了一定的難題，胚胎凍存管理已經成為生殖中心日常工作的重要組成部分[6]。在護理人力配備未增加的情況下，如何優質高效完善胚胎凍存管理顯得尤為重要。為解決上述問題，鄭州大學第一附屬醫院生殖醫學中心自2016年12月4日開始引進菊花筒代替常規鋁制支架用于裝載冷凍載桿，探討其效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料鄭州大學第一附屬醫院生殖醫學中心實驗室責任護士共3名，其中本科2名，碩士1名，職稱均為主管護師，工齡>9 a且熟練掌握實驗室冷凍載桿編桿原則及方法。本研究選取2016年1月5日至2021年1月26日在鄭州大學第一附屬醫院生殖醫學中心培養室Ⅰ所使用的液氮罐(編號28-43)中提籃為研究對象。納入標準：裝載載桿從空至滿連續使用的鋁制支架/菊花筒提籃。排除標準：經整理舊液氮罐，由菊花筒替換原有鋁制支架再次使用的提籃(菊花筒內含原來鋁制支架中的冷凍載桿)。最后符合標準的提籃共124提，其中鋁制支架占58提，菊花筒占66提。收集每提容納載桿數及平均每次編排冷凍位置時間。

1.2 儲存方法

1.2.1鋁制支架儲存法 (1)特點。借助鋁制支架加套管的儲存單元來存放載桿[7]，每一套管能放置5根左右載桿(不同患者可用不同顏色載桿區分，載桿尾端粘貼含患者信息的冷凍標簽)。見圖1A～1B。每提籃可放置23個左右支架，見圖1C。使用前將醫用橡皮膏膠布裁剪出適當大小，粘貼在支架頭端，用圓珠筆或中性筆在膠布上標記支架編號(編號順序為：A1、B1、C1……X1、Y1、Z1，A2、B2、C2……X2、Y2、Z2，A3、B3、C3……X3、Y3、Z3……)。如患者凍存胚胎數較多，需使用2個或2個以上支架，可在每個支架編號后依次加入數字①、②、③……，如P355①、P355②。每提籃最終放置支架數量及每支架編號數字均不固定，前者與支架排列方向及位置相關，后者與患者胚胎形成及凍存數量相關，故不適宜提前設置EXCEL表格進行胚胎冷凍位置編輯。(2)編排步驟。由實驗室責任護士嚴格按照鋁制支架使用標準操作程序進行編排。①將當日需凍胚患者基本信息(姓名、年齡、病歷號、受精方式、撿卵日期、冷凍日期、胚胎級別等)登記到胚胎冷凍保存位置本。②對患者胚胎存放位置及使用支架進行編號，將冷凍信息(載桿數、冷凍罐號、提籃號、支架號/筒色、載桿顏色等)登記在胚胎冷凍保存位置本。③標記鋁制支架編號。如編號為首次使用，將支架頭端粘貼橡皮膏膠布并用圓珠筆或中性筆寫上編號。如支架編號非首次使用(即液氮罐中存在粘貼橡皮膏膠布的對應編號支架)，可直接用記號筆在支架頭端標記編號(無需再粘貼膠布)，作為中轉支架臨時裝載載桿，待凍胚放入液氮罐對應提籃及粘貼橡皮膏膠布的支架套管中，取出臨時支架，放入儲物筐集中擦洗后可再次使用。

A為冷凍標簽及載桿；B為鋁制支架結構；C為液氮罐提籃中的鋁制支架。

1.2.2菊花筒儲存法 (1)特點。菊花筒是由白色筒杯(外層)、11種不同顏色的扇環形管(中間層)和白色圓柱狀管(內層)組成，11種不同顏色的扇環形管顏色為共同認知的黑、綠、棕、藍、青、紫、黃、橙、粉、灰、紅，見圖2A。每個扇環形管可放置15根左右載桿(不同患者可用不同顏色載桿區分，載桿尾端粘貼含患者信息的冷凍標簽)。每個提籃可上下放置2層菊花筒，使用時先在提籃內放置一菊花筒，滿載后，再放另一菊花筒置于上層。防止菊花筒存放位置混淆，可在每個菊花筒啟用時，用記號筆在菊花筒最外層白色筒杯位置標記存放位置，例如：“I-35-1-上”代表培養室I中35號液氮罐的第1提籃上層扇環形管位置，見圖2B～2C。實驗室人員取放載桿時，可使用持物鉗將菊花筒臨時放入可移動液氮盒內，集中取放載桿結束后，再將菊花筒進行歸位。因菊花筒扇環形管位置及數量固定，可將菊花筒胚胎冷凍位置制作成EXCEL表格。(2)編排步驟。由實驗室責任護士嚴格按照菊花筒使用標準操作程序進行編排。①方法同鋁制支架儲存法。②打開菊花筒存放位置及用量EXCEL表格，根據扇環形管顏色(筒色)、載桿顏色、剩余空間數等編輯凍胚位置，同時將冷凍信息登記在胚胎冷凍保存位置本。

A為菊花筒結構；B為菊花筒存放位置標識；C為液氮罐提籃中的菊花筒。

1.3 觀察指標及評價標準

1.3.1容納冷凍載桿數 鄭州大學第一附屬醫院生殖醫學中心2016年1月5日及2016年12月3日凍胚使用鋁制支架儲存法，每提所容納載桿數通過培養室胚胎冷凍保存位置本進行登記。2016年12月4日至2021年1月26日使用菊花筒儲存法，在EXCEL表中設置固定格式，將每日所用載桿數填入表格，自動計算，最后將上下兩層菊花筒載桿數相加即為每提籃總數。

1.3.2編排冷凍位置時間 由負責編排冷凍位置的責任護士記錄每提籃從空至滿使用天數及每日編排冷凍位置用時，如當日使用2個提籃盛放支架/菊花筒(先用的提籃滿載，需重新啟用另一提籃)，則將上述兩項數據均記錄在當日編排冷凍位置較多的提籃。因每提籃使用天數不同，本研究取每提籃每日編排冷凍位置用時平均值(以下簡稱平均值)作為觀察指標。具體過程如下。(1)鋁制支架儲存法。從責任護士開始編排當日第1例患者冷凍信息計時，至所有患者冷凍信息編排結束及所使用鋁制支架(含粘貼橡皮膏膠布和未粘貼橡皮膏膠布兩種支架)編號標記完為止，連續記錄至各提籃滿載。(2)菊花筒儲存法。從責任護士開始編排當日第1例患者冷凍信息計時，至所有患者冷凍信息編排結束并在菊花筒存放位置及用量EXCEL表格登記完為止，連續記錄至各提籃滿載。(3)數據計算。每提籃每日編排冷凍位置用時總和除以每提籃使用天數為平均值，以min為單位。

2 結果

菊花筒儲存組每提載桿數多于鋁制支架儲存組，每次編排冷凍位置平均用時短于鋁制支架儲存組(P<0.05)。見表1。

表1 兩種方法每提籃容納載桿數和每次編排冷凍位置平均用時比較

3 討論

研究結果顯示，菊花筒容納載桿數約是鋁制支架的2.7倍(均滿載)。隨著體外受精-胚胎移植周期數的不斷增長，冷凍胚胎數量的增加，菊花筒儲存法在空間利用度和容納載桿數等方面優勢日趨顯著。自2016年12月4日起，除新增液氮罐全部配備菊花筒外，本中心對舊液氮罐中已經多次進行胚胎凍融解凍移植的提籃，逐步使用菊花筒替換鋁制支架，即選取菊花筒下層部分扇環形管用于存放之前剩余胚胎，下層其余扇環形管以及上層全部扇環形管均可再次放置新冷凍胚胎載桿。利用菊花筒替換鋁制支架，2019—2020年新凍胚胎大部分存放在舊液氮罐中，節減了近2 a的液氮罐使用量，延緩了冷凍室面積飽和進程。

從表1可以看出，菊花筒儲存法編排冷凍位置用時少于鋁制支架儲存法。使用鋁制支架儲存法，因每一支架容納載桿數較少(一般不超過5根)，緩存空間較小。責任護士在編排冷凍位置時，不僅要登記患者第3天冷凍胚胎個數及載桿數，還要根據第3天胚胎質量，預測第5天或第6天可能形成囊胚數，耗時較長。另外隨著促排卵方案和實驗室技術的改進[8-9]，很多患者凍存胚胎數較多，多數患者胚胎需使用2個或2個以上支架裝載載桿，即同一天需使用多個編號才能完成胚胎位置存放。護理人員在為每個支架粘貼橡皮膏膠布時，手工操作較多，需使用較長時間。使用菊花筒儲存法，每個扇環形管最多可容納19根載桿，緩存空間較大。編排位置時，同一扇環形管可放置多例患者的胚胎冷凍載桿，節省了護理人員頻繁尋找冷凍位置時間。另外，菊花筒是成品，首次使用前已將所需筒杯放入提籃內，編排位置時可直接根據EXCEL表進行編輯，無需手工操作。每筒容納載桿數、載桿顏色及剩余空間數等直觀可視。

傳統的鋁制支架和套管組合的方式進行存儲時，確定罐號和提籃號后，需在整個提籃內查找相應支架編號，且隨著胚胎凍存時間的延長，鋁制支架頭端的橡皮膏膠布字跡會逐漸變淺，使實驗室人員在查詢或挑選胚胎時耗時較長。另外如提籃中存放支架較多，挑選胚胎時鋁制支架凹槽面容易將臨近支架帶出，給工作帶來不便。菊花筒扇環形管均勻排列于筒杯內側并由中心白色圓柱狀管固定，各接觸面平滑且位置固定。因容納載桿數較多，同一患者凍胚均存放在相同扇環形管內。根據詳細位置標識，查找時可直接定位至最后一級位置，即冷凍載桿的顏色和患者信息標識。在實際操作過程中，不僅容易查找患者胚胎，且規避帶出其他位置冷凍載桿。

綜上，相較于鋁制支架儲存法，菊花筒儲存法在空間利用和胚胎凍存管理方面有較大優勢，可有效改善胚胎凍存空間壓力，減少液氮罐用量，節約冷凍室面積，縮短護理人員的有效工作時間，提高工作效率，在實際臨床操作中更加安全、便利，更適用于胚胎庫的管理和實現自動化管理。