一種簡易改良細胞蠟塊制作技術在胸腹腔積液患者診斷與治療中的應用價值

白菊萍 張菊梅

【摘要】目的：探索細胞蠟塊制作技術在胸腹腔積液細胞學診斷中的應用價值。方法：選取我院老年性胸腹腔積液標本129例作為研究對象，均進行常規涂片、液基細胞學制片、細胞蠟塊制作石蠟切片，經染色后進行細胞學檢查。結果：改良細胞蠟塊制作技術操作流程簡單，不需要特殊設備，且能夠有效提升胸腹腔積液惡性細胞檢出率及細胞學檢查的應用范圍，此次研究胸腹腔積液標本129例，經細胞學檢查良性病變91例（70.5%），轉移性腫瘤35例（27.2%），原發性腫瘤3例（2.3%）。結論：胸腹腔積液細胞蠟塊技術避免了傳統細胞學涂片檢查的局限性，通過細胞蠟塊制作技術的實施，使細胞蠟塊成為細胞學檢查通向組織病理及分子病理的橋梁，為臨床疾病的診斷和治療提供更多可靠依據。

【關鍵詞】 ?胸腹腔積液 ?脫落細胞學 ?細胞蠟塊制作 細胞免疫化學 ?靶向治療

中圖分類號：R561.3

胸腹腔積液是晚期或復發惡性腫瘤的嚴重并發癥之一[1]，也是許多惡性腫瘤及一些良性病變的常見臨床表現[2]，對于伴發胸腹腔積液的惡性腫瘤來說，胸腹腔積液細胞學檢查關系到腫瘤的分型、分期、治療方案的選擇和預后判斷等，同時對胸腹腔積液中檢出的惡性腫瘤細胞可進行免疫細胞化學和藥物敏感基因檢測等[3]。胸腹腔積液細胞學檢查，可以初步判定疾病的性質，具有簡便易行，患者痛苦少，不需要特殊設備等優點，是胸腹腔積液患者診斷及鑒別診斷的重要手段之一。隨著微創無創診療及免疫組化、分子生物學等精準施治技術的發展，細胞學檢查在胸腹腔積液患者疾病診斷、鑒別診斷、判斷轉移性腫瘤的組織來源以及為患者提供靶向治療依據等應用中越來越凸顯其重要性[4]，但常規胸腹腔積液細胞涂片檢查的陽性率普遍偏低，加之傳統方法涂片因細胞堆積、分布不均、含紅細胞多、惡性細胞量少[5]，且無法保存有效的診斷細胞成分，繼而無法進行疾病診斷、鑒別診斷及免疫靶向治療所需要的細胞免疫化學、特殊染色、分子基因檢測等，給胸腹腔腫瘤性積液疾病的診斷及鑒別診斷帶來了不少困擾，限制了胸腹腔積液細胞學檢查在臨床中的廣泛應用。胸腹腔積液細胞蠟塊制作技術就是將送檢的胸腹腔積液，通過技術流程的處理，制作成細胞蠟塊，將其細胞成分保存于蠟塊中，從而將細胞蠟塊進行常規石蠟切片、HE染色、細胞免疫化學染色、特殊染色，靶向藥物敏感基因檢測等檢查，判斷胸腹腔積液中細胞的性質、類型，達到對腫瘤細胞精確診斷的技術。經過大量臨床病例的探索研究，分析總結了一種高效、快速、操作流程簡單的細胞蠟塊制作技術，現將技術要點及操作流程介紹如下：

1一般資料與方法

1.1一般資料

選取我院2019年9月—2020年8月送檢的老年性胸腹腔積液細胞學檢查的樣本共129例作為研究對象。年齡55—85歲，男性患者73例，女性患者56例，男女之比約為1.3：1。

1.2主要技術流程及方法

1.2.1標本送檢量

建議臨床盡可能抽取100mL以上的胸腹腔積液送檢，如果抽取的樣本量少于100mL，則應全部送檢。

1.2.2送檢時間的要求

胸腹腔積液離體后半小時內送檢到相關檢查科室處理，如暫時不能送檢應將標本冷藏于1-4℃冰箱內，但冷藏時間不應超過24 h。

1.2.3存放送檢樣本容器的要求

建議存放于硬質不吸水密閉潔凈容器（推薦使用鹽水瓶），不建議使用軟質引流袋存放及送檢。

1.2.4 抗凝與預固定

通常不需要抗凝和預固定處理，但若要長距離轉送或隔日處理則建議使用10%0.106mol/L枸櫞酸鈉或肝素抗凝劑抗凝，并采用50% 酒精與漿膜腔積液1：1混合預固定。

1.2.5細胞蠟塊制作流程與方法

（1）將送檢的胸腹腔積液標本靜止放置20～30 min待自然沉降后，傾去或吸除上清液，留底部液體約100mL進行離心處理，（每份樣本用1～2支離心管），推薦使用具有自動平衡功能的垂直離心機。同時吸取沉淀物進行常規涂片及液基細胞學制片經巴氏染色或HE染色后做對照，如圖1、圖2所示。

（2）離心管建議用50～100 mL一次性尖底離心管進行離心處理，初次離心用2500～3000轉/分轉速離心5min（高轉速，短時間）;如果沉淀物少可重復離心（2000轉/分轉速），離心5 min;如果沉淀物血液含量大于沉淀物的1/2時，建議使用清洗步驟，（即使用1%冰醋酸酒精液處理，并進行第二次離心沉淀，如圖3所示。

（3）離心沉淀完成后，用吸管將上清液吸除，只留沉淀物于離心管底部，然后向離心管沉淀物中加入10%中性福爾馬林液30～50mL，放置振蕩器上輕輕振蕩混勻。

（4）然后將混勻后的沉淀物低速離心（800～1000轉/分）15～20min后，取出離心管放樣本架上靜止固定2 h以上。

（5）待常規取材時用長把小勺從離心管中取出細胞團塊（如果體積較小，需用濾紙包裹），放入包埋盒，如圖4所示，與當日取材后的組織標本進行常規脫水后制片、閱片。

（6）對閱片中細胞學檢出惡性細胞或可疑惡性細胞的切片，用相應的細胞蠟塊切片做細胞免疫化學染色、特殊染色或切取細胞蠟塊組織進行分子病理或靶向基因檢測。細胞蠟塊切片HE染色效果如圖5所示，細胞免疫化學染色效果如圖6所示，（各種染色及分子、靶向基因檢測具體操作方法不在此敘述）。

3研究結果

（1） 129例老年性胸腹腔積液經細胞學檢查良性病變91例（70.5%），轉移性腫瘤35例（27.2%）原發性腫瘤3例（2.3%），檢查結果統計見表1。

（2） 35例惡性胸腹腔積液經免疫組化染色腫瘤分型結果統計見表2。

4討論

細胞蠟塊是進行免疫細胞化學，特殊染色，分子病理及未來研究等檢查的有效檢材，與傳統涂片聯合使用可以提高檢測的敏感性和特異性[6]，此項技術制作細胞蠟塊流程簡單，方法可靠，不需要特殊設備就能有效提高胸腹腔積液細胞學檢查的陽性率和準確性，對檢出的惡性腫瘤細胞不但能夠做到準確分型，而且能夠為患者個體化治療提供精準的檢測依據。

與傳統細胞涂片檢查相比具有以下重要臨床意義：（1）增加了目標細胞的數量、密度，并能使目標細胞得到有效保存，既能重復多次切片檢查，又能輔助腫瘤性積液免疫細胞化學，特殊染色等檢測，有效提高了胸腹腔積液患者腫瘤性疾病診斷的陽性率。（2）對檢出的腫瘤性積液通過免疫細胞化學、特殊染色等檢查對腫瘤細胞類型能夠做到準確分型，為腫瘤患者精準化治療提供更多參考依據。目前胸腹腔積液細胞學的制片方法有傳統手工涂片、液基細胞學制片、細胞學印片等技術[7]，都存在陽性率低和無法進行后續的輔助診斷檢查等諸多弊端，通過此方法將胸腹腔積液標本制作成細胞蠟塊，有效彌補了細胞學檢查的不足，大大提高了胸腹腔積液細胞學檢查的陽性率和應用范圍，為惡性腫瘤患者提供更為準確，有效的診斷及治療依據，值得在癌癥防治工作及臨床醫療機構中大力推廣使用。

參考文獻

[1]隋燕霞，柳雨，蔣娜，等.142例惡性胸水細胞蠟塊的免疫組化檢測及分子病理檢測[J].臨床與實驗病理學雜志，2017，33（3）：292-296.

[2] 嚴俊，江鶯，許惠利.恩度治療惡性胸腹腔積液的研究進展[J].實用癌癥學雜志，2012，27（5）：538-539，5.

[3]羅闊，陳曉品.腫瘤靶向治療的新型細胞載體分析[J].檢驗醫學與臨床，2014，11（4）：524-525.

[4]梁飛，姜敏，德真一等.胸腹腔積液細胞蠟塊在腫瘤來源診斷及肺腺癌基因檢測中的應用價值[J].中國實用醫刊，2019，46（1）：10-13.

[5]劉華軍，鄭奎海.胸腹水脫落細胞學檢查涂片方法的改進[J].中國社區醫師（醫學專業），2012，14（12）：263.

[6] 黃榕芳，何誠，朱偉峰.細胞蠟塊技術與傳統涂片技術在胸腔積液病理診斷中的應用效果比較[J].福建醫藥雜志，2016，38（02）：94-96.

[7]范紅蕓，韓燁，王貝，等.細胞蠟塊對惡性胸腹水的診斷價值[J].中外醫療，2019，38（21）：34-36.