水產(chǎn)品中孔雀石綠的常規(guī)檢測方法

倪 佳

（哈爾濱市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗檢測中心，黑龍江 哈爾濱 150000）

引言

我國有著非常豐富的水產(chǎn)資源，在世界上屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖大國。水產(chǎn)品作為我國城鄉(xiāng)居民攝入動物蛋白的主要來源之一，在居民的生產(chǎn)生活中占據(jù)著極其重要的地位。隨著我國科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，人民生活水平不斷提高，對水產(chǎn)品的需求量也不斷增長。在養(yǎng)殖過程中，為降低生產(chǎn)成本，使用含有激素或者發(fā)生霉變的飼料，濫用抗生素、激素等漁用藥物防治水產(chǎn)動物疾病，導(dǎo)致水產(chǎn)品藥物殘留超標(biāo)，嚴(yán)重危害人類健康。加強(qiáng)水產(chǎn)品中的漁藥檢測就顯得尤為重要，本文闡述及歸納了水產(chǎn)品中孔雀石綠檢測的常用方法，為水產(chǎn)品藥物殘留檢測提供重要依據(jù)，對保障人類食品安全具有一定的意義。

1.孔雀石綠的常規(guī)檢測方法

1.1 前處理方法

1.1.1 液液萃取

液液萃取也稱溶劑萃取或抽提，是指利用在溶液系統(tǒng)中兩種或多種物質(zhì)組分溶解度或分配系數(shù)不同的原理，使溶質(zhì)物質(zhì)從其中一種溶劑中轉(zhuǎn)移到另一溶劑中提取方法。通過靜置過程，將出現(xiàn)分層現(xiàn)象的兩種互不相容的物質(zhì)進(jìn)行分離的操作，叫做分液。提取孔雀石綠的過程中常用的萃取溶液是二氯甲烷和無水乙醇。它的優(yōu)點是可以在常溫條件下進(jìn)行，操作較為方便，不需要特殊的實驗裝置和操作技術(shù)；缺點是有機(jī)溶劑的消耗量較大，揮發(fā)性較強(qiáng)的溶劑應(yīng)盡量在通風(fēng)櫥內(nèi)操作并做好個人防護(hù)工作。

1.1.2 固相萃取

固相萃取是于20世紀(jì)80年代發(fā)展起來的一種樣品前處理技術(shù)，通常與液相色譜技術(shù)相結(jié)合，主要用于樣品前處理的分離、提純和濃縮過程。它的原理是通過固相萃取小柱中的固體吸附劑吸附液體中的目標(biāo)化合物，將樣品的基質(zhì)與干擾物有效的分離，再用洗脫液進(jìn)行洗脫或者通過加熱過程使目標(biāo)化合物解吸附，最后經(jīng)過氮吹或者旋蒸，達(dá)到濃縮與富集目標(biāo)化合物的目的。固相萃取的優(yōu)點是操作簡單，分離時間短，試劑消耗量少，可有效提高被測樣品的回收率，對于痕量分析物有較為出色的檢測能力；缺點是成本較高，屬于一次性使用的實驗耗材，同時需要專業(yè)人員進(jìn)行方法開發(fā)。

1.1.3 分散固相萃取凈化技術(shù)

分散固相萃取凈化技術(shù)也稱為QuEChERS技術(shù)，是2003年由美國農(nóng)業(yè)部Anastassiades等人開發(fā)，提出之后又經(jīng)過多次驗證和方法改進(jìn)正式確立。QuEChERS是由幾個英文單詞首字母縮寫而成，即Quick，Easy，Cheap，Effective，Rugged和Safe，代表快速，簡單，廉價，高效，耐受和安全的含義。它的原理與固相萃取相似，通過吸附劑填料吸附樣品基質(zhì)中的雜質(zhì)，達(dá)到提純凈化的目的。QuEChERS主要是針對水果蔬菜中的農(nóng)藥殘留檢測而建立，但由于其操作簡便、快捷的特點，近年來也逐漸應(yīng)用于獸藥殘留檢測領(lǐng)域。

1.2 分析檢測技術(shù)

1.2.1 氣相色譜法

氣相色譜法是指用氣體作為流動相的一種色譜分析方法。在實際工作中，只要是氣化不分解并且高溫條件下穩(wěn)定的的物質(zhì)，基本上都可以用氣相色譜法進(jìn)行檢測。對于一些難以氣化或者加熱條件下不穩(wěn)定的物質(zhì)，可以通過化學(xué)衍生的方法，利用氣相色譜法進(jìn)行檢測。氣相色譜法的優(yōu)點是分離速度快，靈敏度高，應(yīng)用范圍較廣，可以分析沸點相近或高沸點的物質(zhì)和固體樣品。缺點是在進(jìn)行定性分析時，需要用已知物與檢測物的色譜峰進(jìn)行對比，或者要與質(zhì)譜進(jìn)行聯(lián)用，才能獲得較為準(zhǔn)確的結(jié)果；定量分析時，需要用標(biāo)準(zhǔn)品已知物對檢測樣品的數(shù)據(jù)進(jìn)行校正。

氣相色譜儀的檢測器種類繁多，目前常用的有：電子捕獲檢測器（ECD）、火焰光度檢測器（FPD）、熱導(dǎo)檢測器（TCD）、氫火焰離子化檢測器（FID）、氮磷檢測器（NPD）等。氣相色譜法的主要應(yīng)用是檢測農(nóng)藥殘留中的有機(jī)氯和有機(jī)磷類農(nóng)藥，食品添加劑、生物毒素和生物堿類的藥品等。

1.2.2 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法是通過特殊“接口”將氣相色譜儀與質(zhì)譜聯(lián)接起來，既可以利用氣相色譜儀中毛細(xì)管的高分離能力，分離出樣品中的各個組分，又利用質(zhì)譜儀準(zhǔn)確鑒定出化合物的結(jié)構(gòu)，對各組分同時進(jìn)行定性與定量分析。其具有獨立、穩(wěn)定、高效的離子源（EI）系統(tǒng)，使檢測工作更加準(zhǔn)確高效的同時，實現(xiàn)了更好的重現(xiàn)性。目前，氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)主要應(yīng)用在有機(jī)磷、有機(jī)氯和氨基甲酸酯類的農(nóng)藥殘留檢測，也逐步用于部分獸藥殘留的檢測分析，例如動物源性食品中磺胺類藥物，水產(chǎn)品中的氯霉素和孔雀石綠的檢測等。

1.2.3 高效液相色譜法

高效液相色譜法是指利用高壓輸液系統(tǒng)，以液體作為流動相的一種色譜分析技術(shù)。流動相可以是組分單一的溶劑或者是具有不同比例的混合溶液、緩沖液等。為了提高檢測物質(zhì)的分離效果，可以通過調(diào)節(jié)流動相的pH值或溶液組成配比來實現(xiàn)。高效液相色譜非常適合分離分析不易揮發(fā)和對加熱條件敏感的物質(zhì)，以及離子型化合物和生物大分子。常用的檢測器有紫外吸收檢測器（UV），熒光檢測器（FD），示差折光檢測器，光電二極管陣列檢測器（PDA）等。

1.2.4 高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法適合高沸點及熱不穩(wěn)定性物質(zhì)的分析，具有高靈敏度和高選擇性的優(yōu)點，檢測限也進(jìn)一步提高。在一定程度上，可以彌補(bǔ)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的不足。目前是分離、鑒定和檢測多組分化合物的理想方法。現(xiàn)在液質(zhì)廣泛應(yīng)用于獸藥殘留檢測領(lǐng)域中，例如磺胺類、喹諾酮類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類和孔雀石綠。

2.研究目的與意義

孔雀石綠作為一種三苯甲烷類化合物，在許多研究中表明，三苯甲烷容易引起生命體器官組織脂質(zhì)過氧化，易使器官內(nèi)的氧壓發(fā)生變化，加速細(xì)胞的死亡，從而引發(fā)腫瘤。可致肝癌、甲狀腺癌，在動物試驗中發(fā)現(xiàn)，其對妊娠中的兔子有致畸作用，對動物肝、腎、心、脾、肺等器官組織引起中毒反應(yīng)。同時，在針對孔雀石綠和隱色孔雀石綠的致基因突變的試驗中，結(jié)果均為陽性。目前，已有報道稱從生病的鮭魚中分離出了能耐受孔雀石綠的菌株。耐藥性的產(chǎn)生導(dǎo)致生產(chǎn)過程中孔雀石綠的用藥量逐漸增大，人類通過日常生活中食用水產(chǎn)品這一渠道，很容易獲得具有抗藥性的細(xì)菌，使得人類致病菌抗藥性的能力增強(qiáng)，從而對人類的身體健康造成嚴(yán)重威脅。所以，對孔雀石綠的檢測研究刻不容緩，目前也已有較為成熟的標(biāo)準(zhǔn)方法，如何在現(xiàn)有的檢測方法基礎(chǔ)上，優(yōu)化改良更加高效可靠的檢測方法至關(guān)重要，也是未來漁藥獸藥殘留檢測技術(shù)發(fā)展的重要方向。