足跟血干血斑毛細管電泳技術在新生兒期靜止型α-珠蛋白生成障礙性貧血篩查中的應用價值

王瑾琳

河南省人民醫院/鄭州大學人民醫院檢驗科，河南鄭州 450000

α-珠蛋白生成障礙性貧血(以下簡稱“地貧”)為最常見的常染色體隱性遺傳病之一。其致病機制是α-珠蛋白基因缺失或非缺失突變，造成α-珠蛋白鏈合成受到抑制，引發遺傳性溶血性貧血[1-2]。α-地貧在地中海和東南亞發病率較高，我國發病人群多集中在南方地區[3]。α-地貧若未被及時發現、治療，隨著病情進展，后期可引發較嚴重的慢性溶血性貧血，繼發溶血危象、骨骼變化、生長發育障礙、重度貧血等，最終患者只能通過輸血以維持生命[4]。因此，及時、有效的診斷對α-地貧患者的預后尤為重要。新生兒期，患兒血液血紅蛋白(Hb) Bart′s水平為α-地貧篩查的敏感指標[5]。鑒于此，本研究將足跟血干血斑毛細管電泳檢測用于新生兒期α-地貧篩查，以探討其應用價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2018年5月至2021年2月于本院治療的182例靜止型α-地貧患兒臨床資料。納入研究的患兒：男99例，女83例；出生時胎齡37～42周，平均(39.68±1.02)周。納入標準：(1)新生兒出生后3～5 d內有采集足跟血進行檢測；(2)家屬對本研究知情，并簽署知情同意書；(3)血斑直徑>8 mm且有良好滲透性。排除標準：(1)伴有其他血液疾病；(2)有免疫功能障礙；(3)合并傳染性疾病。

1.2方法

1.2.1足跟血血斑標本采集 采集新生兒出生3～5 d時的足跟內或外側血，血液滴于采血濾紙上，注意每個血斑要求大于8 mm，均由正面滲透至背面，共采集3個血斑。晾干后置入塑料袋內，放入4 ℃冰箱密封保存。將標本送至篩查中心進行檢測。

1.2.2干血斑毛細管電泳技術 采用全自動干血片毛細管電泳儀(型號：Capillarys 2 Neeonat FAST)以及配套電泳試劑盒開展檢測工作；采用專用打孔鉗取直徑3.8 mm血斑標本置入樣品孔中，每孔加50 μL蒸餾水，置于4 ℃冰箱存放2～72 h；進行血紅蛋白(Hb)電泳，測定Hb各成分的水平。

1.3觀察指標 (1)分析新生兒期靜止型α-地貧篩查的檢出率。(2)分析新生兒期各種靜止型α-地貧患兒Hb Bart′s水平。

1.4統計學處理 采用SPSS22.0統計軟件對數據進行分析；經正態性檢驗，Hb Bart′s水平呈偏態分布，計量資料用[M(P25，P75)]表示，多組間比較采用多個獨立樣本非參數檢驗(Kruskal-Wallis檢驗)，并進行各組間兩兩比較；計數資料以百分率表示，率的比較采用χ2檢驗并進行兩兩比較；P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1靜止型α-地貧篩查的檢出率 新生兒期靜止型α-地貧檢出率為58.24%(106/182)。5種靜止型α-地貧中：αWSα/αα型的檢出率為0.00%；-α3.7α/αα型的檢出率為38.71%(24/62)；-α4.2α/αα型的檢出率為44.00%(11/25)；αQSα/αα型的檢出率為80.00%(8/10)；αCSα/αα型的檢出率為95.45%(63/66)，其檢出率最高。

2.2新生兒期4種靜止型α-地貧患兒的Hb Bart′s水平 -α3.7α/αα、-α4.2α/αα、αCSα/αα、αQSα/αα型患兒Hb Bart′s水平分別為0.30(0.30，0.40)%、0.36(0.30，0.49)%、0.89(0.68，1.11)%、0.63(0.47，0.78)%。以上4種靜止型α-地貧患兒的Hb Bart′s水平比較差異有統計學意義(H=71.29，P<0.001)。兩兩比較：αCSα/αα型患兒Hb Bart′s水平高于αQSα/αα、-α4.2α/αα、-α3.7α/αα型患兒；αQSα/αα型患兒Hb Bart′s水平高于-α4.2α/αα、-α3.7α/αα型患兒(P<0.05)；-α4.2α/αα型患兒Hb Bart′s水平與-α3.7α/αα型患兒比較差異無統計學意義(P>0.05)。新生兒期4種靜止型α-地貧患兒Hb Bart′s水平分布見表1。

表1 新生兒期4種靜止型α-地貧患兒Hb Bart′s水平分布[n(%)]

3 討 論

地貧是全球病例數量最多、分布最廣的一種單基因病[6-7]。α-地貧臨床表現具有高度遺傳異質性，診斷金標準為基因檢測，但該方法煩瑣，且對設備的要求較高，故臨床還需尋找更為簡便且準確的α-地貧篩查方法。

現階段，臨床診斷地貧的常用篩查手段包括血常規檢測結合紅細胞脆性檢測、Hb電泳法、高效液相色譜法等[8]。經臨床實踐證實，血常規檢測結合紅細胞脆性檢測應用于地貧篩查診斷，準確性不高，漏檢現象時常發生，臨床應用相對較少；高效液相色譜法篩查地貧易受到其他因素干擾，對操作要求較高，且檢測花費昂貴，臨床適用范圍較小；毛細管電泳技術常用于Hb檢測，具備普適性，在地貧篩查中應用較為廣泛，為目前較適合用于新生兒地貧篩查的技術，通過檢測新生兒Hb中區帶，可輔助臨床判斷地貧[9]。有研究報道，地貧患者Hb Bart′s區帶增高，但也存在未見Hb Bart′s區帶增高的α-地貧患者[10]。調查顯示，新生兒期應用臍帶血進行Hb電泳分析Hb Bart′s水平對α-地貧的篩查結果與基因檢測結果的符合率可達90%，但對成人或兒童α-地貧的診斷符合率較低，故該項檢測應選擇在新生兒時期進行[11]。與以往研究中采用臍帶血為篩查標本不同，本研究采用足跟血干血斑標本進行檢測，與臍帶血相比，具有標本保存簡便、運輸方便的優勢，在新生兒出生3～5 d內即實施α-地貧篩查，有助于臨床及早發現患者，對早期治療、改善預后有重要意義。

靜止型α-地貧包括缺失型、非缺失型(又稱突變型)，常見缺失型有-α3.7、-α4.2，主要為α1或α2珠蛋白基因片段缺失；常見非缺失型突變有αCS、αQS、αWS[12]。本研究顯示，新生兒期靜止型α-地貧中的缺失型(除αWS外)患兒Hb Bart′s水平比突變型低，位于α1珠蛋白基因右側的缺失型(-α3.7)患兒的Hb Bart′s水平低于位于α2珠蛋白基因左側缺失型(-α4.2)患兒的Hb Bart′s水平。這說明Hb Bart′s水平與α珠蛋白基因缺失突變類型有關。本研究顯示，缺失型(除αWS外)Hb Bart′s水平中位數低于突變型α-地貧。干血斑毛細管電泳結果顯示，新生兒期靜止型α-地貧中-α3.7α/αα、-α4.2α/αα、αCSα/αα、αQSα/αα型的檢出率分別為38.71%、44.00%、95.45%、80.00%，較為理想；但αWSα/αα型的檢出率為0，導致新生兒期靜止型α-地貧總體檢出率較低(58.24%)。這與αWS未造成嚴重的珠蛋白鏈不平衡有關，臨床還需采用基因檢測的方法進行確診。

綜上所述，足跟血干血斑毛細管電泳技術用于新生兒α-地貧篩查有一定價值，有助于臨床區分缺失與突變的靜止型α-地貧；但對于αWSα/αα型α-地貧難以有效檢出。