高效液相色譜法快速鑒別三七粉品質

陳 博，毛希琴

（大連市食品檢驗檢測院，遼寧 大連 116630）

三七，又名田七、金不換，具有止血散瘀、消腫定痛等功效。根據資料記載，三七常加工成粉末后服用[1]。當三七被加工成粉末則失去了原有的性狀特點，易被摻偽、造假，偽劣難辨。據相關資料報道，三七粉的質量由三七種植時間、個頭大小等因素決定，種植時間越長、個頭越大的三七價格越高。因此，在利益驅使下，部分不良商家會在優質的三七粉中摻入種植時間短、個頭較小的三七粉末，甚至摻入三七葉或三七桿來以次充好，這些摻假或偽劣三七粉單靠感官檢驗很難分辨，目前常見的鑒別方法有薄層色譜法、高效液相色譜法等[2,3]。

研究發現，三七的化學成分包括三七皂苷、人參皂苷、黃酮、多糖類等，其中皂苷類成分是三七的主要藥理活性成分。三七中公認的活性皂苷類成分主要為人參皂苷Rg1、Rb1、Re、Rd和三七皂苷R1

[3]。若三七粉中活性皂苷類成分含量越高，則該三七粉的品質越好。利用高效液相色譜法可對三七粉中主要活性皂苷類成分進行定量分析，因此可用來鑒別三七粉的品質[4-8]。考慮到標物的成本以及縮短分離時間，本研究僅以三七皂苷R1和人參皂苷Re、Rg1、Rb14個化合物作為三七粉品質判定的指標。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 1260 Infinity II 型高效液相色譜儀；XW-80A型旋渦混合器（上海精科實業有限公司）；SK8300GT型超聲波清洗器（上海科導超聲儀器有限公司）；CR22GⅡ型離心機（Hitachi Koki Co.,Ltd）。

1.2 材料與試劑

實驗過程所需的三七樣品來源見表1。

表1 三七樣品來源

三七皂苷R1對照品（批號11745-200415）、人參皂苷Rg1對照品（批號110703-200424）、人參皂苷Re對照品（批號110754-200421）、人參皂苷Rb1對照品（批號110704-200420），均購自中國藥品生物制品檢定所。

甲醇、乙腈、乙酸乙酯均為色譜純試劑，水為純化水。

1.3 樣品處理

將5號樣品洗凈，干燥，粉碎，過150目篩。其余樣品均過150目篩后使用。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:依利特SinoChrom ODS-BP（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動相:以乙腈為流動相A，水為流動相B，按表2的梯度洗脫程序洗脫；流速:1.0 ml/min；檢測波長:220 nm；柱溫:30℃；進樣量:20 μl。

表2 流動相梯度洗脫程序

2.2 對照品溶液的制備

分別精確稱取三七皂苷R1和人參皂苷Rg1、Re、Rb1對照品各2.5 mg于5 ml容量瓶中，用甲醇溶解定容，得三七皂苷R1和人參皂苷Rg1、Re、Rb1濃度分別為0.5 mg/ml的混合對照品儲備液。

2.3 樣品溶液的制備

分別稱取5種三七粉各0.4 g于具塞離心管中，每個樣品按表3所示的提取溶劑從溶劑1→溶劑3依次提取，渦旋混勻，超聲提取10 min，再渦旋混勻，離心，過0.45 μm微孔濾膜，即得樣品溶液1-1、2-1、3-1、4-1、5-1（溶劑1提取）；1-2、2-2、3-2、4-2、5-2（溶劑2提取）；1-3、2-3、3-3、4-3、5-3（溶劑3提取）。

表3 樣品溶液的提取溶劑

2.4 線性關系考察

精密吸取2 μl、5 μl、10 μl、15 μl、20 μl、25 μl混合對照品儲備液分別注入高效液相色譜儀中，按2.1的色譜條件進行測定，記錄各色譜峰峰面積，再以混合對照品溶液的進樣量(μl)為橫坐標、峰面積為縱坐標繪制標準曲線，計算得出線性回歸方程，如表4所示。用高效液相色譜儀在2.1的色譜條件下對混合對照品儲備液進行分析，可見人參皂苷Re和人參皂苷Rg1合并出峰，而三七皂苷R1和人參皂苷Rb1均能達到較好的基線分離。實驗結果表明:各成分線性關系良好（表4）。

表4 混合對照品儲備液線性回歸方程

3 結論與討論

為了對不同三七粉中不同極性化合物的含量進行充分比較，對所有樣品采取3種極性不同的溶劑體系（表3）按順序提取（樣品用1號溶劑提取后，殘渣用2號溶劑繼續提取，最后用3號溶劑提取經2號溶劑提取后的殘渣），再對最終的提取液進行液相色譜分析，得到的色譜分離譜圖如圖1、圖2和圖3所示。

圖1 不同三七樣品在50%甲醇溶液提取條件下的分離譜圖

圖2 不同三七樣品在100%甲醇溶液提取條件下的分離譜圖

圖3 不同三七樣品在甲醇-乙酸乙酯（1+2）混合溶液提取條件下的分離譜圖

在本研究的色譜條件下，三七皂苷R1和人參皂苷Rb1均能達到較好的基線分離，但人參皂苷Re和人參皂苷Rg1合并出峰[8-11]。表明人參皂苷Re和人參皂苷Rb1是2個較難分離的化合物，將2個化合物基線分離需要較長的時間。因本論文只是快速鑒別方法，為了節約分析時間，僅對人參皂苷Re和人參皂苷Rg1進行合并計算，這并不影響對產品品質的判斷。5號樣品通過形狀可判斷為正品三七，因而可以將該樣品的粉末作為優質品進行對照，比較其他4個不同來源三七粉的質量。

從3種不同極性提取液的提取條件下5個樣品的色譜分離譜圖來看，100%甲醇條件下皂苷類化合物已經基本提取完全，甲醇-乙酸乙酯（1+2）混合溶液中僅有少量的人參皂苷Rb1，三七皂苷R1、人參皂苷Re+Rg1已經基本沒有。因此，如果以4種活性皂苷類成分作為三七粉質量鑒別的指標，用100%甲醇作為提取溶劑即可。

比較不同極性提取液的提取條件下5個樣品的色譜分離譜圖，可以看出，1號、2號、3號樣品與5號樣品相比，3號樣品4種活性皂苷類成分的含量最高，說明質量最優。1號、2號樣品的品質也不錯。但是4號樣品中幾乎沒有活性皂苷類成分，基本可以判定為偽品。

實驗證明，可以用100%甲醇作為提取條件提取三七粉，并通過高效液相色譜法對提取液中三七皂苷R1和人參皂苷Re、Rg1、Rb14個化合物定量分析的結果作為三七粉品質判定的指標。