蒼耳不同部位提取物抑菌活性比較

肖家軍，童貫和，謝振榮，焦一瑩，鄭春艷，方曉陽

(1.淮南師范學院生命科學系，安徽淮南232001;2.中國科學院北京研究生院，北京100049)

蒼耳不同部位提取物抑菌活性比較

肖家軍1，童貫和1，謝振榮1，焦一瑩1，鄭春艷1，方曉陽2

(1.淮南師范學院生命科學系，安徽淮南232001;2.中國科學院北京研究生院，北京100049)

主要考察了蒼耳各部位提取物對常見菌種的抗菌活性，比較了蒼耳四個部位(根、莖、葉、子)三種提取方式所得提取物對大腸桿菌等微生物抑制活性的差異。實驗結果表明，蒼耳各部位不同方式提取物對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和微球菌抑制作用較強，酵母菌次之;各部位中蒼耳葉的提取物表現了較寬的抑菌譜和較強的抑菌作用。

蒼耳，抑菌活性，比較

蒼耳(Xanthium)是菊科一年生草本植物，俗稱羊帶歸，療瘡草，野茄子，粘粘葵等。全球蒼耳屬植物約有25種，我國有4種及2變種，分布于全國各地，資源極其豐富［1］。蒼耳可全草入藥，蒼耳根具有清熱、解毒、利濕之功效;蒼耳莖葉可祛風、除濕、解毒、鎮痛等;蒼耳子為中國歷版藥典收載品種，其味辛苦，性溫，具有散風除濕，通鼻竅，止痛之功效，是歷代治療鼻淵及頭痛的要藥［2］。目前對蒼耳的研究主要集中在對蒼耳子方面［3－6］，對蒼耳全草的研究相對較少。在中國歷代醫書中，有關蒼耳的記載十分豐富，國內對蒼耳的研究主要以中醫臨床應用及藥效為主［8－9］，國外則更側重于化學物質的分離提純及單化合物的藥理活性及毒性的研究［10－12］，在前人研究的基礎上，進一步挖掘蒼耳的藥用價值，無論對農業還是人類健康都有重要意義。本實驗主要通過對蒼耳全草不同部位不同提取方式抑菌效果的分析，為進一步開發蒼耳的藥用價值，純化蒼耳的活性成分提供數據支持。

1 材料與方法

1.1 材料與設備

蒼耳樣品 于2009年10月份采自安徽省淮南市上窯鎮，經安徽師范大學王友保教授鑒定為蒙古蒼耳。采回的蒼耳洗凈，將根、莖、葉、子分離置陰涼處晾干，然后置電熱鼓風箱烘干，再分別放入粉碎機中粉碎，過40目篩，密封備用;蛋白胨、瓊脂粉、牛肉膏 均由北京奧博星生物技術有限公司生產;其它化學試劑 均為分析純;大腸桿菌(Escherichia coli)、微球菌(Micrococcus Cohn)、放線菌(Actinomycete)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和酵母菌(Saccharomyces cerevisiae) 均由淮南師范學院微生物實驗室提供。

RE3000A旋轉蒸發儀 上海亞榮生化儀器公司;鼓風干燥箱 上海福瑪實驗設備有限公司;LDZX－40BI型立式自動電熱壓力蒸汽滅菌器 上海申安醫療器械廠;HPX－Ⅲ系列恒溫恒濕箱 上海新苗醫療器械制造有限公司;SW－CJ－1D型單人凈化工作臺 蘇州凈化設備有限公司;FZ102型微型植物粉碎機 天津市泰斯特儀器有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 蒼耳根、莖、葉、子提取物的制備 結合生產常用提取方法，采用去離子水、酸水、乙醇作為提取溶劑，分別提取各部位成分。a.水提取法:精確稱取蒼耳4種粉碎物各10g于三角燒瓶中，加15倍去離子水，煎煮2次，每次30min，合并濾液，濃縮至含生藥1g/mL，滅菌備用。b.乙醇提取法:精確稱取蒼耳的4種粉碎物各10g于三角燒瓶中，加15倍無水乙醇浸提2次，浸提時間分別是48、24h，合并濾液，蒸餾回收乙醇。膏狀物用去離子水稀釋至含生藥1g/mL，滅菌備用。c.酸水提取法:過程同a，并調藥液pH至7.0。

表1 蒼耳根、莖、葉和子的去離子水提取液的抑菌作用±s(mm)

表1 蒼耳根、莖、葉和子的去離子水提取液的抑菌作用±s(mm)

注:#號表示藥物濃度為500mg/mL時測的抑菌直徑;無#號表示藥物濃度為125mg/mL時測的抑菌直徑，表2、表3同。

供試菌種抑菌圈的直徑根提取液 莖提取液 葉提取液 子提取液大腸桿菌－11.0±0.85 9.75±0.23 10.1±0.65 9.80±0.20微球菌 10.5±0.54 12.5±1.64 13.1±0.32 9.50±0.28金黃色葡萄球菌 12.1±0.60 9.72±0.35 13.4±0.50 －放線菌# － 9.67±0.26 9.03±0.45 11.8±0.75酵母菌9.70±0.70 9.80±0.46 －

表2 蒼耳根、莖、葉和子的酸水提取液的抑菌作用ˉ±s(mm)

表2 蒼耳根、莖、葉和子的酸水提取液的抑菌作用ˉ±s(mm)

供試菌種抑菌圈的直徑11.0±0.10 9.72±0.23 10.50±0.50 9.70±0.14微球菌 － 9.83±0.68 12.7±1.50 9.74±0.23金黃色葡萄球菌 11.6±2.18 9.16±0.36 9.08±0.34 9.20±0.32放線菌# － － － 11.5±0.95酵母菌根提取液 莖提取液 葉提取液 子提取液大腸桿菌－－10.8±1.20 －

表3 蒼耳根、莖、葉和子的乙醇提取液的抑菌作用ˉ±s(mm)

表3 蒼耳根、莖、葉和子的乙醇提取液的抑菌作用ˉ±s(mm)

供試菌種抑菌圈的直徑12.0±0.50 9.80±0.20 9.80±0.23 10.0±0.33微球菌 － 10.8±1.16 9.80±0.25 9.83±0.95金黃色葡萄球菌 9.41±0.42 10.1±0.24 11.3±0.53 9.26±0.84放線菌# － － － －酵母菌根提取液 莖提取液 葉提取液 子提取液大腸桿菌－－9.20±0.20 －

1.2.2 蒼耳根、莖、葉、子提取物的稀釋 采用連續倍比稀釋法［7］。以蒼耳根水提為例，取蒼耳根水提取物1mL，用3mL LB液體培養基稀釋4倍，取40支潔凈離心管，分成4組，每組10支，用標簽紙標記。按照倍比稀釋法依次稀釋到第9支離心管，第10支離心管僅加1.0mL無菌水，作為對照。

1.2.3 菌懸液的制備 將各菌種取出活化培養2次。采用文獻［7］方法，將活化的菌種各取適量接種于1.0mL的液體培養基中，37℃下細菌培養8～16h，酵母菌28℃下培養48h。取培養菌液0.1mL于100mL的三角燒瓶中，并加液體培養基至100mL，稀釋1000倍，使菌懸液含菌約為105CFU/mL。

1.2.4 抑菌活性和MIC的測定 在垂直凈化工作臺中，取已滅菌直徑為9mm的圓形濾紙片于10個不同藥物濃度梯度的離心管中浸泡5min。從制備的菌懸液中各取0.1mL涂布在10個培養皿中的固體培養基上，制成含菌平板。按藥物濃度梯度從高到低每個離心管挑取6片濾紙片貼在對應的平板上，第10號培養皿做為空白對照。將上述貼好濾紙片的培養皿倒置于恒溫恒濕箱，37℃下細菌培養18～24h，酵母菌28℃下培養48h，取出培養皿測定濾紙片的抑菌圈大小，取每皿中六個濾紙片的測量值，作ˉx±s計算，比較抑菌活性。同時，依據每組培養皿中藥物的稀釋梯度，參照含藥濾紙片抑菌圈的有無，進一步確定蒼耳各部位不同提取方法提取液抑菌的MIC值［7］。全部實驗重復3次。

2 結果與分析

2.1 蒼耳不同部位去離子水提取液、酸水提取液和乙醇提取液的抑菌活性

分別以去離子水、酸水和乙醇為提取劑，對蒼耳根、莖、葉、子的成分進行提取，考察蒼耳四個部位三種提取液對各菌種的抑制活性，結果見表1～表3。

從表1可以看出，蒼耳各部位水提取物對細菌有相對較強的抑制作用，對真菌抑制效果較差。在細菌中，對大腸桿菌、微球菌和金黃色葡萄球菌的抑制作用相對較好，而對放線菌較差。

從表2可以看出，在125mg/mL時除蒼耳葉外，其余各部位酸水提取物對酵母菌無抑制效果。相對而言，在相同條件下，從蒼耳葉子和種子中的提取物有相對較強的抑菌活性。

從表3可以看出，除蒼耳葉外，蒼耳各部位乙醇提取液對酵母菌抑制效果較差，對大腸桿菌、微球菌和金黃色葡萄球菌抑制效果較好。在相同藥物濃度下，從對各種細菌的抑菌圈直徑來看，蒼耳子的乙醇提取物都不占優勢。實驗數據表明，蒼耳各部位乙醇提取液即使加大藥物濃度對放線菌也無抑制作用。

2.2 蒼耳各部位水提取液、酸水提取液和乙醇提取液的最小抑菌濃度

依據每組培養皿中蒼耳各部位提取液的藥物稀釋梯度，參照含藥濾紙片抑菌圈的有無，確定蒼耳各部位提取液抑菌的MIC值，結果見表4～表6。

表4 蒼耳根、莖、葉和子去離子水提取液的最小抑菌濃度(mg/mL)

從表4可以看出，蒼耳根水提物抑制大腸桿菌和微球菌活性相對較強，蒼耳莖葉水提取物對各受試菌均有抑制作用，且作用較強。

表5 蒼耳根、莖、葉和子酸水提取液的最小抑菌濃度(mg/mL)

從表5可以看出，蒼耳酸水提取物中，根部位對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌抑制最強，蒼耳葉酸水提取物對微球菌和酵母菌抑制最強，僅蒼耳子酸水提取物對放線菌有抑制作用。

表6 蒼耳根、莖、葉和子的乙醇提取液的最小抑菌濃度(mg/mL)

從表6可以看出，蒼耳根和莖乙醇提取物對大腸桿菌具有最強抑制作用，蒼耳葉乙醇提取物對金黃色葡萄球菌和酵母菌抑制作用最強，蒼耳子乙醇提取物對微球菌抑制最強。

3 結論

從蒼耳各部位三種提取方式的抑菌活性看，各種提取方式對各種菌的抑制活性有較大差異，去離子水和酸水的提取物抑菌效果有一定的相似性;蒼耳莖葉提取物的抑菌譜和抑菌活性有相似性。

從各部位的抑菌效果來看，為歷代醫書收載的蒼耳子并沒有表現出比其它部位更強的抑菌效果，除放線菌外，對其它菌種有較強抑制活性部位均不在蒼耳子部位，這預示著蒼耳這種藥材應該有更廣泛的開發前景。

因此，從抗菌角度來看，蒼耳各部位不同方式提取物對受試菌均有不同程度抑制作用，各部位中蒼耳葉的不同方式提取物表現出較寬抑菌譜和較強的抑菌作用，具有相對較大的開發潛質。

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Comparison of bacteriostatic activity of extract from the different organs of the Xanthium mongolium

XIAO Jia－jun1，TONG Guan－he1，XIE Zhen－rong1，JIAO Yi－ying1，ZHENG Chun－yan1，FANG Xiao－yang2

(1.Life Sciences Department of Huainan Normal University，Huainan 232001，China;2.Chinese Academy of Sciences，Beijing 100049，China)

The antibacterial activities of extract from the different organs of the Xanthium mongolium were studied with different impregnants.The results revealed that the Xanthium sibiricum’s extract in different organs had better inhibition activities of Escherichia coli、Micrococcus Cohn and Staphylococcus aureus than Saccharomyces cerevisiae.The better inhibition activities and the wider antibacterial spectrum were showed in the extract of the leaf of the Xanthium mongolium.

Xanthium mongolium;bacteriostatic activity;comparison

TS201.1

A

1002－0306(2011)09－0138－03

2010－06－10

肖家軍(1971－)，男，碩士，講師，研究方向:天然產物開發。

安徽省自然科學基金(KJ2010B453)。