血清異常凝血酶原在中晚期肝癌患者中的表達(dá)及預(yù)后

薄維波 秦繼寶 陳雋 陶祥平 章勇 閆朝春 朱洪波 郭加友 安仲武

徐州醫(yī)科大學(xué)附屬連云港東方醫(yī)院檢驗(yàn)科（江蘇連云港222042）

肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，發(fā)展中國(guó)家的發(fā)病率是西方國(guó)家的2 ～3 倍［1］，我國(guó)肝癌的發(fā)病率位居全球首位，病死率居第三位［2］，由于其早期多無(wú)明顯癥狀，就診時(shí)病情往往已進(jìn)展到中晚期，晚期HCC 患者的5年生存率低于15%［3］。近年來(lái)中晚期HCC 患者的診療取得了較大的進(jìn)展，但整體預(yù)后仍不能令人滿(mǎn)意［4-5］。

血清異常凝血酶原（protein induced by vitamine K absence or antagonist-Ⅱ，PIVKA-Ⅱ）是由于HCC細(xì)胞不能依賴(lài)維生素K 合成正常的凝血因子導(dǎo)致凝血酶原前體羧化不足而生成的［6］，其在HCC 診斷中的作用逐漸成為研究熱點(diǎn)［7-8］。PIVKA-Ⅱ在國(guó)外已被應(yīng)用于臨床并得到認(rèn)可［9-10］，但其用于中晚期HCC 臨床診斷、截?cái)嘀档拇_定及預(yù)后生存鮮有深入研究。本研究通過(guò)探討血清PIVKA-Ⅱ表達(dá)水平與中晚期HCC 患者臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系，旨在為中晚期HCC 的診斷和預(yù)后評(píng)估提供新的理論依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象選取2016年1月至2018年6月于我院收治且確診為中晚期HCC 患者105 例作為中晚期HCC 組，其中男73 例，女32 例；平均年齡為（51.3±8.9）歲，其中Ⅳ期患者30 例，Ⅲ期為42 例，Ⅱ期為33 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）根據(jù)《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范》（2019年版）［11］診斷標(biāo)準(zhǔn)明確診斷為中晚期HCC 患者；（2）臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）伴有其他系統(tǒng)腫瘤或腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；（2）妊娠期女性及未成年人；（3）中途退出者。選取同期93 例良性肝臟疾病患者為良性肝病組，男60 例，女33 例，平均年齡為（51.2 ± 7.9）歲；另選取同期90 例在我院進(jìn)行健康體檢者為對(duì)照組，男55 例，女35 例；平均年齡為（51.2 ± 11.5）歲，三組研究對(duì)象在年齡、性別差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究獲得院醫(yī)學(xué)倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象知情并簽署知情同意書(shū)（編號(hào)：2019-004-01）。

1.2 研究方法

1.2.1 標(biāo)本的采集與保存采集研究對(duì)象空腹外周靜脈血約5 mL，采集后在室溫下靜置30 min，4 000 r/min 離心15 min 分離血清，取上層血清置于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 儀器與試劑血清PIVKA-Ⅱ和AFP 水平的檢測(cè)由美國(guó)貝克曼公司Dxl 800 Access 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及其配套試劑盒；嚴(yán)格按儀器及試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。陽(yáng)性判斷：PIVKA-Ⅱ≥40 mAU/mL，AFP ≥20.0 ng/mL。

1.2.3 隨訪(fǎng)采用電話(huà)、上門(mén)及門(mén)診隨訪(fǎng)相結(jié)合的方式。1年內(nèi)每3 個(gè)月隨訪(fǎng)1 次，2～5年每6 個(gè)月隨訪(fǎng)1 次。隨訪(fǎng)時(shí)間截止至2021年3月31日。記錄患者總生存期（overall survival，OS）和無(wú)進(jìn)展生存期（progression-free survival，PFS），隨訪(fǎng)時(shí)間11 ～61 個(gè)月，平均（26.2±8.5）個(gè)月

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 19.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料采用K-S 檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn)。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，非正態(tài)分布的計(jì)量資料采用M（P25，P75）表示；計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)；多組間比較采用H檢驗(yàn)，組間多重比較采用U檢驗(yàn)；采用Kaplan-Meier 繪制生存曲線(xiàn)，Log-rank 法進(jìn)行檢驗(yàn)，Cox 比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行單因素、多因素分析，通過(guò)ROC曲線(xiàn)分析診斷效能。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組研究對(duì)象血清PIVKA-Ⅱ、AFP 水平比較中晚期HCC 組患者血清PIVKA-II 和AFP 水平較良性肝病組和對(duì)照組顯著上調(diào)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），良性肝病組血清PIVKA-Ⅱ水平高于對(duì)照組（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 三組研究對(duì)象血清PIVKA-Ⅱ、AFP 水平比較Tab.1 Comparison of serum PIVKA-Ⅱand AFP levels in three groups M（P25，P75）

2.2 血清PIVKA-Ⅱ的表達(dá)水平與中晚期HCC患者臨床病理特征的關(guān)系根據(jù)105例中晚期HCC患者血清PIVKA-Ⅱ的中位表達(dá)水平2 893.64 mAU/mL，將患者分為高表達(dá)組（n=65）和低表達(dá)組（n=40），結(jié)果顯示：患者血清PIVKA-Ⅱ高表達(dá)與腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、血管侵犯和TNM 分期顯著相關(guān)（均P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 中晚期HCC 患者血清PIVKA-Ⅱ的表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系Tab.2 Relationship between the expression of PIVKA-Ⅱand clinicopathological features of advanced HCC patients例（%）

2.3 血清PIVKA-Ⅱ表達(dá)水平與中晚期HCC 患者預(yù)后的關(guān)系Kaplan-Meier 生存分析及Log-rank 檢驗(yàn)結(jié)果顯示：血清PIVKA-Ⅱ低表達(dá)組中晚期肝癌患者5年OS、PFS 均明顯高于高表達(dá)組，見(jiàn)圖1。單因素多因素Cox 回歸分析結(jié)果顯示：PIVKA-Ⅱ表達(dá)水平是影響患者5年OS、PFS 的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（均P＜0.05）。見(jiàn)表3、4。

表3 影響中晚期肝癌患者預(yù)后的單因素Cox 回歸分析Tab.3 Univariate Cox regression analysis of prognosis in patients with advanced HCC patients

圖1 血清PIVKA-Ⅱ表達(dá)水平與中晚期肝癌患者5年OS、PFS 的關(guān)系Fig.1 Relationship between the expression of PIVKA-Ⅱand 5 years overall survival and 5 years progression-free survival in advanced HCC patients

2.4 ROC 曲線(xiàn)分析PIVKA-Ⅱ、AFP 單獨(dú)和聯(lián)合檢測(cè)診斷價(jià)值ROC 結(jié)果顯示，血清PIVKA-Ⅱ、AFP 診斷中晚期肝癌的最佳截?cái)帱c(diǎn)分別為198.62 mAU/mL、46.33 ng/mL，二者聯(lián)合檢測(cè)的AUC為0.955，優(yōu)于任一指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)。見(jiàn)表5、圖2。

圖2 PIVKA-Ⅱ、AFP 單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)診斷中晚期肝癌的ROC 曲線(xiàn)Fig.2 ROC curve of PIVKA-Ⅱand AFP single and combined detection for diagnosis of advanced HCC patients

表5 血清PIVKA-Ⅱ、AFP 對(duì)中晚期肝癌的診斷價(jià)值Tab.5 The diagnostic value of serum PIVKA-Ⅱand AFP in the diagnosis of advanced HCC patients

3 討論

本研究選擇了105 例中晚期HCC 患者，通過(guò)化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清PIVKA-Ⅱ表達(dá)水平，分析其與臨床病理學(xué)特征和預(yù)后的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)PIVKA-Ⅱ在中晚期肝癌患者血清中表達(dá)顯著上調(diào)，且其高表達(dá)與腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、血管侵犯和TNM 分期顯著相關(guān)。Kaplan-Meier 生存分析顯示，相對(duì)于高表達(dá)，PIVKA-Ⅱ低表達(dá)的患者5年OS 和5年P(guān)FS均明顯下降，說(shuō)明血清PIVKA-Ⅱ的表達(dá)上調(diào)是不良的預(yù)后因子，單因素和多因素Cox 回歸分析提示，PIVKA-Ⅱ表達(dá)、腫瘤大小、血管侵襲及TNM 分期是評(píng)價(jià)中晚期HCC 患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。因此，在中晚期HCC 中，PIVKA-Ⅱ的表達(dá)水平與腫瘤大小、血管侵襲及TNM 分期一樣，可作為潛在的預(yù)后因子，這與HOSHINO 等［12］和ZHAO 等［13］研究結(jié)果一致。

表4 影響中晚期肝癌患者預(yù)后的多因素Cox 回歸分析Tab.4 Multivariate Cox regression analysis of prognosis in patients with advanced HCC patients

本研究結(jié)果表明，HCC 患者血清PIVKA-II 水平明顯高于良性肝病組和對(duì)照組，患者血清中PIVKA-Ⅱ的顯著增加表明其可能是中晚期HCC 的一個(gè)潛在標(biāo)志物，然而這些影響背后的機(jī)制并不完全清楚，XU 等［14］和CAVIGLIA 等［15］認(rèn)為，這可能是由于異常酶相關(guān)的維生素K 代謝產(chǎn)生在肝細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化所導(dǎo)致的。本研究還發(fā)現(xiàn)PIVKA-Ⅱ與AFP 間無(wú)相關(guān)性，ROC 曲線(xiàn)分析結(jié)果表明，PIVKA-Ⅱ?qū)颊叩脑\斷效能優(yōu)于AFP，二者聯(lián)合檢測(cè)AUC 顯著高于以往研究［16-17］結(jié)果，PIVKA-Ⅱ診斷中晚期肝癌患者的最佳截?cái)嘀禐?98.62 mAU/mL，遠(yuǎn)大于其他研究者［18-19］結(jié)果，可能是不同研究設(shè)計(jì)的樣本選擇不同，本研究納入的HCC 病例為中晚期，PIVKA-Ⅱ表達(dá)水平均較高所致。有類(lèi)似研究［20-21］也證實(shí)較高的PIVKA-Ⅱ截?cái)嘀蹬c不良預(yù)后顯著相關(guān)。

本研究仍具有局限性。首先，本研究?jī)H局限于臨床樣本分析，未在細(xì)胞和動(dòng)物水平對(duì)PIVKA-Ⅱ介導(dǎo)HCC 發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步探索和驗(yàn)證；其次，本研究納入的臨床樣本來(lái)源于單中心，且TNM 分期為中晚期，可能使得某些分析結(jié)果出現(xiàn)偏移。在未來(lái)，一方面通過(guò)多中心大樣本對(duì)本研究結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證；同時(shí)也將開(kāi)展體外及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，對(duì)PIVKA-Ⅱ促進(jìn)HCC 的潛在分子機(jī)制進(jìn)行探究。

綜上所述，PIVKA-Ⅱ在中晚期HCC 患者血清中表達(dá)顯著上調(diào)，與多種不良臨床病理特征及預(yù)后密切相關(guān)，可作為評(píng)估中晚期HCC 患者預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物。