CHI3L1和GPR對肝纖維化患者的診斷效能比較

林朝陽 楊鋒 黃清勇

肝纖維化是肝病科常見病之一，其是各種慢性肝病常見和共同的病理轉(zhuǎn)歸，因肝臟存在病變引起其自身的修復(fù)反應(yīng)，產(chǎn)生的纖維結(jié)締組織沉積，最終導(dǎo)致肝纖維化[1]，如治療不及時，多數(shù)患者可進展為肝硬化，甚至進展為肝功能衰竭、門靜脈高壓等而危及患者生命[2]。為了臨床能早期診斷肝臟纖維化，做到早治療而改善慢性肝病患者的預(yù)后。殼多糖酶3樣蛋白1（chitinase-3-like protein1，CHI3L1）、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶和血小板比值指數(shù)（γ-glutamyl transpeptidase platelet ratio index，GPR）是常見的診斷肝病的血清學(xué)指標(biāo)，但罕有對此二者指標(biāo)診斷肝纖維化能力的報道，本文比較了CHI3L1和GPR對肝纖維化患者的診斷效能，探尋診斷肝纖維化的適宜指標(biāo)，提高診斷肝纖維化的及時性和準(zhǔn)確性，以為臨床提供新的診斷方向。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性選擇2019年1月—2020年6月本院收治的擬診為肝纖維化患者524例，所有患者均經(jīng)肝穿刺活檢確診412例。確診病例中男308例，女104例，年齡41～72歲，平均（56.25±4.86）歲。其中慢性乙型肝炎引起肝纖維化患者194例，酗酒引起肝纖維化106例，丙型感染引起肝纖維化患者46例，脂肪肝引起肝纖維化45例，其他引起肝纖維化21例。

1.2 方法

所有患者均檢測CHI3L1和GPR水平，判斷肝纖維化情況，并與肝穿刺活檢結(jié)果比較。

1.2.1 CHI3L1和GPR水平檢測 抽取所有患者清晨空腹靜脈血5 mL至干燥的真空采血管中，用EDTA-K2抗凝采血管采集靜脈血2 mL，將5 mL真空采血管樣本室溫靜置20 min后以3 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min進行血清分離，低溫保存待測CHI3L1和γ-GT，用EDTA-K2抗凝采血管采集靜脈血2 mL充分揺勻后靜置10 min后上機檢測血小板。CHI3L1采用CHI3L1 ELISA試劑盒（生產(chǎn)廠家：杭州普望生物技術(shù)有限公司）進行檢測，嚴(yán)格按試劑說明書操作，采用伯樂iMark酶標(biāo)儀測定光密度值。當(dāng)CHI3L1水平≥85.1 ng/mL為診斷肝纖維化標(biāo)準(zhǔn)[1]。GPR中的γ-GT與采用Architect C16000全自動型生化分析儀測定，試劑盒由美國雅培公司提供，按照試劑使用說明進行操作，GPR中的血小板用SYSTEM的XN-1000及SYSTEM的配套試劑進行檢測。GPR中為大于0.39為診斷肝纖維化標(biāo)準(zhǔn)[3]。

1.2.2 肝穿刺活檢 在超聲定位下行肝穿刺，肝組織用4%甲醛溶液固定，石蠟包埋，切片，經(jīng)蘇木精伊紅染色和VanGe染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察。根據(jù)Scheuer方法分期。

1.3 肝纖維化分期標(biāo)準(zhǔn)

依據(jù)改良Scheuer評分系統(tǒng)：S0期為無肝纖維化，S1期為僅門靜脈周圍纖維化，S2期為在S1期基礎(chǔ)上有隔膜形成，S3期為廣泛隔膜形成，S4期為早期肝硬化[4]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

本文數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計，計量資料以（x-±s）表示，采用t檢驗或F檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗；一致性檢驗采用Kappa一致性檢驗，檢驗水平α=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種指標(biāo)在不同分期肝纖維化患者的表達水平比較

活檢檢測發(fā)現(xiàn)S1期155例，S2期120例，S3期79例，S4期58例。不同分期肝纖維化的CHI3L1和GPR水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=45.329，F(xiàn)=6.884；P＜0.05），且隨著肝纖維化嚴(yán)重程度增加而增加，見表1。

表1 兩種生化指標(biāo)在不同分期肝纖維化患者的表達水平比較 （±s）

表1 兩種生化指標(biāo)在不同分期肝纖維化患者的表達水平比較 （±s）

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2.2 兩種指標(biāo)與肝組織學(xué)比較

CHI3L1檢查肝纖維化患者與肝活體穿刺結(jié)果一致399例，準(zhǔn)確率為96.84%，Kappa=0.76，提示CHI3L1檢查肝纖維化患者與肝活體穿刺結(jié)果有較高的一致性；GPR與活體穿刺一致218例，準(zhǔn)確率為52.91%，Kappa=0.48，提示GPR檢查肝纖維化患者與肝活體穿刺結(jié)果的一致性一般。

2.3 兩種生化指標(biāo)檢測肝纖維化的診斷效能評估

CHI3L1診斷肝纖維化的AUC為0.939，靈敏度為89.83%，特異度為77.75%；GPR診斷肝纖維化的AUC為0.829，靈敏度為79.66%，特異度為79.77%。CHI3L1檢驗肝纖維化的AUC高于GPR檢驗肝纖維化的AUC，見表2。CHI3L1和GPR檢測肝纖維化的ROC曲線見圖1。

表2 兩種生化指標(biāo)檢測肝纖維化的效能比較

圖1 CHI3L1和GPR檢測肝纖維化的ROC曲線

3 討論

肝纖維化是病毒和其他誘因引起的慢性炎癥刺激導(dǎo)致的慢性肝損傷后的一種損傷修復(fù)反應(yīng)，本研究也發(fā)現(xiàn)肝纖維化患者主要以乙肝、丙肝病毒和飲酒引起。肝纖維化最終結(jié)果可發(fā)生癌變，其早期是可逆性的病理過程，因此早期的診斷對臨床干預(yù)起著關(guān)鍵作用。目前臨床上對肝纖維化的診斷主要采用肝臟活體穿刺病理檢查、影像學(xué)[5]和檢測血清標(biāo)志物[6]，且肝組織的活體穿刺仍是肝纖維化診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但肝組織的活體穿刺存在一定的技術(shù)局限性和對人體的風(fēng)險，且其不適用于肝纖維化展的動態(tài)觀察；影像學(xué)方法主要基于超聲彈性成像技術(shù)對不同組織的密度、硬度不同，且其與檢查者的經(jīng)驗和主觀認(rèn)識關(guān)系密切，導(dǎo)致且分期結(jié)果不夠準(zhǔn)確；傳統(tǒng)的肝纖維化4項引起對檢測對象、檢測結(jié)果閾值等一直存在不確定性爭議，因此臨床亟待采用新的方法或血清學(xué)標(biāo)志物診斷肝纖維化。

本研究比較了殼多糖酶3樣蛋白1（chitinase-3-like protein 1，CHI3L1）和γ-GT與血小板比率（GPR）對診斷肝纖維化的效能。本文發(fā)現(xiàn)不同分期肝纖維化的CHI3L1和GPR的表達水平不同，且隨著肝纖維化嚴(yán)重程度增加而增加。這主要是CHI3L1屬于哺乳動物幾丁酶家族成員之一，參與炎性反應(yīng)，調(diào)節(jié)細胞增殖、細胞黏附、細胞遷移和細胞激活等生物活動[7-9]，因此其可通過參與炎性反應(yīng)、細胞增殖分化和促進細胞外基質(zhì)重塑等作用參與肝纖維化過程，研究也是顯示肝內(nèi)CHI3L1是成纖維細胞和肝星狀細胞的生長因子，可激活肝星狀細胞并促進造血干細胞分化為肌纖維母細胞，表達平滑肌肌動蛋白及細胞珠蛋白，分泌大量細胞外基質(zhì)蛋白，導(dǎo)致肝纖維化形成[10-11]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)血清中CHI3L1在S2、S3和S4期是表達水平呈現(xiàn)顯著提高，因此提示其也可作為鑒別肝纖維化和肝硬化的診斷指標(biāo)。γ-GT是人體組織分布較為廣泛的生化指標(biāo)，正常人血清中γ-GT主要來自肝臟，在肝內(nèi)主要分布于肝細胞漿和肝內(nèi)膽管上皮中，其活性較強，提示肝臟發(fā)生炎癥改變，當(dāng)其升高到一定程度時則提示肝纖維化，因此大部分研究也認(rèn)為其是乙肝病毒感染患者評估纖維化的重要監(jiān)測手段，研究也顯示GPR值越高提示肝纖維化越嚴(yán)重[5]。

本研究發(fā)現(xiàn)412例患者中，CHI3L1檢查肝纖維化患者與肝活體穿刺結(jié)果一致的準(zhǔn)確率為96.84%，而GPR檢測與活體穿刺一致準(zhǔn)確率為52.91%，通過Kappa一致性檢驗CHI3L1檢查肝纖維化患者與肝活體穿刺結(jié)果一致性較高，而GPR檢查肝纖維化患者與肝活體穿刺結(jié)果的一致性一般。通過上述結(jié)果提示CHI3L1檢查肝纖維化患者與肝活體穿刺結(jié)果準(zhǔn)確性高于GPR，原因是雖然GPR活動性與肝臟疾病程度一致性較好，可反映肝細胞損害程度和慢性肝臟分級，但研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)肝內(nèi)炎癥反應(yīng)趨于靜止后，即從肝炎演變成肝硬化后其表達可下降至正常范圍[12]，因此當(dāng)肝纖維化達到一定程度時單一檢測GPR存在偏差。

本文中通過ROC曲線分析CHI3L1和GPR對肝纖維化的診斷效能發(fā)現(xiàn)CHI3L1診斷肝纖維化的AUC為0.939，靈敏度為89.83%，特異度為77.75%；GPR診斷肝纖維化的AUC為0.829，靈敏度為79.66%，特異度為79.77%；CHI3L1檢驗肝纖維化的AUC高于GPR檢驗肝纖維化的AUC，提示檢測CHI3L1表達水平對肝纖維患者的診斷更為靈敏。

總之，CHI3L1較GPR更利于可作為肝纖維化的診斷以及不同分期肝纖維化的標(biāo)記物，因其不同分期表達水平不同，其也可作為動態(tài)觀察肝纖維化進展的檢測標(biāo)記物。