北京市密云地區(qū)1個月至13歲兒童血清總蛋白、清蛋白參考區(qū)間的建立

袁善彬，曹 瑩，仇 菊，靳 衛(wèi)，郭克森，王學文

(北京市密云區(qū)婦幼保健院，北京 101500)

血清總蛋白(TP)、清蛋白(ALB)的生化指標對兒童呼吸系統(tǒng)、感染性疾病、消化系統(tǒng)等疾病的診斷、療效觀察、預后健康評估發(fā)揮了非常重要的作用[1-3]。蛋白質是一種人體需要的重要營養(yǎng)素，其是維持所有身體功能和運動所需的必需和非必需氨基酸，為維持兒童生命、身體發(fā)育和生長提供結構基礎，兒童在生長發(fā)育過程中攝取蛋白質高或低及各種疾病引起蛋白質合成減少或丟失將對兒童身體發(fā)育造成嚴重影響[4-6]。因此，臨床實驗室對TP、ALB等生化指標參考區(qū)間建立十分重要，但我國各臨床實驗室兒童血清TP、ALB參考區(qū)間來源不統(tǒng)一，存在較大差異，無法對疾病做出良好的診斷，很多臨床實驗室還將成人參考區(qū)間用于兒童，兒童由于生長發(fā)育快、不同發(fā)育階段血清TP、ALB指標存在很大的差異，與成年相差較大[7-8]，套用成人參考區(qū)間容易貽誤病情，造成嚴重后果。依據《臨床實驗室檢驗項目參考區(qū)間的制定》[9]和CLSI C28-A2[10]等文件要求各臨床實驗室需要建立自身參考區(qū)間，目前本區(qū)尚未發(fā)布兒童血清TP、ALB參考區(qū)間，因此建立本地區(qū)兒童血清TP、ALB參考區(qū)間極其必要[11]。本研究旨在建立本地區(qū)1個月至13歲兒童血清TP、ALB參考區(qū)間，為本區(qū)臨床對該年齡段兒童疾病評估和治療提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性選擇2019—2020年在本院健康體檢的1 912例兒童為研究對象，遵循WS/T 402-2012[9]參考區(qū)間制定的規(guī)定。兒童選擇標準：(1)表觀健康；(2)無疾病，如代謝和營養(yǎng)疾病、甲狀腺疾病、血液系統(tǒng)疾病、血管疾病、心臟病、肌病、惡性腫瘤、燒傷和肌肉損傷、消化系統(tǒng)疾病、腎臟疾病；(3)無急慢性感染；(4)肝功能檢測正常；(4)無消化道出血；(5)6個月內未進行手術、輸血或大量失血；(6)2周內未服用藥物。實驗室指標排除標準：外周血白細胞數3.0×109L-1或>15×109L-1，血紅蛋白90 g/L(女)，C 反應蛋白>8 mg/L，血清樣本膽紅素>400 μg/L，甘油三酯≥10.0 g/L，血清蛋白<25 g/L，血糖≥7.0 g/L，血清肌酐>100 μg/L、血清肌酸激酶>500.0 μg/L，尿酸>475.0 μg/L。本研究已獲本院醫(yī)學倫理委員會審核通過。

1.2儀器與試劑 貝殼曼AU680型全自動生化儀。TP試劑(北京利德曼，批號：18091907)；ALB試劑(北京利德曼，批號18090907)；室內質控品：朗道水平2(批號：1003UE)，朗道水平3(批號：1370UN)。

1.3方法 于周一至周六8：00～10：00采集兒童空腹靜脈血4 mL置促凝劑真空管中，待血液室溫凝固后，以 1 300 g 離心10 min，2 h內采用貝克曼AU680全自動生化分析儀檢測。分析系統(tǒng)性能評估：(1)血清TP、ALB參加北京市臨檢中心2019—2020年室間質評，且成績合格；(2)血清TP、ALB變異系數在2019年京津冀地區(qū)檢驗結果互認實驗室精密度要求范圍內；(3)血清TP、ALB項目按照WS/T 492-2016標準進行精密度與正確度性能驗證并通過；(4)每次室內質控兩水平在控，才檢測樣本；(5)所有試驗嚴格按照儀器和項目檢測試劑盒的標準操作規(guī)程(SOP)進行操作；(6)檢測方法和計量學溯源性，TP采用雙縮脲法，SRM927d NIST；ALB采用溴甲酚綠法，IFCC ERM-DA470k。分組判斷：對性別、日齡兩因素進行Z檢驗，根據年齡分為A組(1～6個月)、B組(6個月至<1歲)、C組(1～<2歲)、D組(2～<6歲)、E組(6～<13歲)，將不需分組的參考值合并，確定實際參考樣品組。

1.4參考區(qū)間驗證 隨機抽取各組健康兒童男女的檢測結果各20例，不超過2例檢查結果落在所驗證的參考區(qū)間外，則可基本認為該參考區(qū)間適用；如果有3例及以上的觀測值落在參考區(qū)間外，則證明該參考區(qū)間不適用結果。

1.5統(tǒng)計學處理 所有數據采用Dixon法剔除離群值，采用SPSS26.0軟件，用Kolmogorov-Smirnov檢驗對各組數據進行正態(tài)性分布檢驗，符合偏態(tài)分布的計量資料以中位數(四分位范圍)[M(P25～P75)]表示，參考區(qū)間制定方法參考CLSI C28-A3[12]文件標準，計算雙側95%置信區(qū)間，即參考下限和參考上限的秩次可以分別用百分位數P2.5和P97.5位數表示，2組間比較用非參數Mann-Whitney秩和檢驗，多組間比較用非參數Kruskal-Wallis秩和檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1觀察對象一般資料 1 912例兒童中男949例，女963例，各組性別比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 各組性別比較(n)

2.2Dixon法對所有TP、ALB值判斷 Dixon法對所有TP 、ALB值判斷，結果是D/R值均小于1/3，故無離群值，見表2。各組數據采用Kolmogorov-Smirnov檢驗進行正態(tài)性分布檢驗，各組P≤0.20，各組數據總體上符合偏態(tài)分布，參考下限和參考上限的秩次可以分別用百分位數P2.5和P97.5位數表示，見表3。

表2 對所有TP、ALB值用Dixon法判斷表

表3 各組數據分別做正態(tài)性分布性檢驗

2.3各組血清TP、ALB比較 同組男、女血清TP、ALB水平比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。血清TP各組水平比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 A、B組血清ALB水平比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；C、D、E組血清ALB水平比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表4。

表4 血清TP、ALB水平比較[M(P25～P75)]

2.4血清TP、ALB參考區(qū)間及驗證 1～<6個月、6個月至<1歲、1～<2歲、2～<6歲、6～13歲血清TP男/女參考區(qū)間為47～68、55～76、60～78、61～79、63～83 g/L；1～<6個月、6個月至13歲血清ALB男/女參考區(qū)間為34～49、38～50 g/L。按男女1∶1的比例收集各組20例健康兒童參加驗證，血清TP、ALB的檢測結果均在本研究建立的參考區(qū)間內，全部通過驗證(表5)。經過與臨床討論，本研究TP、ALB的參考區(qū)間適用于本地區(qū)1個月至13歲兒童。見表5。

表5 血清TP、ALB參考區(qū)間及驗證

3 討 論

兒童體內血清TP和ALB水平對其正常的生長發(fā)育至關重要，嬰幼兒時期較高的蛋白質攝入量與兒童后期較高的體重指數有關[13]。TP是血清全部蛋白總稱，可分為ALB和球蛋白兩類，其具有維持機體正常膠體滲透壓和pH、免疫作用、運輸多種代謝物及營養(yǎng)作用等重要的生理功能[14-15]。有文獻報道，高度脫水及多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥等疾病能引起TP升高、水鈉潴留、肝功能障礙、潰瘍性結腸炎等疾病造成TP降低[16-17]。ALB具有維持人體營養(yǎng)與滲透壓、有機物和無機離子運輸、解毒的作用[18-19]。血清TP和ALB是兒童腎病綜合征[20]、感染性疾病[21]、肝病腫瘤[22-23]等疾病的重要生化診斷指標。但是各實驗室由于儀器、方法、檢驗系統(tǒng)等不同導致兒童血清TP和ALB參考區(qū)間來源不統(tǒng)一，差異較大。有關研究報道我國兒童血清TP和ALB等生化項目參考區(qū)間來源操作規(guī)程占29.4%～37.7%，來源于試劑說明書占26.3%～37.8%[24]。這些參考區(qū)間大多不分年齡、性別，且較少針對兒童群體，兒童由于自身的生理特點，血清TP、ALB隨年齡的增長而逐漸升高[25]，所以建立兒童血清TP、ALB參考區(qū)間十分必要。

本研究顯示1～<6個月、6個月至<1歲、1～<2歲、2～<6歲、6～13歲血清TP男/女參考區(qū)間為47～68、55～76、60～78、61～79、63～83 g/L，低于有關文獻報道中國成年人血清TP男/女參考區(qū)間(65～85 g/L)[26]，與有關文獻報道的28 d至6個月、6個月至<1歲、1～<2歲、2～<6歲、6～13歲血清TP男/女參考區(qū)間(49～71、55～75、58～76、61～79、65～84 g/L)基本一致[27]。本研究顯示，兒童血清TP水平隨著年齡的增長而升高，各年齡兒童血清TP水平比成人低，臨床實驗室需要建立滿足兒童自身年齡段的參考區(qū)間，不能盲目套用成人參考區(qū)間。

本文研究顯示，1～<6個月、6個月至13歲血清ALB男/女參考區(qū)間是34～49、38～50 g/L，低于有關文獻報道的中國成年人血清ALB男/女參考區(qū)間(40～55 g/L)[26]，略低于有關文獻報道的28 d至<6個月、6個月至<13歲血清ALB男/女參考區(qū)間(35～50、39～54 g/L)[27]。分析原因可能為：(1)本研究樣本量小；(2)檢測系統(tǒng)和試劑廠商不同，造成本研究有一定的局限性，需在以后的工作中進一步完善。本研究顯示，6個月至13歲男/女血清ALB參考區(qū)間為38～50 g/L，與文獻[28]報道的吉林省1～<10歲血清ALB男/女(濕化學)參考區(qū)間(39.6～49.0 g/L)、韓國2～<14歲血清ALB男/女參考區(qū)間(40～49 g/L)比較一致。

綜上所述，兒童身體處于生長發(fā)育活躍時期，生理上的差異及代謝特點導致各年齡段血清TP、ALB生化指標存在很大差異，成人參考值不能用于評價兒童的健康水平，應重新確定可靠、準確的生物參考區(qū)間，因此建立1個月至13歲兒童血清TP、ALB的參考區(qū)間十分必要。