痰沉渣細胞蠟塊在肺癌早期診斷中的價值

潘成娜，楊小苗，懷建國

(蕪湖市第一人民醫院病理科，安徽 蕪湖 241000)

根據國際權威組織的報告，肺癌的發病率呈現逐年上升趨勢，病死率也是高居不下，嚴重威脅著人類的健康[1-2]。最重要的原因是大多數患者在確診時已經是晚期，5年生存率較低，僅為10%左右[3]，如果能早發現、早診斷并行手術治療，可將患者的5年生存率明顯提高，達到50%以上[4]。目前，臨床上最常用、最便捷的肺癌早期診斷技術是痰脫落細胞學涂片檢查，但痰涂片中所能收集的腫瘤細胞較少，且易發生重疊、退變、血液覆蓋等，導致較高的漏診率[5]。因此，研究一種更有效且便捷的早期診斷技術對其預后有著重要的臨床價值。近年來，痰沉渣細胞蠟塊技術在病理科慢慢推廣開來，該方法可收集到標本中的幾乎全部的細胞，也能去除痰液中雜質對結果的影響，并且可以加做特殊染色及免疫組化，進一步提高了肺癌的檢出率[6]，但其缺點是檢查時間較長、費用高。本研究旨在將細胞蠟塊技術用于痰液細胞沉渣檢驗中，通過分析痰沉渣細胞蠟塊與痰涂片在肺癌早期診斷中檢出率與準確率的差異，進而探討痰沉渣細胞蠟塊技術對肺癌早期診斷的價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2018年1月至2019年12月本院就診的共251例影像學檢查提示肺占位的患者進行回顧性分析。其中男152例，女99例，男女比例1.54∶1；年齡31～79歲，平均(59.7±9.8)歲。對上述251例疑似肺癌患者同時進行痰涂片及痰沉渣細胞石蠟切片進行病理檢查并記錄結果。251例疑似患者經支氣管鏡活檢、穿刺活檢、手術病理進行確診，最終有212例患者診斷為肺癌，39例患者診斷為肺良性疾病。

1.2標本的收集 臨床醫生指導患者晨起吐掉第一口痰并漱口，再用力咳出深處的痰液，收集于病理科專門的無菌容器中，每例患者取2份，每份痰量3～5 mL，1 h內送至病理科，連送3 d。

1.3標本的制作

1.3.1痰涂片法 隨機取患者痰液中的1份，選取標本中帶有血絲、膿樣物或絲狀物的痰液涂于載玻片上，自然風干后再用95%乙醇固定，時間15～30 min，再行蘇木精-伊紅(HE)染色及中性樹膠封片。

1.3.2痰沉渣細胞石蠟切片法 取患者另一份送檢痰液，向其中加入0.3～0.5 mL的二硫蘇糖醇，充分混合后置于振蕩器上振蕩10 min，將液體倒入離心管中，以3 000 r/min離心10 min，棄去上清液后加入細胞清洗劑，再次以3 000 r/min離心10 min，棄去上清液后加入10%中性福爾馬林溶液20 mL，固定1 h后再次以上述方法離心10 min，加入95%乙醇再次離心，靜置1 h后去除上清液，取細胞塊置于包埋紙中依次置于75%、85%、95%、100%乙醇中行脫水處理，二甲苯處理45 min，應用液體石蠟浸透后包埋成蠟塊，4 μm連續切片，切片置于85 ℃烤箱中烤片20 min，脫蠟后再進行HE染色及中性樹膠封片。

1.4細胞學診斷 將涂片與切片掃描后采用雙盲法進行讀片，讀片醫師由2位以上高年資病理診斷醫師組成，采用3級分類診斷法將診斷結果分為陽性、可疑、陰性。同一患者的3次標本中若有1次以上為陽性則診斷為陽性，若3次均為可疑也劃入陽性組。

1.5統計學處理 運用SPSS17.0統計學軟件對數據結果進行分析，計數資料以率或構成比表示，進行χ2檢驗，計算兩種診斷方法的Youden指數，并運用ROC曲線評價2種方法對初診肺癌的診斷價值，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1兩種診斷方法的診斷結果 251例患者的組織病理學診斷結果與痰涂片及痰沉渣細胞蠟塊法診斷結果見表1、圖1～2。

表1 痰涂片和痰沉渣細胞蠟塊切片診斷結果

圖1 痰涂片(HE染色，10×)

圖2 痰細胞蠟塊(HE染色，10×)

2.2兩種診斷方法的診斷價值對比 痰沉渣細胞蠟塊切片的靈敏度(93.40%)、準確度(94.02%)、陽性預測值(99.50%)、陰性預測值(73.08%)均明顯高于痰涂片的33.96%、43.03%、96.00%、20.45%，差異有統計學意義(P<0.05)；兩者的特異度分別為97.44%、92.31%，差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

表2 兩種診斷方法對肺癌的診斷價值(%)

2.3涂片與切片的ROC曲線分析 痰涂片診斷肺癌的ROC曲線下面積為0.631(95%CI0.548～0.715)，痰沉渣細胞蠟塊診斷肺癌的ROC曲線下面積為0.954(95%CI0.919～0.989)，兩者比較差異有統計學意義(P<0.01)。

3 討 論

肺癌有著較高的發病率與病死率，嚴重危害人類生命和健康[7]。早診斷、早治療可明顯延長肺癌的生存期，對降低其病死率有著重要的意義，但早期肺癌缺乏特異性臨床表現，給確診帶來了困難，目前低劑量CT、腫瘤標志物、痰涂片是早期篩查肺癌的主要方法[8]，但肺癌的確診仍然要依靠病理技術。病理學細胞蠟塊技術已經開展數十年，是腫瘤診斷的“金標準”，在細胞學領域也有著較高的地位，但目前開展痰液細胞蠟塊技術的醫院少之又少。本研究對痰涂片與痰沉渣細胞蠟塊切片在肺癌診斷的臨床價值進行了對比。

據文獻報道，連續3次痰涂片檢查對周圍型肺癌的診斷率為50%，對中央型肺癌的診斷率高達80%[9-10]，但本研究中Youden指數僅為26.27%，總結原因為在標本收集、處理過程、制作過程中易受到外界因素影響，會出現黏液成分過多、癌細胞未被涂片、壞死物較多、厚薄不均、癌細胞未經固定處理而變性、其他雜質掩蓋癌細胞從而影響檢測陽性率[6，11]。痰沉渣細胞蠟塊技術可很好地彌補痰涂片的相關不足，對標本的采集、制片、染色等階段進行改進，使得病變細胞的收集率、診斷的陽性率、準確率均得到了顯著地提高，國內外也有類似的文獻報道[12-13]。本研究中痰沉渣細胞蠟塊切片診斷肺癌的準確度、靈敏度分別為94.02%、93.40%，顯著高于痰涂片的43.03%、33.96%。此外，本研究分析了兩種技術的ROC曲線，痰涂片診斷肺癌的ROC曲線下面積為0.631(95%CI0.548～0.715)，痰沉渣細胞蠟塊診斷肺癌的ROC曲線下面積為0.954(95%CI0.919～0.989)，不難看出痰沉渣細胞蠟塊法在肺癌早期診斷的效能較痰涂片法明顯提升。

痰液細胞蠟塊是在普通細胞學技術的基礎上，把痰液中有形細胞成分通過離心濃縮制作成蠟塊，可以進一步行HE染色，鏡下細胞比較集中，類似于組織切片且背景干凈，易于讀片，且可以連續切片進行免疫組化染色及其他特殊檢查等，以微小的創傷代價獲得較明確的病理診斷，對于那些難以取得活檢組織及復發的中晚期腫瘤患者優點更為突出[14]。與傳統痰涂片相比，能明顯提高肺癌的檢出率，并能對肺癌進行進一步的定性分類及分子水平檢測，優點為無明顯禁忌證及不良反應，診斷費用低，為臨床開展微創性診療技術提供最權威的病理診斷保證。在董志廣[15]、HEYMANN 等[16]的研究中表明細胞蠟塊切片檢查與免疫組化染色聯合診斷惡性腫瘤的最佳組合，說明細胞蠟塊切片比細胞涂片有較大的診斷優勢。

痰液標本易于收集，有著無創、對標本量要求不高的特點，為制作蠟塊提供了堅實的現實基礎。痰沉渣細胞蠟塊技術在肺癌的早期診斷中有著較高的靈敏度、準確度及較高的診斷效能，隨著肺癌治療方式的不斷更新，痰沉渣細胞蠟塊可為后期進行特殊染色、基因檢測提供可行性，隨著病理技術的不斷進展，肺癌的治療方式也呈現出多元化，為肺癌患者在不斷進步的醫療進程中增加生存機會，為肺癌的防治奠定了堅實的基礎，是值得推廣的技術之一。