麝香保心丸對大鼠醛固酮誘導的心肌纖維化的影響

劉永存，張旭升，黃戰軍，樊小容，譚小青，蔡博治

研究證明，醛固酮不僅可作用于腎臟，調節水、電解質平衡等，還可作用于腎臟以外的組織，有致纖維化、促進炎癥反應等生物學效應，前期研究發現，外源性醛固酮不僅可致大鼠主動脈、心肌纖維化，還可促進血漿、主動脈和心肌組織炎性因子及相應受體表達上調[1-3]。心血管組織炎癥反應、纖維化是導致血管功能損傷、心血管重構的重要因素，探討如何抑制炎癥反應及纖維化有重要的臨床意義。麝香保心丸具有穩定斑塊、逆轉斑塊、抑制炎癥反應及抑制血管鈣化等作用[4-5]。前期研究顯示，麝香保心丸可改善代謝綜合征誘導的心肌纖維化，但能否改善醛固酮誘導的心肌纖維化尚不清楚[6]。本實驗分析麝香保心丸對醛固酮誘導的心肌纖維化的影響，并初步探討其可能的分子機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物、試劑及藥品 取8周齡雄性SD大鼠24只，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供。醛固酮購自Sigma公司，白細胞介素-6(IL-6)試劑盒購自北京華英生物研究所，IL-6放射免疫試劑盒購自北京華英公司，IL-6受體一抗購自北京博奧森公司，IL-6受體二抗購自北京中杉金橋公司，麝香保心丸購自上海和黃藥業有限公司。

1.2 實驗動物分組及取材 將24只雄性SD大鼠隨機分為對照組、醛固酮組、醛固酮+麝香保心丸組，每組8只。對照組：肌內注射等量生理鹽水；醛固酮組：20 μg/d醛固酮皮下注射；醛固酮+麝香保心丸組：在醛固酮組基礎上用麝香保心丸灌胃，每天25 mg/kg，每日1次。各組常規飼養6周。稱重后用戊巴比妥鈉麻醉，心臟取血，低溫分離血清。摘取心臟并稱重，石蠟包埋用于染色。

1.3 心肌組織膠原沉積情況 取大鼠心肌組織，石蠟切片，常規脫蠟至水，Masson復合染色液5 min，5%磷鎢酸5～10 min，亮綠染色液5 min，進行脫水、透明、封片。

1.4 血清IL-6含量的測定 取血清200 μL，采用放射免疫法測定血清IL-6含量，具體步驟按試劑盒說明書操作。

1.5 IL-6受體表達的檢測 免疫組織化學法檢測心肌組織IL-6受體的表達。取大鼠心肌組織石蠟切片，常規脫蠟至水，滴加一抗孵育過夜，滴加二抗、二氨基聯苯胺法(DAB)顯色，蘇木素復染，中性樹膠封片，具體按說明書進行。

2 結 果

2.1 3組血清IL-6含量和心臟肥厚指數比較 與對照組比較，醛固酮組血清IL-6含量明顯升高，心臟肥厚指數明顯增加，差異均有統計學意義(P<0.01)；與醛固酮組比較，醛固酮+麝香保心丸組血清IL-6含量及心臟肥厚指數均有所下降，差異均有統計學意義(P<0.01)。詳見表1。

表1 3組血清IL-6含量和心臟肥厚指數比較 ()

2.2 3組心肌組織膠原染色比較 與對照組比較，醛固酮組心肌細胞增生、排列紊亂，細胞間質可見大量膠原明顯沉積。而醛固酮+麝香保心丸組膠原沉積有所改善。詳見圖1。

圖1 3組心肌組織Masson染色(藍色為膠原成分，×40)

2.3 3組心肌組織IL-6受體表達變化 與對照組比較，醛固酮組大鼠心肌組織IL-6受體表達明顯上調。而醛固酮+麝香保心丸組IL-6受體表達有所下調。詳見圖2。

圖2 3組心肌組織IL-6受體免疫組化染色(棕黃色為受體陽性表達，×100)

3 討 論

研究證明，醛固酮增多不僅可引起水鈉潴留，導致血壓升高，而且有促組織纖維化及炎癥反應等生物學效應，臨床發現，肥胖人群血醛固酮水平與炎性因子及動脈硬化密切相關，其機制可能與激活核轉錄因子-κB(NF-κB)、細胞間黏附分子-1及結締組織生長因子轉錄有關[7-8]。

心肌纖維化是多種心血管疾病發展最終的病理基礎，心肌細胞增殖、膠原蛋白沉積是重要的物質基礎。研究證明，醛固酮增多不僅可誘導心肌細胞肥大增殖、炎性細胞浸潤及炎性因子的表達，還可刺激心肌成纖維細胞增生，促進膠原蛋白Ⅰ和膠原蛋白Ⅲ的合成，與氧化應激等機制相關[3，9-10]。炎癥反應貫穿心肌纖維化病理過程的始終，在急性心肌梗死后心肌纖維化的大鼠心肌也發現IL-6高表達，在壓力超負荷誘導的心肌纖維化中可觀察到小鼠心肌IL-6、白細胞介素-1(IL-1)等炎性因子表達明顯增加，提示IL-6與心肌纖維化密切相關[11-12]。細胞增殖肥大、膠原蛋白沉積、炎癥細胞浸潤及炎性因子表達上調是心肌纖維化的重要條件，可見醛固酮與心肌重構密切相關，如何抑制并逆轉心肌重構是目前的研究重點。

麝香保心丸主要由麝香、蘇合香、冰片、人參等組成，具有芳香溫通、益氣強心之功效。臨床廣泛用于氣滯血瘀的胸痹，亦指心絞痛、心肌梗死等疾病的治療。研究發現，麝香保心丸具有抑制炎癥反應、保護血管內皮細胞及穩定動脈粥樣硬化斑塊等作用[13-14]。麝香保心丸還可抑制高血壓或糖尿病心肌纖維化的發生發展，可能與其能降低心肌組織轉化生長因子-β1(TGF-β1)、血管緊張素Ⅱ的表達，抑制TGF-β1/Smads信號轉導通路的過度激活有關[15-16]。

本研究發現，醛固酮可誘導大鼠心肌細胞增殖、排列紊亂、大量膠原蛋白沉積、心臟肥厚指數明顯升高，提示心肌纖維化，同時，血清IL-6水平和心肌組織IL-6受體表達明顯上調，提示醛固酮不僅具有促纖維化效應，而且有促炎癥反應效應。用麝香保心丸干預后，大鼠血清IL-6水平及心肌組織IL-6受體表達明顯下調，提示麝香保心丸具有抗炎作用，并且大鼠心肌纖維化程度也明顯改善。

綜上所述，醛固酮具有促炎癥反應、促纖維化效應，而麝香保心丸可抑制該效應，為心肌纖維化的機制研究及防治提供新的思路和作用靶點，但具體的信號轉導通路尚需進一步研究證實。