肉用綿羊黃脂病的診斷及病理學變化

張凱歌 ， 王夢瑤 ， 張冰雨 ， 楊玉榮 ， 姜義寶

(河南農業大學動物科技學院 ， 河南 鄭州 450000)

綿羊黃脂病是以綿羊脂肪組織呈現黃色為特征的一種色素沉積性疾病，主要是屠宰時發現皮下脂肪變黃，影響肉品質量和銷售[1-2]。黃脂病的發病原因主要包括：飼料中含有色素含量高的原料，如含葉黃素的植物、胡蘿卜和南瓜等；飼料添加劑配方或生產工藝不合理，動物攝入較高的銅元素，缺少維生素E，食入過多的不飽和脂肪酸；錐蟲病、焦蟲病、附紅細胞體或鉤端螺旋體等病原侵入機體，引起紅細胞大量溶血；食入肝毒素植物、藥物或霉變飼料，影響肝臟功能；遺傳性因素，如缺少葉黃素氧化酶；其他影響紅細胞代謝的因素等[3-5]。近年來，隨著肉羊產業的現代化發展，高密度、集約化的飼養模式，銅元素常作為添加劑使用在飼料中，黃脂病的發生率逐年上升，綿羊一旦發生銅中毒，將給養殖戶帶來嚴重的經濟損失。已有關于黃脂病方面的研究報道，但關于綿羊因銅中毒而引起黃脂病的病理學變化鮮有報道。本試驗對近期收診的河南和山東某肉羊養殖場的黃脂病綿羊病例進行了病因診斷，并觀察分析其病理變化，推測其發生機制，揭示綿羊慢性銅中毒的病理特征，目的是為該病的臨床診斷和綜合防治提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 2017年冬—2019年春，河南省、山東省、山西省和內蒙古等地，多家集約化綿羊養殖場育肥羊發生黃脂病，河南農業大學獸醫病理實驗室收診并分析河南洛陽和山東菏澤發生黃脂病的病死綿羊標本，共6例。黃脂病標本的標準：患羊尿液呈暗紅色，剖檢病變為脂肪黃染。因黃脂病影響羊肉市場銷售，需查明其發病原因。

1.2 試驗方法 對送檢綿羊進行病理剖檢，記錄眼觀病變，分別采取心臟、肝臟、膽囊、脾臟、肺臟、腎臟、小腸及部分淋巴結，置10%福爾馬林溶液固定。固定的綿羊病理組織，經石蠟切片、H.E.染色置Olympus BX43顯微鏡下觀察。血液和新鮮肺臟、淋巴結進行涂片鏡檢，觀察是否存在弓形蟲、附紅細胞體、焦蟲等病原的感染。采取新鮮的綿羊血液、肝臟、腎臟，以及送檢病例養殖場的飼料，應用原子吸收法檢測其銅元素的含量。

2 結果

2.1 臨床發病和病理剖檢情況 臨床調查發現，因黃脂病死亡的綿羊約占羊場養羊總數量的2%～3%，發病羊為群體中營養狀態佳的個體，體溫、脈搏、呼吸未見明顯異常，臨床表現為行動遲緩，無神，可視黏膜蒼白、有的黃染，喜俯臥站立虛弱，走路搖晃，尿液呈暗紅色，病程久者轉為黑褐色，抗生素治療未見明顯效果，1～2周死亡。

多數患羊無明顯臨床癥狀，僅在屠宰時發現全身脂肪黃染，約占屠宰羊的5%，表現為皮下脂肪、腸系膜脂肪、腎脂肪和心臟冠狀脂肪均呈現黃色，脂肪黃染顏色過夜后消退至灰白色；肌肉淡黃色；腎臟腫大呈紅褐色至藍黑色，切片外翻、腎皮質、腎髓質和腎盂呈現均勻的紫黑色，切面結構模糊，質軟(圖1A)；肝臟輕度腫大、質軟，呈灰黃色，切面結構模糊，有小米粒樣膿腫灶；膽囊高度腫大，體積超過肝右葉的體積(圖1D)，充盈多量膽汁，膽汁濃稠，呈深綠色；膀胱內尿液呈現紫黑色；心臟質軟，蒼白色；淋巴結腫脹；脾臟無明顯異常變化。

圖1 綿羊慢性銅中毒病理學變化Fig.1 Pathological changes in sheep with chronic copper toxicosisA：腎臟； B：腎小管含大量血紅蛋白(箭頭)(H.E.染色)； C：腎小管和小動脈有大量血紅素沉積(箭頭)(H.E.染色)； D：肝臟及膽囊； E：肝臟膿腫(三角)，肝小葉周邊淋巴細胞浸潤(箭頭)(H.E.染色)； F：肝細胞沉著膽色素(箭頭)、細菌團塊(三角)(H.E.染色)。標尺=50 μmA:Kidney; B:Renal tubules contained large amount of hemoglobin (Arrow) (H.E.staining); C:Large protoheme was deposited in renal tubules and arterioles (Arrow) (H.E.staining); D:Liver and gall bladder; E:Liver abscess (Triangle),lymphocyte infiltration around hepatic lobule (Arrow) (H.E.staining); F:Bile pigment was deposited in hepatocytes (Arrow),bacterial clumps (Triangle) (H.E.staining). Bar=50 μm

2.2 涂片及病理組織學變化 顯微鏡下，綿羊主要表現為肝臟和腎臟的損傷和血紅素、膽色素的沉積，伴有小的膿腫病灶。血液、肺臟、淋巴結組織涂片鏡檢，未見弓形蟲、附紅細胞體、焦蟲等病原微生物。其他器官未見明顯病理變化。

腎臟的主要病理變化表現為嚴重的腎小管壞死和管型(圖1B)。腎小管上皮細胞內含大量褐色細顆粒樣物質，發生明顯的透明變性、有的腎小管上皮細胞溶解，腎小管管腔出現透明、均質、淡粉色的血紅蛋白管型，遠端腎小管充滿橙紅色、折光顆粒物質，表現為典型的血紅素管型(圖1C)。間質少量淋巴細胞浸潤。腎小球毛細血管內皮細胞和系膜細胞增生，部分腎小囊囊腔有少量蛋白樣物質滲出。

肝小葉結構不清，靠近中央靜脈的肝細胞呈局灶性壞死(圖1E)，竇狀隙水腫、變寬，少量淋巴細胞浸潤，肝細胞索斷裂、排列紊亂，匯管區小膽管增生，淋巴細胞浸潤，少量成纖維細胞增生。多量肝細胞腫大、界限模糊，表現有程度不同的水泡變性和細胞溶解，大量膽色素和含鐵血黃素沉著于肝細胞內或竇狀隙內。此外，肝組織中可見多個微小的局灶性膿腫灶，直徑30～50 μm，還可見細菌團塊(圖1F)。

2.3 綿羊組織和飼料銅元素的含量 血液、肝臟、腎臟及飼料中銅元素含量檢測結果見表1。綿羊血液、肝臟、腎臟和5%預混料中銅元素含量均高于正常水平，其中血液銅含量約為參考值的100倍，肝臟銅含量約為參考值的2倍，腎臟銅含量約為參考值的6倍，5%的預混料銅含量約為參考值的10倍。精飼料的銅含量處在參考值范圍。

表1 綿羊血液、組織和飼料中銅元素含量Table 1 The content of copper in blood,tissue and feed of sheep

3 討論

本試驗的綿羊黃脂病病例，從綿羊組織、血液和預混料中檢出較高含量的銅元素，結合病理學特征發現腎呈現均勻黑色；膽囊極度腫大，充盈多量膽汁；肝臟和腎臟沉著大量血紅蛋白和膽色素，送檢綿羊診斷為慢性酮中毒而引起的黃脂病。

銅是所有細胞都需要的一種重要的微量元素，正常時，銅與銅藍蛋白結合并貯存在肝細胞溶酶體中[6]。銅中毒是一種常見的中毒性疾病，見于多種動物，多由于飼料銅污染或攝食含銅制劑，或拮抗銅生物利用度的鉬攝入不足而引起[7]。需嚴格控制家畜使用銅的含量，如稍有過量即會中毒，威脅生命。銅中毒時，常因肝內漸進性銅蓄積而引起細胞損害，綿羊因很難調控銅貯存，因此比其他動物更敏感[8-10]。

本試驗發現，綿羊慢性銅中毒時黏膜、脂肪中出現大量的黃疸，肝臟、腎臟的病變明顯，其病理特征是肝細胞變性、壞死，枯否氏細胞和網狀內皮細胞吞噬含鐵血黃素，并伴有膽色素蓄積，膽囊充盈腫大，這與報道的結果一致[9-10]。肝臟的病理變化可能是當攝入的銅含量超過肝臟的代謝能力，銅釋放入血。銅能與紅細胞膜的巰基結合減少紅細胞內谷胱甘肽含量，產生活性氧并抑制還原性輔酶Ⅱ的活性，引起紅細胞膜損傷，降低紅細胞可變形性、增加膜滲透性，引起血管內溶血性貧血，血清中的血紅蛋白濃度增加[11]。血紅蛋白分解為膽紅素和膽綠素，形成膽汁。產生的自由基還損害脂質、蛋白質和核酸，誘發炎癥，引起肝細胞損傷[12-15]。

腎臟表現為腎小管壞死和管型，血紅蛋白尿性腎病，這與已有研究報道一致[4,15]。腎臟的病理變化可能是紅細胞溶血后，產生多量不能吸收或排泄的血紅蛋白，血紅蛋白與觸珠蛋白載體結合而進行運輸，一部分血紅蛋白進入腎小球過濾，但體積大，不能通過腎小球。血紅蛋白在載體消耗完后游離于血漿中，隨尿排出，增加了腎小管管腔內原尿的濃度，從而導致血紅蛋白尿性腎病。血紅蛋白本身對腎臟沒有傷害，然而，當腎小球濾液中含有高濃度的血紅蛋白時，由于紅細胞大量破壞，腎發生嚴重的貧血，會促進腎小管壞死，嚴重可導致腎功能衰竭[5,16]。但目前，研究者對綿羊肝臟、腎臟富集銅，脂肪黃染的機制仍不清楚，可能與肝臟代謝、紅細胞代謝、膽汁和尿液的生成與排泄有關。

過量的銅可誘發人體嘔吐、肝功能衰竭、腎功能衰竭、血尿、胃腸道出血、貧血、溶血、循環休克和死亡[17]。黃脂病患羊的肝臟、腎臟中銅含量分別為247 mg/(kg·bw)和35 mg/(kg·bw)，遠遠超過GB15199—94《食品中銅限量衛生標準》食品中銅的含量[≤10 mg/(kg·bw)]，這種綿羊副產品對人類健康是有害的，因此臨床防治慢性綿羊酮中毒病例的發生有利于動物福利及人類食品安全。

臨床早期的綿羊黃脂病不易診斷，需要借助病理剖檢技術結合病理組織學診斷。本試驗只對綿羊黃脂病的發病原因和病理組織學結構進行了初步了解，關于其形成過程和防控措施還需要進一步研究。此外，鉬可抑制銅的吸收，綿羊對銅敏感是否與鉬的吸收障礙有關，尚需進一步研究。