藥用膠塞中抗氧劑2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚含量測定及遷移量研究*

吳紅洋，李 莎，張 璞，任學(xué)毅，申麗莎，范能全△

（1.重慶市食品藥品檢驗檢測研究院，重慶 401121；2.重慶市中藥研究院，重慶 400061）

藥用膠塞多采用鹵化丁基膠塞，具有良好的穩(wěn)定性、耐熱性、生物性能等優(yōu)點，廣泛用于藥品包裝材料中。膠塞在生產(chǎn)過程中會加入某些抗氧劑，以延緩或抑制橡膠制品的老化，延長使用壽命［1-3］。在藥品貯存過程中，藥品膠塞中部分化學(xué)物質(zhì)可能會緩慢釋放，被藥物吸附，膠塞與藥物相容，影響藥品質(zhì)量，對人體健康造成潛在危害［4-5］。據(jù)報道，藥用膠塞中的抗氧劑2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚（BHT）會對頭孢類注射劑溶液的澄清度造成影響［6-7］。目前，其測定方法主要有高效液相色譜法［8-9］、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法［10-11］和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法［12-13］。液相色譜法中多以二氯甲烷作為提取溶劑，毒性較大，而與質(zhì)譜聯(lián)用法的檢測成本較高。本研究中采用氣相色譜法測定注射用無菌粉末用溴化丁基橡膠塞中抗氧劑BHT的含量，以及其在頭孢類注射劑中的遷移情況。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

GC-2010 Plus型氣相色譜儀（日本Shimadzu公司）；XPE205型電子天平（瑞士Mettler Toledo公司，精度為0.01 mg）；KQ-500DE型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率為500 W，頻率為40 kHz）；Multifuge X1R型高速冷凍離心機（賽默飛世爾科技＜中國＞有限公司）。

1.2 試藥

BHT標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號為128-37-0，Aladdin公司，批號為B1926023，純度＞99.7%）；乙酸乙酯（色譜純，Macklin公司，批號為C11232679）；注射用無菌粉末用溴化丁基橡膠塞（簡稱膠塞，湖北華強科技有限責(zé)任公司，批號為B2-201915）；注射用頭孢米諾鈉（北大醫(yī)藥股份有限公司，編號為B306）；注射用頭孢美唑鈉（重慶藥友制藥有限責(zé)任公司，編號為B901）；注射用頭孢他啶（福安藥業(yè)集團慶余堂制藥有限公司，編號為B301）；注射用頭孢米諾鈉（重慶天地藥業(yè)有限責(zé)任公司，編號為B401）；注射用鹽酸頭孢替安（重慶圣華曦藥業(yè)股份有限公司，編號為B404）；注射用頭孢曲松鈉（重慶科瑞制藥集團有限公司，編號為B005）；注射用頭孢唑肟鈉（西南藥業(yè)股份有限公司，編號為B043）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：DB-Waxetr毛細管柱（30 m×0.32 mm，1.00μm）；載氣：N2；進樣量：1μL；流速：2.0 mL/min；分流比：20∶1；柱溫：采用程序升溫，80℃保持5 min，以60℃/min的速率升至180℃并保持6 min，以相同的速率升至230℃并保持2 min；氣化室溫度：220℃；檢測器：火焰離子化檢測器，溫度為250℃。在此色譜條件下的色譜圖見圖1。可見，空白溶劑和樣品基質(zhì)對BHT的測定結(jié)果均無干擾，BHT在11.281 min時能得到較好分離。

圖1 氣相色譜圖Fig.1 GC chromatograms

2.2 溶液制備

標(biāo)準(zhǔn)溶液：取BHT對照品0.025 30 g，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加無水乙醇溶解并定容，精密移取5 mL，置50 mL容量瓶中，加乙酸乙酯溶解并定容，制成每1 mL含BHT 100.90μg的對照品中間貯備溶液。

膠塞提取溶液：取膠塞1.010 2 g，精密稱定，剪碎，置具塞刻度試管中，加入適量乙酸乙酯溶解，超聲［功率為500 W，頻率為40 kHz，溫度為（25±2）℃］提取30 min，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，用乙酸乙酯反復(fù)洗滌3次，合并提取液，定容，用0.22μm有機濾膜濾過，即得。

遷移樣品溶液：取遷移樣品1瓶，加0.9%氯化鈉注射液5 mL，溶解，加入適量乙酸乙酯，溶解，渦旋混勻1 min后離心處理（轉(zhuǎn)速為4 000 r/min）10 min，將上清液轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯洗滌1次，合并提取液，定容，用0.22μm有機濾膜濾過，即得。

遷移樣品加標(biāo)溶液：取遷移樣品（編號為B306）9瓶，分別加入0.9%氯化鈉注射液5 mL，溶解，其中3份作為樣品本底，其余6份均加入質(zhì)量濃度為100.90μg/mL的對照品中間貯備液0.1 mL，加入適量乙酸乙酯，溶解，渦旋混勻1 min后離心（轉(zhuǎn)速為4 000 r/min）10 min，取上清液，轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯洗滌1次，合并提取液，定容，用0.22μm有機濾膜濾過，即得。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：分別精密移取對照品中間貯備溶液適量，加乙酸乙酯配制成每1 mL含對照品質(zhì)量濃度分別為0.504 5，1.009 0，2.018 0，5.045 0，10.090 0，20.180 0，50.450 0μg的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。依法進樣測定，以進樣質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得BHT回歸方程Y=1 014.84X-126.939（r=1.000 0，n=7），表明BHT質(zhì)量濃度在0.504 5～50.450 0μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

檢測限與定量限確定：將對照品中間貯備溶液逐級稀釋，按2.1項下色譜條件進樣測定，以信噪比（S/N）為3∶1時的質(zhì)量濃度為檢測限，S/N為10∶1時的質(zhì)量濃度為定量限。結(jié)果方法的檢測限為0.201 8μg/mL，定量限為0.504 5μg/mL。

精密度試驗：取線性關(guān)系考察項下質(zhì)量濃度為5.045 0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別連續(xù)進樣測定6次。結(jié)果對照品溶液峰面積的RSD為1.44%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取線性關(guān)系考察項下質(zhì)量濃度為5.045 0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別于0，3，6，10，19，28 h時進樣測定。結(jié)果BHT峰面積的RSD均小于1.72%（n=6），表明對照品溶液在28 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗：按2.2項下方法制備遷移樣品加標(biāo)溶液，按2.1項下色譜條件進樣分析，并計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗結(jié)果（n=6）Tab.1 Results of the recovery test（n=6）

2.4 樣品含量測定

取2.2項下膠塞提取溶液與遷移樣品溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，以外標(biāo)法計算BHT的含量。結(jié)果見表2。

表2 藥用膠塞中BHT含量和各批頭孢類注射劑中BHT遷移量測定結(jié)果（μg/g）Tab.2 Results of determination of BHT content in medicinal rubber stopper and BHT migration in each batch of cephalosporins injection（μg/g）

3 討論

3.1 前處理條件優(yōu)化

曾以色譜純乙酸乙酯和無水乙醇作為提取溶劑，提取方式包括振蕩提取、超聲提取和微波萃取，提取時間選擇10，20，30，40 min。結(jié)果表明，以乙酸乙酯作為提取溶劑，超聲提取30 min（溫度低于20℃），對樣品進行前處理，樣品中BHT提取效果最好，回收率較高，且該前處理選擇的提取溶劑毒性較小，操作簡單、快速。

3.2 色譜條件優(yōu)化

曾選用DB-5和DB-WAX色譜柱，以BHT在毛細管柱上的保留性、分離度、峰形為判斷依據(jù)，通過優(yōu)化升溫程序、流速、氣化室溫度等儀器參數(shù)。最終在優(yōu)化后的色譜條件下，BHT在11.281 min時可得到有效分離，且目標(biāo)物質(zhì)附近無雜質(zhì)干擾，該方法能滿足系統(tǒng)適用性試驗要求，測定結(jié)果準(zhǔn)確。

3.3 安全性評價

《歐洲藥典（7.0版）》要求塑料包裝材料中的BHT添加限度不得超過0.125%［14］，美國食品藥物管理局批準(zhǔn)藥物非活性成分數(shù)據(jù)庫規(guī)定靜脈注射類抗氧劑BHT最大用量為0.002%［15］。本試驗中膠塞和藥品（注射用頭孢他啶，編號為B301）中BHT最高含量分別為0.006%和0.001%，均在規(guī)定限度范圍內(nèi)。但隨著加速試驗的進行，該藥品BHT遷移量可能會增加，存在一定安全隱患，應(yīng)加強對BHT含量的控制。

3.4 方法評價

本方法前處理簡單、快速，靈敏度和準(zhǔn)確度均較高，重復(fù)性良好，應(yīng)用范圍較廣，可用于藥用膠塞中BHT的含量及在藥品中遷移量的測定，同時可為后續(xù)研究頭孢類注射劑澄清度的影響因素提供參考。