分光光度法測定破壁靈芝孢子粉中三萜類化合物的含量

2022-01-20 06:31:56施慧君吳韻瑤袁筱怡吳小玲鐘小紅

現代食品 2021年23期

◎ 施慧君，吳韻瑤，袁筱怡，吳小玲，鐘小紅

（廣東省食品安全學會，廣東廣州 510100）

靈芝，是多孔菌科真菌靈芝的子實體，三萜類化合物是靈芝的主要化學成分之一。靈芝孢子粉是靈芝在生長發育后期從靈芝菌褶中噴射出來的極其微小的卵形生殖細胞，能夠將靈芝的遺傳物質全部保留下來。靈芝孢子內含有靈芝子實體幾乎所有的活性物質，包含多糖類、三萜類、蛋白質、甾醇類、核苷類、微量元素等，且部分活性物質如總三萜、總多糖含量明顯高于靈芝子實體，同時在抗腫瘤、抗氧化、增強免疫力等方面表現出更加明顯的效果，因此靈芝孢子粉已成為當前研究和開發的熱點，成為保健品市場上最受消費者青睞的產品之一[1-2]。總三萜物質的檢測多以熊果酸或齊墩果酸為對照品，采用分光光度法，應用香草醛-高氯酸顯色法，測定其含量[3-4]。本實驗以破壁靈芝孢子粉為樣品，參照《中國藥典》三萜及甾醇檢測方法[5]，進行線性關系、穩定性、重復性、回收率的驗證，確定一種應用于靈芝孢子粉三萜及甾醇含量的簡便、快速、科學的檢測方法。

1 材料與方法

1.1 儀器

分析天平：PTX-FA1004型，美國康州HZ電子科技有限公司；單孔水浴鍋：HH-2K1型，河南鞏義予華儀器有限公司；數控超聲波清洗器：KQ2200DE型，昆山市超聲儀器有限公司；紫外可見分光光度計：UV-2600型，島津企業管理（中國）有限公司。

1.2 試劑

齊墩果酸（91.7%，20 mg，中國食品藥品檢定研究院）；乙醇；高氯酸；冰醋酸；香草醛；乙酸乙酯；甲醇（除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純）。

1.3 標準品溶液的制備

取齊墩果酸對照品10.00 mg至50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，配制成濃度為0.1834 mg·mL-1的標準品溶液。

1.4 實驗方法

1.4.1 標準曲線的制備

精密量取對照品溶液0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、 0.4 mL、0.5 mL，分別置于15 mL具塞試管中，揮干，放冷，精密加入新配制的5%香草醛冰醋酸溶液（精密稱取香草醛0.5 g，加冰醋酸使溶解成10 mL，即得）0.2 mL，高氯酸0.8 mL，搖勻，在70 ℃水浴中加熱15 min，立即置冰浴中冷卻5 min，取出，精密加入乙酸乙酯 4 mL，搖勻，以相應的試劑為空白，通過紫外-可見分光光度法（《中華人民共和國藥典2015年版四部》通則0401）在546 nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

1.4.2 供試品溶液的制備

取本品粉末約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加乙醇50 mL，超聲處理（功率100 W，頻率 40 kHz）45 min，濾過，濾液置于100 mL量瓶中，用適量乙醇，分次洗滌濾器和濾渣，濾液并入同一量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得。

1.4.3 供試品的測定

精密量取供試品溶液0.1 mL，置15 mL具塞試管中，照標準曲線制備項下的方法，自“揮干”起，同法操作，測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中齊墩果酸的含量，計算，即得。

1.4.4 分析結果計算

按下式計算試樣中三萜及甾醇的含量：

式中：X為樣品的三萜及甾醇含量，g/100 g；A為樣品測定的吸光度值；b為標準曲線回歸方程的截距；n為稀釋倍數；a為標準曲線回歸方程的斜率；m為樣品稱樣量，g；V為樣品的測定體積，mL；100、1000為換算系數。

2 結果與分析

2.1 原理

本方法利用三萜及甾醇在強氧化性酸高氯酸的存在下，氧化脫氫形成雙鍵再與反應體系中的香草醛縮合顯色，用分光光度計測定其吸光度值。

2.2 線性試驗

取齊墩果酸對照品溶液，依次精確移取0.1 mL、 0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL于具塞試管中，揮干，依照“1.4”方法步驟測定吸光度，以吸光度為縱坐標，齊墩果酸對照品溶液濃度為橫坐標，得線性回歸方程為y=7.54560x-0.01161，相關系數R2=0.99954，表明本方法在0.01834～0.09170 mg·mL-1濃度范圍內呈良好的線性關系，如圖1所示。