食管癌miR-552表達與CT征象相關(guān)性分析

王 彬，楊 璐

食管癌是導(dǎo)致癌癥患者死亡的最常見原因，迄今為止的標準診斷方法包括射線照相術(shù)、超聲和磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)[1]。食管癌的檢測基于細微的結(jié)構(gòu)變形、顯示接近正常組織密度的腫塊、皮膚增厚和微鈣化[2]。組織病理學上，食管癌通常表現(xiàn)為腺癌或鱗狀細胞癌。T1～2a期腫瘤單純手術(shù)治療和局部晚期放化療和手術(shù)三聯(lián)治療僅限于無遠處轉(zhuǎn)移的患者。由于癥狀出現(xiàn)較晚，大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時已屬疾病晚期，主要采用非手術(shù)治療，例如放療和/或化療，導(dǎo)致預(yù)期的5 a生存率低于15%[3]。

MicroRNAs(miRNAs)是一類含有約22個核苷酸的非編碼小RNA分子，存在于植物、動物和一些病毒中，能夠在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上調(diào)節(jié)基因表達miRNAs[4]。有證據(jù)表明miRNAs在細胞增殖、凋亡、分化和遷移等多種生物學過程中發(fā)揮重要作用。更多的研究還發(fā)現(xiàn)miRNA調(diào)節(jié)多種癌癥的增殖、凋亡、轉(zhuǎn)移和代謝，包括食管癌、肺癌、肝癌和卵巢癌[5]。因此，miRNA還可以作為潛在的預(yù)后生物標志物和各種癌癥的新治療靶點。miR-552是一種新發(fā)現(xiàn)的miRNA，促進結(jié)直腸癌細胞增殖[6]。然而，miR-552在食管癌中的作用鮮為人知。目前，基于血液或組織中腫瘤標志物的非侵入性癌癥檢測方法已引起廣泛關(guān)注。本研究重點分析食管癌組織miR-552表達水平，并與CT征象進行對比研究，為臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料2018年1月至2021年4月漯河市中醫(yī)院外科液氮凍存的61例食管癌組織，男41例，女20例；年齡25～60(51.27±6.82)歲，同時選取相應(yīng)的患者癌旁正常組織作為對照組。納入標準：①病理檢查確診為食管癌的患者。②患者術(shù)前未接受放化療及其他治療。排除標準：獲得癌組織但無對應(yīng)癌旁正常組織；樣本因保存不當導(dǎo)致RNA降解，或石蠟包埋標本。提前告知患者標本采集情況，簽署知情同意書，經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 方法所有受試者在檢查前禁食6 h以上，患者處于仰臥位，使用美國GE64層螺旋CT進行常規(guī)平掃。掃描參數(shù)為：間距1.5 mm，切片厚度10 mm，電壓120 kV，電流160 mA。普通掃描后，從肘正中靜脈以3.5～4 mL·s-1的流速靜脈注射80 mL碘海醇。增強掃描參數(shù)設(shè)置如下：切片厚度5 mm，管電壓130 kV，120 ma·s-1。圖像由放射科主治醫(yī)師(至少2名)共同分析。

1.3 qRT-PCR檢測miR-552表達水平使用TRIzol試劑(Invitrogen，美國)分離總RNA。采用PrimeScript miRNA cDNA試劑盒(TaKaRa，日本)進行逆轉(zhuǎn)錄。使用SYBR Premix Ex Taq I進行RT-PCR，U6用作miRNA的內(nèi)參基因。實驗中使用的引物由上海鉑尚生物科技有限公司提供，miR-552上游序列：5’-GTAGAGTGTGTGGTCCCAGT-3’，下游：5’-CAGGGAGACCTGTATGGTCC-3’，產(chǎn)物大小93bp；內(nèi)參U6上游序列：5’-CGAGCGCCACTTCAGAATA-3’，下游序列：5’-CTCACGGCGCTTCATCAGAT-3’，長度139 bp。采用2-ΔΔCt方法計算miR-552相對表達水平。

1.4 統(tǒng)計分析采用SPSS 21.0軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，應(yīng)用t檢驗對計量資料、χ2檢驗對計數(shù)資料進行統(tǒng)計分析，ROC用于評估m(xù)iR-552的診斷價值，采用Spearman 進行秩相關(guān)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-552水平比較qRT-PCR顯示，癌組織miR-552表達水平(9.12±2.27)明顯高于癌旁組織(3.12±1.24)，差異有統(tǒng)計學意義(t=18.117，P<0.01)。

2.2 miR-552水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系表1顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、中低分化、T3-4期的患者的miR-552水平明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、高分化、T1～2期患者的表達水平(P<0.05)。

表1 miR-552水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 不同CT征象患者miR-552表達水平表2、圖1-2顯示，miR-552水平在不同腫塊大小、腫塊邊緣有無毛刺方面差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，在有無微小鈣化點、不同腫塊形態(tài)、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

圖1 CT平掃

圖2 CT增強

表2 不同CT征象患者miR-552表達水平

2.4 CT征象與miR-552水平相關(guān)性Spearman秩相關(guān)分析顯示，miR-552與微小鈣化點、腫塊形態(tài)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 CT征象聯(lián)合miR-552對食管癌診斷結(jié)果

2.5 miR-552和CT征像評估食管癌嚴重程度的價值CT的ROC曲線下面積AUC為0.781，miR-552為0.701，聯(lián)合檢測為0.890。見圖3、表4。

圖3 ROC曲線

表4 CT、miR-552診斷食管癌的價值 %

3 討論

miRNA在各種癌癥中表現(xiàn)出特定的變化，并且在血清或組織中穩(wěn)定，可作為有效的生物標志物用于疾病的診斷和監(jiān)測。miR-552是一種新發(fā)現(xiàn)的miRNA，其在生物過程和疾病中的功能和作用機制尚不完全清楚[7]。先前的研究發(fā)現(xiàn)，miR-552通過Wnt/β-catenin信號通路直接靶向DACH1來促進結(jié)直腸癌細胞進展[8]。此外，miR-552還通過靶向解聚素、金屬蛋白酶增強結(jié)直腸癌細胞的轉(zhuǎn)移能力[9]。另外，miR-552通過抑制AJAP1表達促進肝癌細胞的增殖、遷移和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial to mesenchy-maltransition, EMT)[10]。然而，miR-552在食管癌中的作用尚不清楚。本研究通過PCR檢測表明，miR-552在食管癌組織中高表達，并與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、TNM分期相關(guān)。通過繪制ROC曲線，發(fā)現(xiàn)miR-552診斷曲線下面積為0.701，靈敏度和特異度分別為65.5%、76.8%。由此推測miR-552可作為食管癌的生物標志物，可能具有評估腫瘤進展的能力。

CT光譜成像用于區(qū)分食管癌患者的病理變化、食管癌的診斷具有一定的價值[11]。本研究對患者進行CT檢查，結(jié)果顯示CT診斷敏感性為70.8%，特異性為57.8%，表明CT可用于鑒別食管癌，但診斷效率不高。對于非典型病變，常規(guī)CT有一定的局限性，而且CT檢查過程中存在間歇性偽影，容易漏掉一些具有診斷意義的快速、短暫的特征變化，造成漏診、誤診。然而，許多研究顯示了血清或組織標志物結(jié)合CT診斷的價值，而且不同細胞因子的異常表達會導(dǎo)致腫瘤組織圖像表現(xiàn)出不同的差異。本研究中，miR-552水平在微小鈣化點有無、不同腫塊形態(tài)、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面差異均有統(tǒng)計學意義，這與腫瘤組織增殖、遷移、分化程度密切相關(guān)，也反映了腫瘤指標與影像學相結(jié)合的價值。而且通過miR-552聯(lián)合CT檢測，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合診斷的敏感性、特異性分別為71.9%和92.6%，聯(lián)合診斷的效果明顯。這也提示可以通過聯(lián)合檢測來彌補兩者之間的缺陷，從而獲得更好的診斷價值和更高的特異性，更有利于食管癌的診斷。

總之，食管癌miR-552表達與CT征像存在一定的相關(guān)性，將miR-552表達與CT征像相結(jié)合，可準確判斷食管癌的惡性程度。本研究結(jié)果也顯示，miR-552表達水平與邊緣有無毛刺差異無統(tǒng)計學意義，這可能與樣本過少有關(guān)，還有待進一步研究探討。