口腔清潔用品微生物檢驗(yàn)方法的探討

魏 星 陳 軍 李洪釗 胡素文 安豐偉 趙樂(lè)榮

(1.煙臺(tái)新時(shí)代健康產(chǎn)業(yè)日化有限公司，2.煙臺(tái)開(kāi)發(fā)區(qū)第六初級(jí)中學(xué) 山東 煙臺(tái) 264006)

近年來(lái)隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，國(guó)民人均收入水平不斷提高，消費(fèi)者對(duì)口腔健康的重要性的意識(shí)不斷提升，促進(jìn)了口腔清潔護(hù)理用品的消費(fèi)升級(jí)。口腔清潔護(hù)理用品作為消費(fèi)者日常必需品，擁有龐大的消費(fèi)群體，市場(chǎng)呈現(xiàn)出巨大的增長(zhǎng)潛力。從我國(guó)口腔清潔護(hù)理用品行業(yè)市場(chǎng)規(guī)模、行業(yè)內(nèi)專業(yè)機(jī)構(gòu)預(yù)測(cè)和對(duì)重點(diǎn)品牌市場(chǎng)份額占比分析來(lái)看，2017～2021年我國(guó)口腔清潔護(hù)理用品行業(yè)市場(chǎng)規(guī)模呈逐年上升趨勢(shì)，年增長(zhǎng)率在7%左右。2021年我國(guó)口腔清潔護(hù)理用品行業(yè)市場(chǎng)規(guī)模為521.73億元，較2020年同比增長(zhǎng)4.56%。在產(chǎn)品消費(fèi)結(jié)構(gòu)上，牙膏、牙刷是口腔清潔護(hù)理市場(chǎng)的主要品類。牙膏占我國(guó)口腔清潔護(hù)理用品行業(yè)市場(chǎng)規(guī)模的比重為59.72%，牙刷(含電動(dòng)牙刷)占我國(guó)口腔清潔護(hù)理用品行業(yè)市場(chǎng)規(guī)模的比重為33.87%，漱口水/漱口液、牙線等細(xì)分品類占我國(guó)口腔清潔護(hù)理用品行業(yè)市場(chǎng)規(guī)模的比重為4.80%和1.06%。

本研究以我國(guó)口腔清潔護(hù)理行業(yè)國(guó)家法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)情況分析為基礎(chǔ)，結(jié)合牙膏、漱口水等口腔清潔護(hù)理用品實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中微生物指標(biāo)的控制數(shù)據(jù)，對(duì)主要微生物指標(biāo)的檢測(cè)方法進(jìn)行評(píng)價(jià)，以期為監(jiān)管部門(mén)和口腔清潔護(hù)理用品生產(chǎn)企業(yè)微生物指標(biāo)檢測(cè)提供參考依據(jù)。

1 口腔清潔護(hù)理用品法規(guī)現(xiàn)狀

牙膏作為日用口腔主打產(chǎn)品，在口腔清潔用品用品中占比較大。從2006年起，經(jīng)原國(guó)家質(zhì)監(jiān)總局批準(zhǔn)，牙膏產(chǎn)品正式列入國(guó)家生產(chǎn)許可管理。2008年，為適應(yīng)我國(guó)牙膏產(chǎn)品安全性管理的需要，中國(guó)口腔清潔護(hù)理用品工業(yè)協(xié)會(huì)起草發(fā)布了國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《牙膏用原料規(guī)范(GB 22115-2008)》，對(duì)牙膏行業(yè)的規(guī)范發(fā)展管理起到重要指導(dǎo)作用。2016年，原國(guó)家食藥監(jiān)總局制定《化妝品生產(chǎn)許可工作規(guī)范》，將牙膏生產(chǎn)管理并入化妝品范圍。2021年1月1日正式發(fā)布實(shí)施的《化妝品監(jiān)督管理?xiàng)l例》是化妝品行業(yè)基本法規(guī)，《條例》中明確規(guī)定牙膏產(chǎn)品參照普通化妝品管理，并另行制定管理辦法。在2020年11月13日，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布了《牙膏監(jiān)督管理辦法(征求意見(jiàn)稿)》，闡明了牙膏監(jiān)管的基本原則和要求。牙膏產(chǎn)品將全面納入化妝品監(jiān)管，除原有的生產(chǎn)許可管理以外，將增加產(chǎn)品備案、原料備案注冊(cè)、產(chǎn)品宣稱用語(yǔ)、產(chǎn)品功效驗(yàn)證、安全性評(píng)價(jià)、不良反應(yīng)等多方面管理新內(nèi)容。所有牙膏企業(yè)都將面臨嚴(yán)峻的形勢(shì)，勢(shì)必要對(duì)牙膏產(chǎn)品的生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)進(jìn)行合規(guī)性評(píng)價(jià)和調(diào)整。

根據(jù)《牙膏監(jiān)督管理辦法( 征求意見(jiàn)稿) 》內(nèi)容，不難看出國(guó)家對(duì)于牙膏產(chǎn)品的重視程度和監(jiān)管力度，要求牙膏原料、產(chǎn)品必須注冊(cè)、備案，備案牙膏必須通過(guò)檢驗(yàn)，功效型牙膏必須通過(guò)功效評(píng)價(jià)等。而相對(duì)于化妝品管理，牙膏產(chǎn)品由于其與口腔環(huán)境的密切相關(guān)性，原料的使用和工藝過(guò)程風(fēng)險(xiǎn)物質(zhì)的引入應(yīng)進(jìn)行更加嚴(yán)格的安全性評(píng)估，從這一點(diǎn)上看，國(guó)家監(jiān)管更注重維護(hù)消費(fèi)者的健康權(quán)益。而牙膏產(chǎn)品，在各國(guó)監(jiān)管分類中的界定不同，對(duì)防腐劑或抗菌劑的使用要求也有所不同，例如在日本，牙膏屬于醫(yī)藥部外品，在《藥機(jī)法》中，對(duì)注冊(cè)申請(qǐng)事項(xiàng)及內(nèi)容有明確的規(guī)定，包括產(chǎn)品配方、制造方法、用法及用量、功能或效果、產(chǎn)品規(guī)格及檢查方法，另對(duì)原料的使用和產(chǎn)品的批次驗(yàn)證數(shù)據(jù)有要求。藥用牙膏類生產(chǎn)銷售許可(包括漱口水)也有相應(yīng)的原料允許使用名錄要求。

漱口水/漱口液也稱為含漱劑，作為非生產(chǎn)許可管理要求的工業(yè)產(chǎn)品，相對(duì)于牙膏監(jiān)管來(lái)說(shuō)，尚未得到相應(yīng)的關(guān)注與重視。漱口水產(chǎn)品在質(zhì)量控制上，應(yīng)符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《口腔清潔護(hù)理液(QB/T 2945-2012)》的要求，其中條款4.1規(guī)定口腔清潔護(hù)理液產(chǎn)品所用原料應(yīng)符合《牙膏用原料規(guī)范(GB 22115)》，從目前牙膏相關(guān)法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)變更和QB/T 2945正在進(jìn)行修訂的情況來(lái)看，對(duì)經(jīng)過(guò)口腔渠道進(jìn)入或接觸人體黏膜的產(chǎn)品，國(guó)家是持逐步開(kāi)展、持續(xù)加嚴(yán)的態(tài)度，后續(xù)也勢(shì)必在現(xiàn)有監(jiān)管要求上不斷完善法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)。

綜上所述，在新的監(jiān)管形勢(shì)下，作為口腔清潔護(hù)理用品的生產(chǎn)企業(yè)，應(yīng)更加關(guān)注相關(guān)產(chǎn)品的法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)變化，盡快或提前進(jìn)行安全性的評(píng)估，適當(dāng)調(diào)整，以適應(yīng)監(jiān)管的要求，保障消費(fèi)者權(quán)益。

2 口腔清潔護(hù)理用品微生物指標(biāo)的設(shè)置

口腔清潔護(hù)理產(chǎn)品法規(guī)的變更對(duì)企業(yè)影響較大的主要來(lái)自監(jiān)管部門(mén)的抽查、銷售終端的審核、消費(fèi)者的反饋與舉報(bào)。我們不難看出，新法規(guī)下監(jiān)管的導(dǎo)向重點(diǎn)一方面在于功效的確定，針對(duì)市場(chǎng)上功效宣稱混亂，部分宣稱與藥品、醫(yī)療器械界限模糊的問(wèn)題。另一方面在于牙膏新原料、經(jīng)國(guó)家批準(zhǔn)的食品添加劑或食品原料在牙膏產(chǎn)品中首次使用的安全性評(píng)估。但是從產(chǎn)品質(zhì)量的體驗(yàn)感及消費(fèi)者使用安全性的角度來(lái)說(shuō)，保證產(chǎn)品微生物指標(biāo)的穩(wěn)定和可控更為直觀和重要。

牙膏、漱口水等口腔清潔護(hù)理產(chǎn)品由于其配方中含有豐富的蛋白質(zhì)、糖類、醇類化合物和水分，利于微生物的生長(zhǎng)和繁殖，會(huì)導(dǎo)致其腐敗變質(zhì)，而且在生產(chǎn)制造、運(yùn)輸、及使用過(guò)程中有可能受到原料、包材材料引入、車間環(huán)境、設(shè)備微生物的污染。因此，為保證產(chǎn)品質(zhì)量可控，通常在配方設(shè)計(jì)時(shí)考慮加入適當(dāng)?shù)姆栏瘎┯糜诮档臀⑸镂廴镜娘L(fēng)險(xiǎn)。

根據(jù)《牙膏用原料規(guī)范(GB 22115)》規(guī)定，牙膏產(chǎn)品可使用防腐劑應(yīng)符合該標(biāo)準(zhǔn)表5的要求。在表5的范圍內(nèi)，國(guó)內(nèi)大多口腔清潔護(hù)理產(chǎn)品(包括牙膏和漱口水)所選用的防腐劑或抗菌劑主要包括尼泊金酯及其鹽類、苯甲酸及其鹽類和酯類、苯甲醇、苯氧乙醇、多元醇、西吡氯銨等。隨著行業(yè)法規(guī)的不斷趨嚴(yán)，生產(chǎn)環(huán)境的不斷改善，很多牙膏生產(chǎn)企業(yè)在研發(fā)配方時(shí)，選用具有抗菌效果的非防腐劑或本身性質(zhì)不易感染微生物的成分，如月桂醇硫酸酯鈉、聚乙二醇等，配合嚴(yán)控直接接觸物料的包材質(zhì)量，營(yíng)造零防腐劑添加的“健康”理念，也利于產(chǎn)品營(yíng)銷和宣傳。有研究表明[1]，定植于人體口腔的微生物群落對(duì)人體健康表征起到重要的作用，當(dāng)微生物群落與宿主間生態(tài)關(guān)系失衡時(shí)，不僅可誘發(fā)多種口腔疾病，嚴(yán)重危害口腔健康。微生物群落的存在是常態(tài)，失衡的狀態(tài)才是最值得關(guān)注的。產(chǎn)品配方中添加的防腐劑成分，在符合法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的種類和添加量?jī)?nèi)，安全性已經(jīng)得到驗(yàn)證。其主要作用是為了維系產(chǎn)品生命周期內(nèi)的安全，避免高頻次的使用引入微生物造成產(chǎn)品變質(zhì)，而不是為了在使用過(guò)程中，對(duì)口腔微生物群落產(chǎn)生抑制的作用。相對(duì)于不添加防腐劑的配方，需要慎重選擇體系和用料的配方，并且進(jìn)行長(zhǎng)期和加速試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證，由此看來(lái)，添加適量的防腐劑，保持產(chǎn)品生命周期的安全性，是生產(chǎn)企業(yè)“經(jīng)濟(jì)適用型”方案。在行標(biāo)準(zhǔn)中微生物指標(biāo)的設(shè)置和檢測(cè)方法的匯總見(jiàn)表1。

表1 口腔清潔護(hù)理用品微生物指標(biāo)及檢測(cè)方法一覽表

4 微生物檢測(cè)方法

認(rèn)識(shí)到微生物指標(biāo)控制的重要性，如何準(zhǔn)確檢驗(yàn)產(chǎn)品中微生物的量對(duì)生產(chǎn)企業(yè)出廠控制非常重要。除去產(chǎn)品生產(chǎn)過(guò)程中設(shè)計(jì)添加的微粒、工藝引入的氣泡等干擾因素外，防腐劑、具有防腐功效的成分，在試驗(yàn)條件下可能會(huì)對(duì)培養(yǎng)的微生物產(chǎn)生干擾，抑制或殺滅其活性，使檢測(cè)結(jié)果不能真實(shí)地反映該批次產(chǎn)品中微生物的種類和數(shù)量。

根據(jù)《化妝品安全技術(shù)規(guī)范(2015版)》規(guī)定，菌落總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)的檢驗(yàn)均是將樣品進(jìn)行1∶10稀釋，然后進(jìn)行培養(yǎng)、平板計(jì)數(shù)。所得結(jié)果表明產(chǎn)品在規(guī)定的條件下生長(zhǎng)的嗜中溫的需氧性和兼性厭氧菌落總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)，基本可以判明樣品被微生物污染的程度，可以反映出樣品在衛(wèi)生學(xué)上的總評(píng)價(jià)，通常作為產(chǎn)品微生物指標(biāo)出廠驗(yàn)收依據(jù)。《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》中可使用的防腐劑多達(dá)51種，且在配方中可進(jìn)行復(fù)配，如何在微生物檢驗(yàn)過(guò)程中消除防腐劑的干擾是檢測(cè)方法需要明確的內(nèi)容。

菌落總數(shù)檢測(cè)方法所使用的培養(yǎng)基中含有0.1%卵磷脂和0.7%吐溫-80，其作用是中和劑用于消除防腐劑對(duì)試驗(yàn)的影響。李林等[2]的試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，卵磷脂和吐溫-80作為中和劑，主要用于消除洗必泰、季銨鹽類抗菌劑的影響，不針對(duì)所有的防腐劑種類，且不同稀釋倍數(shù)也對(duì)結(jié)果有顯著的影響。《規(guī)范》中霉菌和酵母菌總數(shù)檢測(cè)方法所使用的培養(yǎng)基中未添加中和劑成分。鄭萍，孫宗科等[3]對(duì)中和劑對(duì)化妝品中霉菌和酵母菌檢測(cè)結(jié)果的影響進(jìn)行了研究。試驗(yàn)結(jié)果表明，卵磷脂和吐溫-80能提高化妝品中霉菌和酵母菌的檢測(cè)結(jié)果，在化妝品的霉菌和酵母菌檢測(cè)中應(yīng)加入中和劑以提高檢出率，減少假陰性檢測(cè)結(jié)果的發(fā)生。文霞，楊秀茳等[4]對(duì)不同中和劑對(duì) Petrifilm測(cè)試片檢測(cè)化妝品中微生物的影響進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)吐溫- 80 的質(zhì)量濃度、半胱氨酸分別可影響細(xì)菌總數(shù)、大腸菌群、金黃色葡萄球菌的檢測(cè)結(jié)果。

而對(duì)比藥品的微生物檢驗(yàn)，在《中華人民共和國(guó)藥典》通則1105非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法中明確“如供試品有抗菌活性，應(yīng)盡可能去除或中和。供試品檢查時(shí)，若使用了中和劑或滅活劑，應(yīng)確認(rèn)其有效性及對(duì)微生物無(wú)毒性。”并對(duì)藥品中常用抗菌劑及選用的中和劑進(jìn)行了列表介紹，對(duì)要求針對(duì)不同微生物種類開(kāi)展培養(yǎng)基適用性檢查。

不難看出，產(chǎn)品出廠微生物限度檢測(cè)或者防腐挑戰(zhàn)試驗(yàn)是為了通過(guò)結(jié)果準(zhǔn)確反映出產(chǎn)品微生物污染種類及數(shù)量，在檢測(cè)方法的設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)充分考慮采用有效措施排除各種干擾因素，因此針對(duì)不同配方成分和考察的目標(biāo)菌種，進(jìn)行方法學(xué)的設(shè)計(jì)和驗(yàn)證是有必要的。相較于藥品管理，我國(guó)的化妝品、口腔清潔護(hù)理用品微生物檢驗(yàn)方法的前沿性探索還是有很大的發(fā)展空間。

5 益生菌口腔清潔護(hù)理用品

有研究表明[5]，定植于人體口腔的微生物群落對(duì)人體健康表征起到重要的作用，當(dāng)微生物群落與宿主間生態(tài)關(guān)系失衡時(shí)，不僅可誘發(fā)多種口腔疾病，嚴(yán)重危害口腔健康。近年來(lái)，益生菌的使用雖然在各行業(yè)內(nèi)存在爭(zhēng)議，對(duì)應(yīng)用其活菌、死菌還是其代謝產(chǎn)物沒(méi)有定論，但是不僅在醫(yī)療領(lǐng)域在人體口腔、消化道(胃腸道)及生殖系統(tǒng)等多個(gè)系統(tǒng)得到了廣泛應(yīng)用，在日用口腔產(chǎn)品和肌膚護(hù)理產(chǎn)品上的應(yīng)用也得到了廣泛關(guān)注和發(fā)展[6]。益生菌在口腔產(chǎn)品中應(yīng)用，能夠降低齲齒的風(fēng)險(xiǎn)、改善牙周狀況、輔助提高口腔黏膜病的治療效果。

很多日化企業(yè)在口腔產(chǎn)品和肌膚護(hù)理產(chǎn)品的設(shè)計(jì)開(kāi)發(fā)上，也充分考慮到維護(hù)使用部位微生態(tài)的重要性，在配方中除了添加避免有害菌增殖的防腐劑，也添加適應(yīng)使用部位的有益菌群。益生菌的引入，是一個(gè)從根本上解決問(wèn)題的方案，可以有效抑制口腔中有害菌的生長(zhǎng)和繁殖，維系口腔菌群平衡。而防腐劑在配方中的使用有助于預(yù)防微生物的滋生和繁殖，但與配方中添加的益生菌或其生存的微環(huán)境之間是否產(chǎn)生影響，值得關(guān)注和探討。

6 總結(jié)

近年來(lái)，化妝品法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)飛速發(fā)展，監(jiān)管規(guī)范和檢驗(yàn)方法也在逐步豐富和完善。相較于藥品、化妝品，口腔清潔護(hù)理用品以其獨(dú)特的作用部位更應(yīng)引起更多的關(guān)注。在微生物限度檢測(cè)方面，可以借鑒藥品、化妝品的經(jīng)驗(yàn)，在中和劑選擇、培養(yǎng)基適用性、方法學(xué)驗(yàn)證等方面進(jìn)行系統(tǒng)化的研究，打造口腔清潔護(hù)理用品法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)體系，為生產(chǎn)企業(yè)配方開(kāi)發(fā)和品質(zhì)控制提供依據(jù)，保障消費(fèi)者使用安全。

參考文獻(xiàn)(略)