HPLC法檢測猴耳環(huán)提取物及猴耳環(huán)牙膏中沒食子酸含量

夏美蓮 徐媛婷

(江西誠志日化有限公司，江西 南昌 330013)

引言

沒食子酸(Gallic acid，GA)又稱五倍子酸或棓酸，是一種有機(jī)酸，可見于五倍子、漆樹、茶等植物中。化學(xué)式C6H2(OH)3COOH。沒食子酸易溶于水、醇和醚，具有酚(易被氧化和三氯化鐵水溶液生成藍(lán)黑色沉淀)及羧酸(加熱時失去二氧化碳成焦性沒食子酸)的性質(zhì)。以沒食子酸為原料可以合成沒食子酸酯類化合物，沒食子酸的烷基酯根據(jù)烷基碳原子個數(shù)可分為低級酯(如甲酯、乙酯、丙酯等)和高級酯(如辛酯、月桂酯、十八碳醇酯等)，這些酯類化合物都是性能優(yōu)良的食品抗氧化劑。根據(jù)李肖玲的報道，沒食子酸還有抗炎、抗突變、抗氧化、抗自由基等多種生物學(xué)活性[1]。鄭雪花等[2]認(rèn)為沒食子酸對食源性致病菌(沙門菌、志賀鄰單胞菌)，金黃色葡萄球菌，大腸桿菌，枯草芽孢桿菌及變形鏈球菌均具有抑菌作用，且對革蘭陰性菌的抗菌作用高于革蘭陽性菌。

隨著牙膏工業(yè)的不斷發(fā)展，功效型牙膏越來越受到消費者的喜愛，各大企業(yè)也逐漸將中草藥活性成分加入到牙膏中作為其功效成分。功效型牙膏根據(jù)《功效性牙膏(QB/T 2966-2014)》的規(guī)定對其功效成分進(jìn)行定性或定量測定。而沒食子酸作為猴耳環(huán)有機(jī)酸的主要功效成分，也是質(zhì)量控制的主要成分。本研究摸索采用高效液相色譜法建立猴耳環(huán)牙膏中沒食子酸含量測定方法。

1 實驗部分

1.1 實驗儀器

Agilengt 1200高效液相色譜儀；

Sartorius BT125D分析天平；

AP-01真空泵；

SC-04低速離心機(jī)；

KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器。

1.2 試劑和材料

沒食子酸對照品(91.5%，批號：110831-201906，中國食品藥品檢定研究院)；

猴耳環(huán)提取物；

猴耳環(huán)牙膏(實驗室自制，批號:E20220715185)；

甲醇(西隴科學(xué)，色譜純)；

磷酸(麥克林，分析純)；

蒸餾水。

1.3 實驗方法

1.3.1 色譜條件

色譜柱：XDB C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：甲醇∶蒸餾水∶磷酸=20∶80∶0.2；檢測波長：270nm；流速：1ml/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10ul。

1.3.2 方法與結(jié)果

1.3.2.1 沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

準(zhǔn)確稱取10.73mg沒食子酸對照品置于50ml容量瓶中，加入流動相溶解并定容至刻度，此溶液濃度為214.6ug/ml。

1.3.2.2 樣品溶液的制備

①稱取猴耳環(huán)提取物0.1g于50ml容量瓶中，加入流動相溶解并定容至刻度，搖勻后經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，濾液作為試樣溶液上機(jī)待測。

②稱取猴耳環(huán)牙膏樣1.25g于50ml容量瓶中，加入流動相溶解并定容至刻度搖勻，超聲溶解后離心，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，濾液作為試樣溶液上機(jī)待測。

1.4 線性關(guān)系考察

將沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液配制系列濃度為0.8383ug/ml、3.3531ug/ml、13.4125ug/ml、53.65ug/ml、214.6ug/ml，按照1.3.1的色譜條件進(jìn)樣分析。以沒食子酸濃度為X軸，其對應(yīng)的峰面積為Y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。曲線方程為：

Y=53.66x-48.654，R2=0.9992

在濃度為0.8383ug/ml～214.6ug/ml范圍內(nèi)線性良好。

圖1 沒食子酸線性方程

1.5 樣品中沒食子酸含量測定

1.5.1 按照1.3.2.2樣品溶液的制備配制，根據(jù)測定的峰面積，代入上述直線回歸方程，求得沒食子酸含量。圖譜見圖2、圖3，結(jié)果見表1。

圖2 猴耳環(huán)提取物中沒食子酸圖譜

圖3 猴耳環(huán)牙膏中沒食子酸圖譜

表1 樣品中沒食子酸含量

2 結(jié)果與分析

2.1 精密度實驗

按照1.3.1的色譜條件，取對照品溶液(53.65ug/ml)連續(xù)進(jìn)樣6次，測定沒食子酸峰面積，并計算其RSD值，實驗表明儀器的精密度良好。結(jié)果見表2。

表2 精密度實驗

2.2 穩(wěn)定性實驗

按照1.3.2.2樣品溶液的制備，分別將猴耳環(huán)提取物和猴耳環(huán)牙膏樣品處理好，在室溫下分別在0,2,6,24h進(jìn)樣，記錄其峰面積，并計算RSD值。結(jié)果表明猴耳環(huán)提取物及猴耳環(huán)牙膏中沒食子酸在24h內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果見表3。

表3 穩(wěn)定性實驗

2.3 回收率實驗

2.3.1 稱取猴耳環(huán)提取物已知沒食子酸含量(30.27mg/g)供試品總計6份，每份約0.1g，精密稱定，分別加入一定量的沒食子酸對照品溶液(214.6ug/ml)，按照1.3.2.2樣品溶液配制后進(jìn)樣分析，計算回收率。結(jié)果表明猴耳環(huán)提取物中沒食子酸的加樣回收率良好。結(jié)果見表4。

表4 猴耳環(huán)提取物加標(biāo)回收率

2.3.2 稱取空白牙膏(不含猴耳環(huán)提取物)供試品總計6份，每份約1.25g，精密稱定，分別加入一定量的沒食子酸對照品溶液(107.3ug/ml)，按照1.3.2.2樣品溶液配制后進(jìn)樣分析，計算回收率。結(jié)果表明空白牙膏中沒食子酸的加樣回收率良好。結(jié)果見表5。

表5 空白牙膏加標(biāo)回收率

2.3.3 稱取猴耳環(huán)牙膏已知沒食子酸含量(0.09mg/g)供試品6份，每份約1.25g，精密稱定，分別加入一定量的沒食子酸對照品溶液(107.3ug/ml)，按照1.3.2.2樣品溶液配制后進(jìn)樣分析，計算回收率。結(jié)果表明猴耳環(huán)牙膏中沒食子酸的加樣回收率良好。結(jié)果見表6。

表6 猴耳環(huán)牙膏加標(biāo)回收率

3 總結(jié)

對于猴耳環(huán)中沒食子酸含量測定，已經(jīng)有挺多方法檢測，大多數(shù)是通過高效液相法測得，但是對于猴耳環(huán)牙膏中沒食子酸的研究，卻鮮有報導(dǎo)，本次實驗建立了HPLC檢測猴耳環(huán)提取物及猴耳環(huán)牙膏中沒食子酸含量的檢測方法。此法具有簡便、快速、靈敏度高、精密度好、準(zhǔn)確性高等優(yōu)勢。至今在國家標(biāo)準(zhǔn)及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中并沒有制定牙膏中沒食子酸的檢驗標(biāo)準(zhǔn)。通過本次研究,為相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的制定提供了理論和數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。希望之后為服務(wù)地方經(jīng)濟(jì),為行政執(zhí)法提供科學(xué)依據(jù)，并對提高猴耳環(huán)牙膏相關(guān)產(chǎn)品檢測能力做出重要貢獻(xiàn)。