非布司他輔助治療糖尿病周圍神經病變的療效及對外周血中NLRP3 炎癥小體及血清IL-1β、IL-18 的調控作用

馬延娟 趙建芹 李春睿

糖尿病周圍神經病變（Diabetic peripheral neuropathy，DPN）是常見的糖尿病微血管并發癥，表現為肢體麻木、肌力減退，也增加糖尿病足的發病風險，需要進行積極防治［1-2］。DPN 的發病涉及多因素，血糖控制不達標、血糖波動大、糖尿病病程長是已知的DPN 相關因素，近些年的分子生物學研究還證實核甘酸結合寡聚化結構域樣受體蛋白3（nucleotide- binding oligomerization domain-like receptor protein 3，NLRP3）炎癥小體介導的炎癥反應與DPN 的發病相關，抑制NLRP3 炎癥小體顯著改善DPN 的臨床癥狀［3-4］。高尿酸血癥是2 型糖尿病常見的合并癥，有研究報道尿酸（uric acid，UA）水平升高是DPN 發病的獨立危險因素，提示控制尿酸水平是防治DPN 的有效手段［5］。非布司他是一類通過抑制黃嘌呤氧化酶活性減少尿酸生成的藥物，相關的基礎研究還證實非布司他在降尿酸的同時對NLRP3 炎癥小體介導的炎癥反應具有抑制作用［6］。為了深入認識非布司他在DPN 治療中的價值，本研究將分析非布司他輔助治療DPN 的療效及對NLRP3 炎癥小體的調控作用。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選擇2019 年1 月至2020 年1 月期間陽光融和醫院收治的DPN 合并高尿酸血癥患者作為研究對象200 例，其中男性114 例、女性86 例，年齡（61.11±9.62）歲，糖尿病病程（6.24±0.91）年。

納入標準：①符合指南中DPN 的診斷標準［7］；②血糖控制達標，監測糖化血紅蛋白（HbA1c）≤7%［7］；③合并高尿酸血癥；④取得入組患者知情同意。排除標準：①近3 月使用過降尿酸藥物；②感染性多發性神經炎、頸椎病、腰椎間盤突出癥等其他疾病導致周圍神經病變；③合并自身免疫性疾病、惡性腫瘤、急慢性感染；④既往有痛風病史。

1.2 分組及治療方法

采用數字表將入組患者分為觀察組和對照組，每組各100 例。觀察組中男性56 例、女性44例，年齡（61.38±9.32）歲，糖尿病病程（6.31±0.95）年；對照組中男性58 例、女性42 例，年齡（60.84±9.91）歲，糖尿病病程（6.18±1.03）年。兩組間一般資料的比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。兩組患者的治療如下：對照組接受常規降糖治療，給予甲鈷胺片0.5 mg 口服3 次/日，連續治療24 周；觀察組接受常規降糖及甲鈷胺片治療，加用非布司他片40 mg 口服1 次/日，連續治療24 周。

1.3 觀察指標

1.3.1 實驗室生化指標

治療前和治療后24 周，均留取2 組患者的空腹外周靜脈血3～5 mL，采用全自動生化分析儀檢測HbA1c、空腹血糖（fasting blood glucose，FBG）、總膽固醇（Total cholesterol，TC）、甘油三酯（Triglycerides，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（Low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C）、UA 的水平。

1.3.2 多倫多臨床神經病變評分量表（Toronto clinical scoring system，TCSS）評分［7］

治療前和治療后24 周，參照指南［7］采用TCSS從癥狀、感覺、神經反射三個方面進行評分，癥狀包括足部疼痛、麻木、針刺感、無力、共濟失調、上肢癥狀，感覺包括觸壓覺、溫度覺、痛覺、振動覺和位置覺，神經反射包括膝反射、踝反射。總分19分，得分越高、周圍神經病變越嚴重。

1.3.3 運動神經傳導速度（Motor nerve conduction velocity，MCV）和感覺神經傳導速度（Sensory nerve conduction velocity，SCV）

治療前和治療后24 周，根據指南［7］，采用肌電圖儀檢測正中神經和腓神經MCV、正中神經和腓神經SCV。

1.3.4 外周血NLRP3、ACS、Caspase-1 表達

治療前和治療后24 周，均留取2 組患者的空腹外周靜脈血3～5 mL，采用全血RNA 提取試劑盒（北京天根公司）提取外周血中的總RNA，采用cDNA 第一鏈合成試劑盒（北京天根公司）將外周血總RNA 反轉錄為cDNA，采用熒光定量檢測試劑盒（北京天根公司）對cDNA 中NLRP3、ACS、Caspase-1 的表達水平進行PCR 檢測，按照試劑盒配置熒光定量PCR 反應體系，在PCR 儀中完成反應后計算NLRP3、ACS、Caspase-1 的mRNA相對表達水平。

1.3.5 血清IL-1β、IL-18 含量

治療前和治療后24 周，均留取2 組患者的空腹外周靜脈血3～5 mL，靜置30 min 后離心分離血清，采用酶聯免疫吸附測試的試劑盒（上海酶聯公司）檢測IL-1β、IL-18 的含量。

1.4 統計學方法

采用SPSS 23.0 軟件進行統計學處理，計量資料以（±s）表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者治療前后生化指標的比較

治療前，兩組患者的HbA1c、FBG、TC、TG、LDL-C、UA 水平比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；治療后，兩組患者的HbA1c、FBG、TC、TG、LDL-C 水平與治療前比較，差異無統計學意義（P＞0.05），觀察組患者的UA 水平較治療前降低、差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組患者治療前后生化指標的比較（±s）Table 1 Comparison of biochemical index of patients between 2 groups before and after treatment（±s）

表1 兩組患者治療前后生化指標的比較（±s）Table 1 Comparison of biochemical index of patients between 2 groups before and after treatment（±s）

組別觀察組對照組t 值P 值TC（mmol/L）治療前5.85±0.94 5.81±0.92 0.304 0.761治療后5.73±0.98 5.69±0.74 0.326 0.745 TG（mmol/L）治療前2.00±0.62 2.04±0.48 0.510 0.510治療后1.94±0.42 1.97±0.61 0.405 0.405 HbA1c（%）治療前6.85±0.95 6.79±0.84 0.473 0.637治療后6.77±0.91 6.63±0.96 1.508 0.291 FBG（mmol/L）治療前6.32±0.94 6.29±0.91 0.229 0.819治療后6.21±1.03 6.35±1.08 0.938 0.349 LDL-C（mmol/L）治療前2.75±0.88 2.72±0.71 0.265 0.791治療后2.61±0.79 2.65±0.83 0.349 0.727 UA（mmol/L）治療前354.41±62.31 346.41±59.39 0.929 0.354治療后277.31±41.32 340.31±61.23 8.533 0.000

2.2 兩組患者治療前后TCSS 評分的比較

治療前，兩組患者的TCSS 評分比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；治療后觀察組患者的TCSS 評分低于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組患者治療前后TCSS 評分的比較Table 2 Comparison of TCSS score of patients between 2 groups before and after treatment

2.3 兩組患者治療前后MCV 和SCV 的比較

治療前，2 組患者的正中神經和腓神經MCV、正中神經和腓神經SCV 比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；治療后觀察組患者的正中神經和腓神經MCV、正中神經和腓神經SCV 均高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 兩組患者治療前后MCV 和SCV 的比較（m/s）（±s）Table 3 Comparison of MCV and SCV of patients between 2 groups before and after treatment（m/s）（±s）

表3 兩組患者治療前后MCV 和SCV 的比較（m/s）（±s）Table 3 Comparison of MCV and SCV of patients between 2 groups before and after treatment（m/s）（±s）

組別觀察組對照組t 值P 值正中神經MCV治療前40.10±5.42 40.83±4.87 1.002 0.318治療后46.52±4.95 43.24±5.12 4.606 0.000正中神經SCV治療前42.31±5.23 42.24±4.89 0.097 0.923治療后48.46±4.49 45.01±4.26 5.574 0.000腓神經MCV治療前37.51±4.42 37.14±4.19 0.608 0.544治療后42.86±3.92 40.04±4.52 4.713 0.000腓神經SCV治療前30.12±3.42 30.44±3.27 0.676 0.499治療后35.23±3.14 33.01±2.95 5.123 0.000

2.4 兩組患者治療前后外周血NLRP3、ACS、Caspase-1 表達水平的比較

治療前，2 組患者的外周血NLRP3、ACS、Caspase-1 mRNA 相對表達水平比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；治療后對照組患者的外周血NLRP3、ACS、Caspase-1 mRNA 相對表達水平與治療前比較、差異無統計學意義（P＞0.05）且觀察組患者的外周血NLRP3、ACS、Caspase-1 mRNA 相對表達水平低于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表4。

表4 兩組患者治療前后外周血NLRP3、ACS、Caspase-1表達水平的比較（±s）Table 4 Comparison of expression levels of NLRP3，ACS，Caspase-1 in peripheral blood of patients between 2 groups before and after treatment（±s）

表4 兩組患者治療前后外周血NLRP3、ACS、Caspase-1表達水平的比較（±s）Table 4 Comparison of expression levels of NLRP3，ACS，Caspase-1 in peripheral blood of patients between 2 groups before and after treatment（±s）

組別觀察組對照組t 值P 值NLRP3治療前1.04±0.15 1.00±0.14 1.732 0.083治療后0.74±0.12 0.98±0.12 14.142 0.000 ACS治療前1.02±0.17 1.00±0.18 0.808 0.807治療后0.71±0.14 1.03±0.12 17.354 0.000 Caspase-1治療前0.97±0.14 1.00±0.17 1.362 0.175治療后0.78±0.10 0.96±0.14 17.352 0.000

2.5 兩組患者治療前后血清IL-1β、IL-18 含量的比較

治療前，2 組患者的血清IL-1β、IL-18 含量比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；治療后對照組患者的血清IL-1β、IL-18 含量與治療前比較、差異無統計學意義（P＞0.05）且觀察組患者的血清IL-1β、IL-18 含量低于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表5。

表5 兩組患者治療前后血清IL-1β、IL-18含量的比較（±s）Table 5 Comparison of serum IL-1β，IL-18 contents of patients between 2 groups before and after treatment（±s）

表5 兩組患者治療前后血清IL-1β、IL-18含量的比較（±s）Table 5 Comparison of serum IL-1β，IL-18 contents of patients between 2 groups before and after treatment（±s）

組別觀察組對照組t 值P 值IL-1β(ng/mL)治療前8.39±1.25 8.51±1.33 0.657 0.512治療后6.14±0.93 8.38±1.21 14.678 0.000 IL-18(pg/mL)治療前69.51±12.14 68.47±9.39 0.677 0.499治療后50.31±8.84 66.96±10.32 12.253 0.000

3 討論

DPN 是常見的糖尿病微血管并發癥之一，控制血糖、營養神經、改善微循環是臨床治療DPN 的常用手段，但整體療效并不理想。近些年關于DPN發病機制及危險因素的研究認為血尿酸水平升高與DPN 的發病及嚴重程度密切相關［8-9］。尿酸是體內嘌呤代謝的產物，具有促炎、促氧化的生物學作用，不僅參與痛風性關節炎的發病，還能損傷血管內皮細胞、造成多種大血管并發癥和微血管并發癥的發生［10-11］。因此，針對DPN 患者進行降尿酸治療能夠削弱尿酸介導的促炎、促氧化作用，進而抑制高尿酸對血管內皮的損傷并起到血管并發癥的防治作用。

非布司他是用于高尿酸血癥及痛風治療的降尿酸藥物，通過抑制黃嘌呤氧化酶的活性減少尿酸生成，本研究將非布司他用于DPN 合并高尿酸血癥患者的輔助治療，旨在發揮該藥物的降尿酸作用，進而減輕高尿酸對周圍神經的損害。經過24 周的非布司他聯合常規治療后，患者的UA 水平較治療前降低且低于接受常規治療的對照組，而其他糖脂代謝指標在治療后未發生明顯變化、與對照組比較也無差異，提示非布司他用于DPN合并高尿酸血癥患者的輔助治療顯著減少尿酸生成且不影響糖脂代謝。進一步通過TCSS 評分和肌電圖檢測對DPN 的病情進行評價，對照組經常規降糖及營養神經治療后的TCSS 評分及MCV、SCV 均較治療前改善，提示治療后DPN 的病情得到改善；觀察組經常規治療聯合非布司他降尿酸后TCSS 評分及MCV、SCV 的改善較對照組顯著，提示非布司他用于DPN 輔助治療能夠改進療效、改善神經傳導功能。

近些年關于DPN 的分子生物學研究認為炎癥反應在周圍神經損害中起到重要作用，血糖升高、血糖波動大以及合并高尿酸血癥均具有促炎作用［12-13］。NLRP3 炎癥小體在炎癥反應的調控中發揮重要作用，該小體由NLRP3、ASC、Caspase-1 組成，其功能是促進下游炎癥細胞因子IL-1β、IL-18生成。在DPN 的發病過程中，NLRP3 炎癥小體的激活與周圍神經損害有關［14］；另有痛風相關的研究證實UA 對NLRP3 炎癥小體的激活具有促進作用，非布司他在降尿酸的提示顯著抑制NLRP3 炎癥小體的激活［6，15］。本研究將非布司他輔助治療用于DPN 后，對NLRP3 炎癥小體的激活進行了評價，常規治療后NLRP3 炎癥小體無明顯變化，而加用非布司他輔助治療后外周血NLRP3、ASC、Caspase-1 的表達及血清IL-1β、IL-18 的含量均明顯降低，表明非布司他輔助治療用于DPN 顯著抑制NLRP3 炎癥小體的激活，這也可能是非布司他起到DPN 治療作用的相關分子機制。

綜上所述，非布司他輔助治療DPN 合并高尿酸血癥顯著降低UA、改善神經傳導功能并抑制NLRP3炎癥小體激活，這為今后發現DPN 新的治療手段、使用非布司他治療DPN 提供了臨床研究證據。