免疫組化P16和ki67雙表達在宮頸癌前病變及宮頸癌的臨床分析

陳鐲，耿晨，侍孝遠

宿遷市第一人民醫院婦科，江蘇宿遷 223800

宮頸癌屬于一種婦科常見的惡性腫瘤疾病，具有較高的發病率，且發病群體正呈年輕化趨勢發展[1]。一旦患病，會使患者生命健康受到嚴重威脅。由于宮頸癌的發展速度比較緩慢，且發病較為隱匿，因此，在患病初期往往不會有較多顯著的臨床癥狀，這也對臨床治療工作帶來較大影響[2]。針對這一現狀，更應當對適齡女性實施及時地篩查及防治，使之生命安全能夠得到良好保障[3]。相關報道顯示，在開展宮頸癌早期診斷時，通過監測特異性生物標志物的方式可以具有較好的臨床使用價值[4]。其中應用最多的生物標志物為P16，P16是在人染色體9p21中發現的第1個直接參與細胞周期調控的抑癌基因，無論是在宮頸癌前病變中還是在宮頸癌中都會具有高表達[5]。ki67能反映腫瘤細胞增值指數，其結果越高，即可表明腫瘤細胞增值速度更快[6]。為深入探討二者雙表達在臨床中的應用價值，本文選取2016年1月—2021年12月宿遷市第一人民醫院收治的70例宮頸癌前病變患者和50例宮頸癌患者進行研究。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院收治的70例宮頸癌前病變患者作為對照組，另選擇同期收治的50例宮頸癌患者作為觀察組。對照組年齡 21～64歲，平均（53.41±2.46）歲；病程3～15個月，平均（8.44±1.65）個月；根據宮頸上皮內瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）分級，包括34例Ⅰ級、22例Ⅱ級、14例Ⅲ級。觀察組年齡31～71歲，平均（53.38±2.52）歲；病程3～16個月，平均（8.57±1.58）個月；根據病理類型劃分，包括42例鱗癌、8例子宮頸腺癌。兩組一般資料對比，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究已經過醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 納入與排除標準

納入標準：患者未接受過任何臨床治療（如化療、放療、手術、藥物等）；患者經臨床病理學診斷確診；患者一般資料記錄完整；患者知情該次研究，并簽訂知情告知書。

排除標準：患者合并嚴重感染性疾病；患者合并嚴重肝腎疾病或心腦血管系統疾病；患者合并其他惡性腫瘤疾病。

1.3 方法

獲取所有患者的活檢病理標本后，均以相同的方式對其實施石蠟切片處理，并在脫蠟1 d后實施免疫組織化學染色診斷。將標本完成水化處理后，將其浸泡在過氧化氫（濃度3%）中，以常溫環境浸泡10 min，沖洗3 min，將純血清進行封閉處理，時間為12 h。一抗處理樣本包括P16多克隆抗體和兔抗人ki67，在恒溫1℃的環境下孵育過夜。在第2天利用磷酸鹽緩沖液進行充分沖洗，然后將P16多克隆抗體和兔抗人ki67滴加其中，在恒溫37℃的環境下孵育1 h。再次通過磷酸鹽緩沖液充分沖洗后，加入DAB顯色劑，然后放置在顯微鏡下加以觀察。將一抗利用磷酸鹽緩沖液代替，并作為陰性對照。所有操作均按照標準流程以及說明書嚴格執行。

1.4 觀察指標

以手術病理診斷為標準針對兩組P16及ki67表達量展開對比分析，其中P16的判定標準如下：以無陽性細胞判定為（-），計0分；以陽性細胞分布＜1/4判定為（+），計1分；以陽性細胞分布≥1/4且＜1/2判定為（++），計2分；以陽性細胞分布≥1/2且＜3/4判定為（+++），計3分；以陽性細胞分布≥3/4判定為（++++），計4分。ki67的判定標準主要包括陰性（即無陽性細胞，計0分）、低表達（即陽性細胞分布＜1/3，計1分）、中表達（即陽性細胞分布≥1/3且≤2/3，計2分）、高表達（即陽性細胞分布＞2/3，計3分）。另外針對P16及ki67單一檢測、聯合檢測結果以及診斷效能展開分析與研究。其中診斷效能包括敏感度[真陽性例數/（真陽性例數+假陰性例數）×100.00%]、特異度[真陰性例數/（真陰性例數+假陽性例數）×100.00%]、準確性[（真陽性例數+真陰性例數）/總例數×100.00%]。

1.5 統計方法

采用SPSS 19.0統計學軟件處理數據，符合正態分布的計量資料以（）表示，組間差異比較進行t檢驗；計數資料以[n(%)]表示，組間差異比較進行χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組P16及ki67陽性表達比較

觀察組P16陽性表達、ki67陽性表達均高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組P16及ki67陽性表達率對比[()，分]

表1 兩組P16及ki67陽性表達率對比[()，分]

組別觀察組（n=50）對照組（n=70）t值P值P16陽性表達3.03±0.24 0.52±0.12 75.379＜0.001 ki67陽性表達2.11±0.32 0.44±0.10 41.008＜0.001

2.2 P16、ki67單一檢測及聯合檢測結果分析

聯合檢測真陽性檢出率為96.00%（48/50），明顯高于P16單一檢測、ki67單一檢測，差異有統計學意義（χ2=8.305、7.161，P=0.003、0.007）。見表2。

表2 P16及ki67單一檢測、聯合檢測結果分析

2.3 P16、ki67單一檢測及聯合檢測診斷效能比較

聯合檢測敏感度、特異度、準確性統計結果均明顯高于P16單一檢測、ki67單一檢測，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 P16、ki67單一檢測及聯合檢測診斷效能對比（%）

3 討論

導致宮頸癌產生的主要原因為人乳頭瘤狀病毒（human papillomavirus, HPV）感染，一旦病毒入侵到患者機體后，會使其血清細胞因子產生改變[7]。在對宮頸癌患者實施臨床診斷時，通常會采取陰道鏡、宮頸細胞涂片、液基細胞學等方式完成[8]。由于宮頸癌病程進展速度相對較慢，因而其在宮頸癌前病變向宮頸癌發展的過程中，其腫瘤細胞往往會分泌出一些活性物質（即腫瘤標志物）[9]。該物質往往會在癌變宿主、癌變組織體液中存在，若為健康人群，其表達則相對較低；而在早期影像學無法檢出腫瘤時，臨床便可將其檢出，因此對于提升臨床預防及診治效果意義重大[10]。

現階段P16和ki67是臨床中最為常見的宮頸癌診斷腫瘤標志物[11]。前者屬于一種新型的抗癌基因，若其表達異常，則說明患者機體細胞存在惡性增殖的情況，進而誘發癌癥的產生[12]。在對該指標進行檢測后，可以有效判斷患者腫瘤易感性，因此臨床意義重大[13]。ki67屬于DNA指數增值指標，可以明確反映細胞增值活躍性，并與宮頸癌細胞分化、轉移等關系密切[14]。無論是宮頸癌前病變還是宮頸癌，P16、ki67均呈現出高表達的狀態，特別是在宮頸癌患者機體中會有更為顯著的異常升高趨勢[15]。在本研究中，對照組患者P16陽性表達、ki67陽性表達均顯著低于觀察組患者（P＜0.05）。該結果與桂星星[15]在其報道中提出對照組ki67陽性表達、P16陽性表達均低于試驗組（P＜0.05）的結果一致。由此可以看出，宮頸癌患者宮頸上皮細胞正常的細胞周期會遭到破壞，進而導致P16異常表達，最終使得細胞產生癌變[16]。同時也進一步說明ki67能夠具體表現出宮頸癌細胞增值的活性程度，其同宮頸病變程度之間互為正相關[17]。另外，在本研究中，P16單一檢測以及ki67單一檢測的陽性檢出率、敏感度、特異度、準確性均顯著低于聯合檢測（P＜0.05），根據這一結果也可以說明使用免疫組化P16和ki67雙表達的方式能夠反饋宮頸癌的發生發展進程，聯合檢測對于促進疾病檢出率地提升具有更多積極意義[18]。

綜上所述，在對宮頸癌前病變患者以及宮頸癌患者實施臨床診斷時，使用免疫組化P16和ki67雙表達的方式具有較高的臨床價值，即聯合使用敏感度、準確性、特異性更高，適合進一步深入探討與使用。