沒食子乙醇提取物對結腸癌細胞JAK2/STAT3信號通路的調控作用研究

阿麗亞?依拉木 阿布都艾則孜?艾爾肯 閆波 艾爾菲丁?阿尼娃爾 木巴拉克?伊明江

中圖分類號 R285.5 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2022）03-0326-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.03.12

摘 要 目的 基于蛋白酪氨酸激酶2（JAK2）/信號傳導及轉錄活化因子3（STAT3）信號通路研究沒食子乙醇提取物對結腸癌細胞HCT-116、Caco-2增殖、遷移的調控機制。方法 采用CCK-8法檢測0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/mL沒食子乙醇提取物作用12、24、48、72 h后對HCT-116、Caco-2細胞增殖的影響。以0.1、0.3、0.5 mg/mL 沒食子乙醇提取物作用于HCT-116、Caco-2細胞24 h后，采用劃痕實驗測定細胞的遷移情況，采用熒光探針法檢測細胞內活性氧（ROS）水平，采用酶聯免疫吸附法檢測細胞上清液中白細胞介素6（IL-6）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）水平，采用Western blot法檢測細胞中JAK2、STAT3磷酸化水平和B細胞淋巴瘤2（Bcl-2）、Bcl-2相關X蛋白（Bax）的表達水平。結果 與空白對照比較，0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/mL 沒食子乙醇提取物作用12、24、48、72 h后均可顯著抑制細胞增殖（P<0.05）。0.1、0.3、0.5 mg/mL 沒食子乙醇提物作用24 h后，2種細胞的劃痕愈合率和細胞上清液中IL-6、TNF-α水平，以及細胞中JAK2、STAT3磷酸化水平和Bcl-2蛋白表達水平均顯著降低（P<0.05）;細胞內ROS水平、Bax蛋白表達水平均顯著升高（P<0.05）。結論 沒食子乙醇提取物可抑制結腸癌細胞HCT-116、Caco-2的增殖和遷移，其機制可能與增加細胞內ROS的積累，下調腫瘤微環境中炎癥因子IL-6、TNF-α的表達和JAK2/STAT3信號通路中JAK2、STAT3的磷酸化水平，進而下調Bcl-2蛋白表達、上調Bax蛋白表達有關。

關鍵詞 沒食子乙醇提取物;結腸癌細胞;炎癥因子;活性氧;蛋白酪氨酸激酶2/信號傳導及轉錄活化因子3信號通路

Study on regulation of ethanol extract of Turkish Galls on JAK2/STAT3 signaling pathway in colorectal cancer cells

Aliya·Elham1，Abdulaziz·Arken1，YAN Bo2，Arfidin·Anwar1，Mubarak·Iminjan1（1. College of Pharmacy， Xinjiang Medical University， Urumqi 830011， China; 2. Dept. of Pharmacy， the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University， Urumqi 830011， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE To study the regulatory mechanism of ethanol extract of Turkish Galls on proliferation and migration of colorectal cancer cells HCT-116 and Caco-2 based on janus kinase 2 （JAK2）/signal transducer and activator of transcription 3 （STAT3） signaling pathway. METHODS CCK-8 method was used to detect the effects of 0.05， 0.1， 0.2， 0.3， 0.4 and 0.5 mg/mL ethanol extract of Turkish Galls on the proliferation of HCT-116 and Caco-2 cells after treated for 12， 24， 48 and 72 h. After treated with 0.1， 0.3， 0.5 mg/mL ethanol extract of Turkish Galls for 24 h， the migrations of HCT-116 and Caco-2 cells were detected by scratch test; the level of reactive oxygen species （ROS） was detected by fluorescent probe method. The levels of interleukin-6 （IL-6） and tumor necrosis factor-α （TNF-α） in cell supernatant were detected by ELISA. The phosphorylations of JAK2 and STAT3 as well as the expressions of B-cell lymphoma-2 （Bcl-2） and Bcl-2 associated protein X （Bax） were detected by Western blot assay. RESULTS Compared with blank control， 0.05， 0.1， 0.2， 0.3， 0.4 and 0.5 mg/mL ethanol extract of Turkish Galls could significantly inhibit cell proliferation after treated for 12， 24， 48， 72 h （P<0.05）. After treated with 0.1， 0.3 and 0.5 mg/mL ethanol extract of Turkish Galls for 24 h， the scratch healing rate of 2 kinds of cells， the levels of IL-6 and TNF-α in the cell supernatant， the phosphorylation of JAK2 and STAT3 as well as the expression of Bcl-2 protein were all significantly decreased （P<0.05）; the level of ROS and protein expression of Bax were increased significantly （P<0.05）. CONCLUSIONS The ethanol extract of Turkish Galls can inhibit the proliferation and migration of HCT-116 and Caco-2 cells. The mechanism may be related with down-regulation of protein expression of Bcl-2 and up-regulation of protein expression of Bax by increasing the accumulation of intracellular ROS， down-regulating the expressions of inflammatory factors IL-6 and TNF-α and the phosphorylation of JAK2 and STAT3 in JAK2/STAT3 signaling pathway.

KEYWORDS? ?ethanol extract of Turkish Galls; colorectal cancer cell; inflammatory factor; reactive oxygen species; janus kinase 2/signal transducer and activator of transcription 3 signaling pathway

結腸癌是消化系統最常見的、具有較高發病率和病死率的惡性腫瘤之一，其發病是多基因、多因素參與的復雜過程[1]。相關數據顯示，在2020年，結腸癌的發病率已高居世界第4位，每年約有115萬人被診斷為結腸癌[2]。手術切除、輔助化療是臨床治療結腸癌的主要手段，但在治療過程中其復發率和轉移率較高，總體預后不理想[3]。中藥治療結腸癌在改善患者術后狀態、降低毒副反應、提高化療效率等方面具有一定優勢，因此，安全又經濟的天然藥物成為了抗腫瘤藥物研究的熱點[4-6]。

沒食子為癭蜂科昆蟲沒食子蜂Cynips gallae-tinctoriae Oliv.的幼蟲寄生于殼斗科櫟屬植物沒食子樹Quercus infectoria Oliv.幼枝上產生的蟲癭，在民間具有悠久的臨床應用歷史，常用于治療盜汗咳嗽、咯血便血、口瘡齒痛等[7]。沒食子中多酚類化學成分的含量為50%～70%、沒食子酸的含量為2%～4%，另外還有類黃酮、三烯類、揮發油類、皂苷類、生物堿類、蒽醌類、多糖類、鞣花酸及樹脂等成分[7]。據報道，沒食子能夠通過減少細胞炎癥因子的分泌而減輕炎癥損傷，并通過清除自由基增強組織的抗氧化活性，改善促炎因子與抗炎因子之間的失衡，修復損傷部位[8]。研究證實，沒食子能夠通過抑制Janus激酶（janus kinase，JAK）/信號傳導及轉錄活化因子（signal transducer and activator of transcription，STAT）途徑治療炎癥性腸病[9]。JAK/STAT信號通路參與了腫瘤細胞中多種生物變異過程的調控，該通路的過度激活與結腸癌的發生發展有密切聯系[10]。

在前期研究中，本課題組采用丙酮、乙醇、甲醇和水4種溶劑對沒食子藥材進行提取，得到了成分組成相同但含量不同的4種提取物，并通過體外藥效學實驗證實了沒食子乙醇提取物對人結腸癌細胞HCT-116、Caco-2的增殖抑制作用最強。因此，本研究以沒食子乙醇提取物（后文簡稱為“沒食子醇提物”）為研究對象，檢測其對HCT-116、Caco-2細胞中活性氧（reactive oxygen species，ROS）積累，JAK2/STAT3信號通路上游炎癥因子白細胞介素6（interleukin-6，IL-6）、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和通路相關蛋白JAK2、磷酸化JAK2（p-JAK2）、STAT3、磷酸化STAT3（p-STAT3）的表達，以及通路下游B細胞淋巴瘤2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）、Bcl-2相關X蛋白（Bcl-2 associated X，Bax）表達的影響，為沒食子治療結腸癌的機制研究和臨床應用提供實驗依據。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用的主要儀器包括Multiskan GO型全波長酶標儀、Forma371型細胞培養箱（美國Thermo Fisher Scientific公司），H17502型高速離心機（湖南湘儀科學儀器設備有限公司），HHS-11-1型電熱恒溫水浴鍋（上海博訊實業有限公司），MAX-A6003型電子天平（深圳無限量衡器有限公司），SX-500型高壓滅菌鍋（北京天美科學儀器有限公司），TS2型倒置熒光顯微鏡（日本Nikon公司），PP-1150 Power B型蛋白電泳儀和轉膜儀（北京凱元信瑞儀器有限公司），FluorChem E Alpha型化學發光凝膠成像系統（美國Protein Simple公司）。

1.2 主要藥品與試劑

本研究所用的主要藥品與試劑有5-氟尿嘧啶（5-fluo- rouracil，5-FU）對照品（純度99.0%）、RIPA高效裂解液、BCA蛋白濃度測定試劑盒、ECL超敏發光液（北京索萊寶科技有限公司，批號1209KG022、R0010、PC0020、PE0020）;高糖DMEM細胞培養基、進口澳洲胎牛血清、100×青霉素/鏈霉素雙抗混合液、胰蛋白酶-EDTA、磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）、谷氨酰胺（以色列BI公司，批號分別為2043176、04-002-1C、03-031- 5B/C、03-050-1BCS、2038149、03-42-3BC）;CCK-8試劑盒、活性氧熒光探針（DCFH-DA）試劑盒（美國Sigma公司，批號分別為7010000、BL714A）;IL-6酶聯免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒、TNF-α ELISA試劑盒（上海江萊生物科技有限公司，批號分別為JL14113、JL10208）;十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳快速制備試劑盒（北京博泰斯生物技術有限公司，批號WB2101）、脫脂奶粉（德國BioFroxx公司，批號1172GR100）、預染蛋白Marker（美國Thermo Fisher Scientific公司，批號26616）;兔源Bcl-2、Bax、JAK2、p-JAK2、STAT-3、p-STAT-3單克隆抗體（美國CST公司，批號分別為4223T、2772T、3230T、3771S、4904T、9145T）;兔源β-肌動蛋白（β-actin）單克隆抗體、山羊抗兔免疫球蛋白G二抗（北京博奧森生物技術有限公司，批號分別為BS-0061R、BS-40295G-HRP）。

1.3 藥材

沒食子藥材于2016年購自廣州市，由新疆醫科大學藥學院天然藥物化學與生藥學教研室帕麗達教授鑒定為真品，標本保存于新疆醫科大學協同創新中心實驗室藥劑組，標本號為20160305。

1.4 細胞

人結腸癌細胞株HCT-116和Caco-2均購買于武漢普諾賽生物科技有限公司，批號分別為201201D11、201228D50，收到后常規傳至第3代備用。

2 方法

2.1 沒食子醇提物的制備

采用文獻[11]報道的提取方法，取沒食子干燥果實適量，粉碎成80目細粉;取50 g細粉，加入8倍量（以mL/g計）無水乙醇加熱回流提取3次、每次0.5 h;合并3次提取液，減壓濃縮（50 ℃）并干燥成浸膏（浸膏得率為77.96%），即得沒食子醇提物[其中多酚類成分的總含量為（447.59±2.64） mg/g，沒食子酸的含量為（71.18±0.41） mg/g]，使用時用PBS溶解并稀釋成相應質量濃度的工作液。

2.2 細胞培養

將細胞接種在含10%胎牛血清、1%青霉素/鏈霉素雙抗的DMEM培養基中，置于37 ℃、5%CO2無菌培養箱中常規培養，每隔1～2 d換液1次。待細胞生長至皿面積的70%左右時，用胰酶消化傳代（其中HCT-116細胞消化1 min，Caco-2細胞消化5 min）。待細胞貼壁后，再進行相關實驗。

2.3 細胞增殖活性檢測

采用CCK-8法進行檢測。取對數生長的HCT-116、Caco-2細胞，胰酶消化后計數，分別以每孔2 000個細胞均勻接種在96孔板中。常規培養24 h待細胞貼壁后，吸棄培養液。將細胞分為空白對照組（不加任何藥物處理培養的細胞）、5-FU組[陽性對照，預實驗得5-FU干預2種細胞24 h時的半數抑制濃度（IC50）≈0.05 mg/mL，因此本研究中將其質量濃度設為0.05 mg/mL]和不同質量濃度（0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/mL，質量濃度根據前期預實驗設置）的沒食子醇提物組，每組平行設置4個復孔;并另設空白調零孔（不加細胞、只加培養液）。分別在培養12、24、48、72 h時，根據說明書每孔加入適量用培養液稀釋過的CCK-8溶液，將細胞置于培養箱中靜置2 h后，用酶標儀在450 nm波長下測定各孔的吸光度（A），并計算細胞的增殖抑制率：增殖抑制率（%）=[1-（給藥組A-空白調零孔A）/（空白對照組A-空白調零孔A）]×100%;并采用SPSS 26.0軟件計算沒食子醇提物作用不同時間后對細胞的IC50。實驗重復3次。

2.4 細胞遷移情況檢測

采用劃痕實驗進行考察。取對數生長期的HCT- 116、Caco-2細胞，分別以每孔5×105個接種于6孔板中，常規培養至細胞鋪滿孔板底部，采用無菌槍頭在皿底劃出等寬的直線劃痕，并采用無菌PBS清洗3次。將細胞分為空白對照組、5-FU組（0.05 mg/mL）和不同質量濃度（0.1、0.3、0.5 mg/mL）的沒食子醇提物組，每組平行設置3個復孔。分別在培養0 h及常規培養24 h時，在顯微鏡下觀察并采集圖片，用Image J V1.8.0軟件分析劃痕面積并計算劃痕愈合率：劃痕愈合率（%）=（0 h時劃痕面積-培養24 h時劃痕面積）/0 h時劃痕面積×100%]。實驗重復3次。

2.5 細胞內ROS水平檢測

采用DCFH-DA法進行檢測。取對數生長期的HCT-116、Caco-2細胞，分別按“2.4”項下方法培養和分組（本實驗中陽性對照藥物選用試劑盒自帶試劑Rosup，按照說明書將質量濃度設為0.05 mg/mL），每組平行設置3個復孔。常規培養24 h后，吸棄上清液，用PBS沖洗細胞3次，然后加入20 μmol/L DCFH-DA，在37 ℃條件下培養30 min;PBS洗滌細胞3次后，在熒光顯微鏡下觀察細胞中的熒光情況并采集圖片，用Image J V 1.8.0軟件分析每組細胞熒光強度百分比（所采集視野內熒光強度在整個視野中所占的百分比），以此表示細胞內的ROS水平（熒光強度百分比越高，表示細胞中ROS水平越高）。實驗重復3次。

2.6 細胞上清液中IL-6、TNF-α水平檢測

采用ELISA法進行檢測。取對數生長期的HCT-116、Caco-2細胞，按“2.4”項下方法培養和分組，每組平行設置3個復孔。常規培養24 h后收集各組細胞上清液，按ELISA試劑盒說明書方法操作，測定其中IL-6、TNF-α水平。實驗重復3次。

2.7 細胞中JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、Bcl-2、Bax蛋白表達檢測

采用Western blot法進行檢測。取對數生長期的HCT-116、Caco-2細胞，分別按“2.4”項下方法培養和分組。常規培養24 h后，用PBS洗滌細胞，然后使用含1%蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的RIPA裂解緩沖液提取細胞中的總蛋白。采用BCA法測定總蛋白的濃度后，將蛋白進行高溫變性。將30 μg變性蛋白進行10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（分離膠電壓80 V、濃縮膠電壓120 V，電泳時間90 min），然后轉移到聚偏二氟乙烯膜上（電流300 mA;轉模時間根據蛋白分子量決定，一般1 kDa轉膜1 min）;用5%脫脂奶粉封閉1.5 h，加入內參蛋白β-actin和各目的蛋白一抗（β-actin稀釋比例為1 ∶ 6 000，目的蛋白稀釋比例均為1 ∶ 1 000），4 ℃孵育過夜;TBST洗膜3次、每次10 min，加入二抗（稀釋比例為1 ∶ 8 000），室溫靜置1 h;TBST洗膜3次、每次10 min，涂抹ECL發光液并觀察蛋白質條帶，在凝膠成像系統中顯影，然后使用Image J V1.8.0軟件分析條帶灰度值。分別以p-JAK2與JAK2、p-STAT3與STAT3蛋白條帶灰度值的比值表示JAK2、STAT3蛋白磷酸化水平，以Bcl-2、Bax蛋白條帶與β-actin蛋白條帶灰度值的比值表示Bcl-2、Bax蛋白表達水平。實驗重復3次。

2.8 統計學方法

使用SPSS 26.0軟件進行數據分析，使用Graph Pad Prism 7軟件作圖。數據采用x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD檢驗（方差齊性）或 Dunnett’s T3 檢驗（方差不齊性）。檢驗水準α=0.05。

3 結果

3.1 沒食子醇提物對細胞增殖的影響

培養12、24、48、72 h后，與空白對照組比較，5-FU組和0.05～0.5 mg/mL 沒食子醇提物組HCT-116、Caco-2細胞的增殖抑制率均顯著升高（P<0.05或P<0.01），且沒食子醇提物的作用具有一定濃度和時間依賴趨勢。沒食子醇提物處理HCT-116細胞12、24、48、72 h后的IC50分別為0.313、0.131、0.107、0.100 mg/mL，處理Caco-2細胞12、24、48、72 h后的IC50分別為1.093、0.404、0.246、0.134 mg/mL。各組細胞的增殖抑制率測定結果見表1。

3.2 沒食子醇提物對細胞遷移的影響

與空白對照組比較，5-FU組和0.1、0.3、0.5 mg/mL沒食子醇提物組2種細胞的劃痕愈合率均顯著降低（P<0.05），表明細胞遷移受到了抑制，且沒食子醇提物的作用具有一定濃度依賴趨勢。各組細胞的劃痕愈合率測定結果見表2。

3.3 沒食子醇提物對細胞內ROS水平的影響

與空白對照組比較，Rosup組和0.1、0.3、0.5 mg/mL 沒食子醇提物組2種細胞內ROS水平均顯著升高（P<0.05），且沒食子醇提物的作用具有一定濃度依賴趨勢。各組細胞中ROS的熒光檢測圖見圖1，ROS熒光強度百分比測定結果見表3。

3.4 沒食子醇提物對細胞上清液中IL-6、TNF-α水平的影響

與空白對照組比較，5-FU組和0.1、0.3、0.5 mg/mL沒食子醇提物組2種細胞上清液中IL-6、TNF-α水平均顯著降低（P<0.05），且沒食子醇提物的作用具有一定濃度依賴趨勢。各組細胞上清液中IL-6、TNF-α水平測定結果見表4。

3.5 沒食子醇提物對細胞中JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3、Bax、Bcl-2蛋白表達的影響

與空白對照組比較，5-FU組和0.1、0.3、0.5 mg/mL沒食子醇提物組2種細胞中JAK2、STAT3磷酸化水平和Bcl-2蛋白表達水平均顯著降低（P<0.05），Bax蛋白表達水平均顯著升高（P<0.05），且沒食子醇提物的作用具有一定濃度依賴趨勢。各組細胞中JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3、Bax、Bcl-2蛋白表達的電泳圖見圖2，JAK2、STAT3磷酸化水平和Bax、Bcl-2蛋白表達水平測定結果見表5。

4 討論

5-FU是抗嘧啶類化療藥物，進入體內活化成脫氧核苷酸后，通過與胸苷酸合成酶結合并抑制此酶的活性，導致脫氧胸苷酶缺乏和DNA復制障礙，尤其對消化道腫瘤效果明顯[12]。以5-FU為主的mFOLFOX6方案為目前公認治療結腸癌的一線用藥方案，因此本研究選擇5-FU作為陽性對照藥，同時選擇結腸癌細胞中具有代表性的HCT-116細胞（惡性程度較高）和Caco-2細胞（惡性程度較低）為研究對象，在細胞水平上探討沒食子醇提物對結腸癌細胞的抑制效果。

腫瘤細胞能夠通過失控性增殖以及遠處轉移等方式侵犯周圍組織和器官，引起器官破壞和正常細胞功能損害，使機體功能失調，從而威脅生命。抑制腫瘤細胞的增殖和遷移是控制癌癥進展的重要途徑[13-14]。因此，本研究首先檢測沒食子醇提物對結腸癌細胞增殖和遷移的抑制情況，發現隨著沒食子醇提物質量濃度的增加，細胞增殖抑制率呈升高趨勢，遷移率呈降低趨勢，故本研究初步判斷沒食子醇提物能夠有效抑制結腸癌的發展。

炎癥微環境是導致癌癥發生與進展的另一個重要因素。腫瘤細胞生存的內環境中存在大量的炎癥因子，其中具有代表性的包括IL-6、TNF-α等，其對腫瘤細胞的生長和轉移起到正向調控作用，并誘導腫瘤血管及淋巴管的生成，從而促進癌癥的進展[15]。本研究中，在沒食子醇提物作用之后細胞上清液中IL-6、TNF-α水平顯著降低，說明其改變了結腸癌細胞賴以生存的炎癥環境，可使癌細胞的代謝減慢。

JAK2/STAT3信號通路被認為是“炎-癌轉變”機制當中的一條重要信號軸，該通路中的JAK2和STAT3蛋白在腫瘤發生過程中起到重要調控作用[16-19]。本研究結果顯示，經沒食子醇提物干預后，在細胞上清液中IL-6、TNF-α水平降低的同時，細胞中p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值也顯著降低，即JAK2、STAT3蛋白的磷酸化水平顯著降低，導致進入細胞核內調控下游基因轉錄的p-STAT3減少，隨之引起細胞中促凋亡蛋白Bax水平升高、抗凋亡蛋白Bcl-2水平下降。以上在分子水平上發生的改變也證實了JAK2/STAT3信號通路可由其上游的炎癥因子激活。因此，抑制炎癥因子的表達能夠使JAK2/STAT3信號通路受到抑制，同時會影響調控腫瘤細胞凋亡的Bcl-2家族蛋白的正常表達，進而促進腫瘤細胞凋亡[20-21]。

ROS是在內質網、線粒體和過氧化物酶體等細胞器內發生的各種生化反應中自然產生的高活性化學物質，高濃度的ROS會通過內源性和外源性途徑對腫瘤細胞產生毒性并促使細胞凋亡[22]。許多促氧化類化療藥物的作用原理就是將ROS水平提高到可以促使腫瘤細胞死亡的程度，即通過過度激活ROS引起腫瘤內產生氧化應激和凋亡[23]。也有文獻證實，ROS的過度活化可通過多種信號通路網間接抑制STAT3的表達[24-26]。本研究中，沒食子醇提物能夠增加結腸癌細胞內ROS的表達，且該作用具有濃度依賴趨勢，說明通過過度氧化應激殺死腫瘤細胞也是沒食子醇提物的抗癌機制之一。

綜上所述，沒食子醇提物能夠增加結腸癌細胞中ROS的積累，降低炎癥微環境中IL-6、TNF-α等炎癥因子的表達，同時降低JAK2/STAT3信號通路中JAK2、STAT3蛋白的磷酸化水平，進而下調Bcl-2蛋白表達、上調Bax蛋白表達，最后達到抑制結腸癌的效果。本研究結果為闡明沒食子抗結腸癌的作用機制提供了實驗基礎，但仍需后續進行更加深入的機制研究。

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（收稿日期：2021-10-08 修回日期：2021-12-21）

（編輯：林 靜）

基金項目：新疆維吾爾自治區自然科學基金面上項目（No.2021D01C259）

碩士研究生。研究方向：天然藥物抗腫瘤作用機制。電話：0991-2110360。E-mail：965175578@qq.com

通信作者：副教授，碩士生導師，博士。研究方向：天然藥物抗腫瘤作用機制。電話：0991-2110360。E-mail：896612093@qq.com