市售葛根配方顆粒與標準湯劑質量比較*

盛曉靜，廖立英，張曉云

（江西省九江市食品藥品檢驗所，江西 九江 332000）

葛根為豆科植物野葛Pueraria lobata（Willd.）Ohwi的干燥根，有解肌退熱、生津止渴、透疹、升陽止瀉、通經活絡、解酒毒等功效［1］。本研究中擬考察不同廠家葛根配方顆粒的質量，并與標準湯劑比較，探討市售葛根配方顆粒代替飲片配方的可行性。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

AG285 型電子天平（瑞士Mettler Toledo 公司）；2550 型紫外- 可見分光光度計（日本Shimadzu 公司）；KQ - 600DE 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；1200 Series型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）。

1.2 試藥

高效預制硅膠G 薄層板（德國Merck 公司，規格為10 cm×20 cm）；葛根對照藥材（批號為121551-201805），葛根素對照品（批號為110752-201816，含量為95.4%），均購自中國食品藥品檢定研究院；樣品信息見表1（配方顆粒的規格是指每1 g含藥量對應的飲片質量）；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

表1 葛根配方顆粒及葛根飲片信息Tab.1 Information of formula granules and decoction pieces of Puerariae Lobatae Radix

2 方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別

取配方顆粒樣品0.2 g，研細，加甲醇10 mL，超聲（頻率為40 kHz，功率為600 W）處理2 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，即得配方顆粒供試品溶液；取葛根飲片1.0 g，加水30 mL，煮沸1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇10 mL，同法制成標準湯劑供試品溶液；取葛根素對照品，加甲醇制成每1 mL 含1 mg 的對照品溶液；取葛根對照藥材1 g，與葛根飲片同法制成對照藥材溶液。按2020 年版《中國藥典（四部）》通則0502薄層色譜法試驗，吸取上述4 種溶液各2 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲醇-水（14∶5∶0.5，V/V/V）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜及對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點，詳見圖1。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件［2-3］

色譜柱：ACES AQ Plus C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇- 水（22∶78，V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：250 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。

2.2.2 溶液制備

取葛根素對照品適量，精密稱定，加30%乙醇制成每1 mL 含40 μg 的溶液，即得對照品溶液。取葛根配方顆粒樣品10 g，研細，取約相當于葛根飲片0.2 g，精密稱定，置50 mL 容量瓶中，加入30%乙醇30 mL，振搖提取5 min，加30%乙醇定容，搖勻，濾過，取續濾液，經0.45 μm 微孔濾膜濾過，取續濾液，即得供試品溶液Ⅰ。取葛根飲片100 g，精密稱定，置2 000 mL 燒杯中，煎煮2 次，第1 次加水900 mL，浸泡30 min，煮沸后煎煮1 h，第2 次加水700 mL，煮沸后煎煮30 min，合并2 次的煎煮液，濃縮至約800 mL，轉移至1 000 mL 容量瓶中，加水定容，搖勻，精密吸取2 mL置蒸發皿中，蒸干，殘渣用30%乙醇30 mL 轉移至50 mL 容量瓶中，振搖提取5 min，加30%乙醇定容，搖勻，濾過，取續濾液，經0.45 μm 微孔濾膜濾過，即得供試品溶液Ⅱ［4］。取30%甲醇，作為陰性對照溶液。

1 - 20.供試品溶液 S1.對照品溶液 S2.對照藥材溶液A.配方顆粒 B.標準湯劑圖1 葛根薄層色譜圖1-20.Test solution S1.Reference solution S2.Reference medicinal material solutionA.Formula granules B.Standard decoctionFig.1 TLC chromatograms of Puerariae Lobatae Radix

2.2.3 方法學考察

專屬性試驗：精密吸取2.2.2 項下供試品溶液Ⅰ、對照品溶液、陰性對照溶液各10 μL，按2.2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。結果供試品溶液Ⅰ色譜中，在與對照品溶液色譜相同保留時間處有相應吸收峰，陰性對照無干擾。理論板數按葛根素峰計應不低于3 000，分離度大于1.5，基線分離良好。詳見圖2。

線性關系考察：稱取葛根素對照品11.15 mg，精密稱定，置50 mL 容量瓶中，加30%乙醇溶解并定容，搖勻，作為對照品貯備液，精密吸取2，2，2，5，5 mL，分別置50，25，10，10，5 mL 容量瓶中，其中前4 管加30%乙醇定容，第5 管直接使用，制得系列對照品溶液。吸取10 μL，按2.2.1項下色譜條件進樣測定。以葛根素對照品的峰面積（Y）為縱坐標、進樣量（X，μg）為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程Y= 4 713X+ 2.629，r= 0.999 9（n=5）。結果表明，葛根素進樣量在0.085 10～2.127 00 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：精密吸取對照品溶液（42.55 μg/mL）10 μL，按2.2.1 項下色譜條件連續進樣測定5 次。結果的RSD為0.072%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取按2.2.2項下方法制備的供試品溶液Ⅰ，室溫下分別于0，1，2，4，8，12，24 h 時按2.2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，結果的RSD為0.56%（n=7），表明供試品溶液室溫下放置24 h內穩定。

重復性試驗：取葛根配方顆粒樣品（編號4）約0.02 g，平行6份，分別依法制備供試品溶液1，按2.2.1項下色譜條件進樣，記錄峰面積并計算樣品含量。結果配方顆粒供試品平均含量為7.074%，RSD為0.25%（n=6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：稱取已知含量的葛根配方顆粒樣品6份，精密稱定，分別精密添加葛根素對照品適量，按2.2.2項下方法制成供試品溶液Ⅰ，精密吸取10 μL，按2.2.1 項下色譜條件進樣測定，并計算回收率，結果見表2。

表2 加樣回收試驗結果（n=6）Tab.2 Results of the recovery test（n=6）

2.2.4 樣品含量測定

取各批葛根配方顆粒、標準湯劑，按2.2.1 項下色譜條件進樣測定葛根素的含量［以相當于1 g 葛根藥材（干燥品）計算］。結果配方顆粒及標準湯劑中葛根素平均含量分別為11.27 mg/g和33.90 mg/g，詳見表3。

表3 樣品中葛根素含量測定結果（mg/g）Tab.3 Results of content determination of puerarin in the samples（mg/g）

2.3 干浸膏出膏率考察［5］

精密吸取2.2.2項下供試品溶液Ⅱ制備過程中“定容至1 000 mL 的水煎液”20 mL，置已預先干燥至恒重的蒸發皿中蒸干，在105 ℃條件下干燥至恒重，計算飲片（干燥品）的干浸膏出膏率，與配方顆粒按規格換算的出膏率進行比較，結果配方顆粒與標準湯劑的平均出膏率分別為14.84%和32.87%，詳見表4。

表4 樣品中葛根干浸膏出膏率（%）Tab.4 Dry extract yield of Puerariae Lobatae Radix samples（%）

1.葛根素A.對照品溶液 B.供試品溶液Ⅰ C.陰性對照溶液圖2 高效液相色譜圖1.PuerarinA.Reference solution B.Test solution Ⅰ C.Negative reference solutionFig.2 HPLC chromatograms

3 討論

預試驗中，在測定葛根素含量時，分別考察了不同色譜柱的分離效果［6-10］，當流動相為甲醇-水（17∶83，V/V）時，使用Waters Symmetry ShieldTM柱可達到基線分離，相對保留時間為36.26 min，當流動相為甲醇-水（22 ∶78，V/V）時，使用ACES C18AQ Plus 柱（150 mm × 4.6 mm，5 μm）可達到基線分離，相對保留時間16.58 min。在達到有效分離的條件下，選用ACES C18AQ Plus 柱可節省測試時間。還考察了供試品加30%乙醇30 mL 振搖提取2，5 min 及超聲（功率為600 W，頻率為28 kHz）處理5 min 的提取效果［11-15］，結果振搖提取5 min 或超聲（功率為600 W，頻率為28 kHz）處理5 min 均能完全提取待測成分，考慮到節能和方法的簡便，選擇提取方法為振搖提取5 min。

試驗結果顯示，配方顆粒及標準湯劑均能在薄層色譜鑒別中檢出葛根素及葛根藥材的特征斑點，但按相同的葛根當量比較，配方顆粒中的葛根素含量均明顯低于標準湯劑，多數配方顆粒的干浸膏出膏率不及標準湯劑的40%，反映了市售葛根配方顆粒的生產工藝有待優化，配方顆粒的質量亟待提升。

此外，經測定用于生產標準湯劑的10批葛根飲片及相應的標準湯劑的葛根素含量，計算葛根素平均轉移率為71.07%。2020年版《中國藥典（一部）》規定，葛根按干燥品計算，含葛根素不得少于2.4%。因此，相當于1 g葛根藥材（干燥品）的葛根配方顆粒，按平均轉移率的70%計算，葛根素含量應不得少于11.94 mg。10 批葛根標準湯劑的干浸膏平均出膏率為32.87%，按平均出膏率的70%～130%計算出膏率的范圍應為23.01%～42.73%，即每1 g配方顆粒相當于飲片2.34～4.35 g。

綜上所述，市售葛根配方顆粒的生產工藝有待規范，質量亟待提升。