丁苯肽和長春西汀治療急性缺血性腦卒中對患者血清LncRNA CAI2及CD62P的影響

耿彪 趙小輝 宋志軍 楊晶 劉盼 王洪志 馬天驕

急性缺血性腦卒中是一種由腦部急性血液障礙導致腦組織缺血缺氧的臨床綜合征，該疾病發病急、病情發展迅速，對腦組織的損傷不可逆轉，且致殘率和致死率極高[1]。急性缺血性腦卒中的發病機制大多是患者血管異常堵塞或狹窄，血液粘度異常增加，從而造成腦組織供血障礙。目前臨床上多采用擴張腦血管藥物治療急性缺血性腦卒中，其中長春西汀是目前臨床治療常使用的溶栓藥物之一[2]。由于溶栓的最佳治療時間是早期，因此隨著病情的發展急需聯合其他治療手段提高療效并改善患者預后。近年來，臨床治療常采用丁苯肽聯合治療急性缺血性腦卒中，丁苯肽不僅可以有效抑制血小板聚集，還可以降低機體炎性因子水平，從而保護神經細胞[3]。近年來有研究發現，長非編碼RNA(long non coding RNA，LncRNA)CAI2和血小板膜激活標記物P-選擇素(Platelet membrane activation marker P-selectin，CD62P)在急性缺血性腦卒中病情發展中具有巨大研究價值[4，5]。本研究采用丁苯肽結合長春西汀治療急性缺血性腦卒中患者，及其對血清LncRNA CAI2及CD62P的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 研究對象為2017年3月至2020年5月于本院就診并接受治療的220例急性缺血性腦卒中患者，采用隨機數字表法分為對照組和觀察組，每組110例，年齡40～75歲。2組患者在年齡和性別比、病程和合并癥等臨床資料差異無統計學意義(P>0.05)。本研究由醫院倫理委員會批準進行，患者及家屬簽訂知情同意書。見表1。

表1 2組患者的一般資料 例，

1.2 納入與排除標準 納入標準：(1)患者經CT檢查已確診患有急性缺血性腦卒中，臨床癥狀符合2018版急性缺血性腦卒中急診急救中國專家共識[6]中急性缺血性腦卒的診斷標準；(2)入院前無急性缺血性腦卒中病史；(3)病發3 d內入院接受治療；(4)無治療藥物過敏史。排除標準：(1)患有腦出血或其他自發性出血疾病；(2)患有其他并發癥、惡性腫瘤以及精神病的患者；(3)身體重要臟器受損或內分泌系統障礙；(4)患者認知和社交無障礙。

1.3 方法 患者均給予常規治療，主要包括穩定顱內壓、營養支持、內環境平衡、抗血小板凝聚、液體補充治療和輔助呼吸等。此外，對于合并高血壓患者給予常規降壓治療，對于合并高血糖患者給予常規降糖治療。除常規治療外，對照組給予靜脈滴注長春西汀注射液(規格：50 mg/2 ml，批號：31170306，河北智同生物制藥有限公司)，1次/d，30 mg/次。觀察組在常規治療的基礎上，給予丁苯肽膠囊結合長春西汀注射液，常規治療和長春西汀注射液的治療方案同對照組，丁苯肽膠囊(規格：0.2 g/顆，必普藥業有限公司)口服給藥，3次/d，0.2 g/次。2組治療期均為2周。

1.4 觀察指標

1.4.1 臨床療效：本實驗采用美國國立衛生研究院卒中量表(NIH Stroke Scale,NIHSS)評價臨床療效，評價指標為治療后患者神經功能狀況。分別于2周后觀察并記錄兩組治療前后的NIHSS分數。NIHSS分數相較治療前降低>90%，記作治愈；NIHSS分數相較治療前降低在46%～90%，記作顯著有效；NIHSS分數相較治療前降低在18%～45%，記作有效；NIHSS分數相較治療前降低<18%，記作無效。治療有效率=治愈率+顯著有效率+有效率。

1.4.2 NIHSS評分、mRS評分和Barthel指數:分別于2周后比較2組治療前后NIHSS評分、改良Rankin量表(modified Rankin scale,mRS)評分和Barthel指數(the Barthelindex of ADL，BI)評分。無或有輕微神經功能障礙，記作0分；有輕微神經功能障礙，但不影響工作生活，記作1分；無法正常工作生活，在他人幫助下可實現生活自理，記作2分；可獨立行走，在他人幫助下可實現生活自理，記作3分；無法獨立行走，在他人幫助下可實現生活自理，記作4分；患者大小便失禁，無法行走，且完全喪失生活能力，記作5分。

1.4.3 血液流變學指標：取患者早晨空腹肘靜脈血2 ml，4℃離心10 min(3 000 r/min)，LG-R-80A型全自動血液黏度計(北京中科富邦醫療設備有限公司)測定其中全血黏度(whole blood viscosity，WBV)、血漿黏度(plasma viscosity，PV)水平、纖維蛋白原(fibrinogen，FIB)水平和紅細胞比容(hematocrit，HCT)。

1.4.4 血清炎性因子水平:治療前后取患者早晨空腹靜脈血5 ml，4℃離心10 min(3 000 r/min)，取上層血清通過免疫比濁法(檢測試劑來自RANDOX公司)測定其中C-反應蛋白(CRP)含量。采用酶聯免疫法(檢測試劑均來自北京晶美生物技術有限公司)測定血清中白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白介素-8(IL-8)的含量。

1.4.5 血清LncRNACAI2和CD62P:水平分別治療前后取患者早晨空腹后靜脈取血樣品3ml，加入抗凝劑枸櫞酸鈉，4℃離心15 min(4 000 r /min)，取上層血清采用實時定量聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction，PCR)測定其中LncRNACAI2水平。首先采用逆轉錄試劑盒(批號：A257414368813，美國應用生物系統公司)將血清樣品中RNA逆轉錄為cDNA，然后采用PowerUp SYBR Green預混液(批號：A25741，美國應用生物系統公司)定量擴增cDNA，最后以甘油醛-3-磷酸脫氫酶基因(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH) 為對照品，采用熒光定量PCR儀(美國伯樂公司)實時定量PCR，并通過2-ΔΔCT法計算LncRNACAI2的相對含量。分別治療前后取患者早晨空腹后靜脈取血樣品5 ml，加入抗凝劑枸櫞酸鈉，4℃離心10 min(3 000 r/min)，取上層血清采用酶聯免疫吸附法(檢測試劑來自上海酶聯生物有限公司)測定其中CD62P水平。

2 結果

2.1 臨床療效 治療后對照組總有效率為 89.1%，觀察組為96.4%，觀察組總有效率顯著高于對照組，2組間差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 2組治療后臨床療效比較 n=110,例(%)

2.2 NIHSS、mRS和BI評分 治療前2組NIHSS、mRS和BI評分指數均無明顯差異(P>0.05)，治療后2組NIHSS和mRS評分均顯著降低(P<0.05)，BI顯著提高(P<0.05)。此外，治療后觀察組的NIHSS和mRS評分均明顯低于對照組(P<0.05)，BI明顯高于對照組(P<0.05)。見表3。

表3 2組治療前后NIHSS、mRS和BI評分比較 n=110,分，

2.3 血液流變學指標 治療前2組血液流變學指標均無明顯差異(P>0.05)，治療后2組均明顯降低(P<0.05)，且觀察組均明顯低于對照組(P<0.05)。見表4。

表4 2組治療前后血液流變學指標比較

2.4 血清炎性因子水平 治療前2組的血清炎性細胞因子水平均無明顯差異(P>0.05)，治療后2組均明顯降低(P<0.05)，且治療后觀察組均明顯低于對照組(P<0.05)。見表5。

表5 2組治療前后血清炎性因子水平比較

2.5 血清LncRNACAI2和CD62P水平 治療前2組的血清LncRNACAI2和CD62P水平均無明顯差異(P>0.05)，治療后2組均顯著降低(P<0.05)，且觀察組均低于對照組(P<0.05)。見表6。

表6 2組治療前后血清LncRNACAI2和CD62P水平比較

3 討論

急性缺血性腦卒中發病原因為患者腦血管病理性萎縮或是血液粘度異常增高導致腦血管堵塞，從而引發腦血栓以及其他并發癥[7]。長春西汀是目前臨床治療中常使用的一種溶栓藥物[8]，作為吲哚類生物堿的長春西汀脂溶性較好的，可通過血腦屏障直達腦組織，有效降低腦血液粘度，從而改善患者血栓。但是溶栓治療時間很短暫，因此在臨床治療中常需聯合其他藥物提高療效。腦組織缺血缺氧會刺激人體氧化應激反應，從而促進機體分泌炎性因子，過高水平的炎性因子會進一步損傷神經細胞。因此本研究采用長春西汀聯合可有效降低機體炎性因子水平的丁苯肽，以達到提高療效以及改善患者預后的作用。

本研究中，觀察組總有效率顯著高于對照組(P<0.05)。這說明長春西汀和聯合用藥均可以有效治療急性缺血性腦卒中并改善患者的神經功能恢復，但聯合用藥的療效更佳。治療后2組的NIHSS和mRS評分均顯著降低(P<0.05)，BI均顯著提高(P<0.05)這說明長春西汀和聯合用藥均可以有效改善患者生活自理能力以及神經功能恢復。原因可能是長春西汀可有效阻滯機體鈣離子通道[9]，降低機體鈣離子水平，從而保護腦組織缺血缺氧狀態下神經細胞興奮性損傷，從而避免神經細胞受損。此外，丁苯肽中消旋-3-正定基本肽成分可保護腦細胞線粒體的功能與結構[10]，從而保護神經細胞，改善患者的神經功能恢復。

治療后2組的血液流變學指標均明顯降低(P<0.05)，且觀察組低于對照組(P<0.05)。這說明長春西汀和聯合用藥均可以有效改善急性缺血性腦卒中患者的全血黏度、血漿黏度水平、纖維蛋白原水平和紅細胞比容。原因可能是長春西汀可調節紅細胞形狀[11]，降低血管內紅細胞水平，從而降低血液粘度。丁苯肽中消旋-3-正定基本肽成分可有效調節機體花生四烯酸表達水平[12]，從而抑制腦血管血小板異常凝聚，從而降低血液粘度。

治療后2組的血清炎性細胞因子水平均明顯降低(P<0.05)，且觀察組低于對照組(P<0.05)。這說明相較于長春西汀，聯合用藥降低機體血清炎性細胞因子水平效果更佳。分析認為原因可能是丁苯肽的活性成分消旋-3-正定基本肽可抑制機體合成谷氨酸[13]，從而抑制機體氧化應激反應產生炎性因子，避免神經細胞炎性受損。

急性缺血性腦卒中的致死率極高，因此預防診斷逐漸成為臨床治療急性缺血性腦卒中的研究熱點，其中LncRNACAI2和CD62P的水平變化與急性缺血性腦卒中病情發展密切相關。LncRNA廣泛存在于人體腦組織中，參與機體神經炎性反應[14]，影響急性缺血性腦卒中患者神經功能恢復。CD62P作為促炎性因子[15]，在血小板活化過程中具有重要作用。本研究發現治療后2組的血清LncRNACAI2和CD62P水平均顯著降低(P<0.05)。健康人體內血清LncRNACAI2水平極低[16]，患有急性缺血性腦卒中后明顯增高，聯合治療后血清LncRNACAI2和CD62P水平顯著降低，這提示臨床中可監測患者血清LncRNACAI2和CD62P水平，提早診斷和治療急性缺血性腦卒中，給予患者個性化治療，改善患者預后。

本研究發現，長春西汀聯合丁苯肽可以顯著改善急性缺血性腦卒中患者的神經功能和生活自理能力恢復。此外，丁苯肽結合長春西汀可能發生協同作用，增強溶栓和抗炎作用，顯著改善血液流變學指標、血清炎性因子水平以及血清LncRNACAI2和CD62P水平。