長鏈非編碼RNA-PTENP1在結直腸癌組織中的表達及意義

左仲學 王宏志 黃緒群

結直腸癌已成為導致我國居民死亡的主要癌種[1]，對人群生命安全構成嚴重威脅。盡管現有的診療手段不斷進步，但患者總體預后依然改善有限[2]。有研究指出[3]，高轉移性與結直腸癌患者死亡密切相關。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)作為一種長度在200 nt以上的RNA，缺乏蛋白編輯功能，但參與了多種疾病發生進展過程[4]，且在多種惡性腫瘤組織中出現表達異常[5]。10號染色體上磷酸酶與張力蛋白同源缺失性基因假基因1(phosphase and tensin homology deleted onchromosome ten pseudogene 1，PTENP1)作為一種lncRNA，是抑癌基因PTEN的假基因，可通過競爭PTEN表達而發揮作用，已發現其參與了多種惡性腫瘤發生進展過程[6]。本研究檢測了結直腸癌組織中PTENP1表達情況，探討其在不同臨床指標間的表達差異性，以及與患者預后的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以2013年8月至2015年8月我院收治的結直腸癌患者為對象，共入選106例，男59例，女47例；平均年齡(59.55±10.27)歲；術中將結直腸癌和癌旁>3 cm正常腸黏膜組織(均經病理學檢查排除腫瘤)，快速置于液氮中，-70℃保存。本研究通過醫院倫理委員會批準，均行知情同意。

1.2 納入與排除標準 納入標準：(1)術前均未行任何放化療治療，術后病理學檢查確證；(2)臨床資料完整，均完成隨訪。排除標準：(1)出現遠處轉移，采用非根治性手術治療者；(2)心肝腎等重要臟器嚴重功能障礙者；(3)合并有其他系統腫瘤者、內分泌代謝系統疾病者。

1.3 方法

1.3.1 利用RT-qPCR技術檢測組織中PTENP1表達：取結直腸癌和正常腸黏膜組織，剪碎、研磨，加入細胞裂解液，使用總RNA提取試劑(美國Sigma公司)提取組織中總RNA，檢測其純度和濃度，按照逆轉錄試劑盒(美國Fermentas公司)說明獲得cDNA，使用實時熒光定量PCR儀(美國ABI公司)，按照PCR擴增試劑盒(日本Takara公司)說明對引物序列(由上海生工生物工程公司設計合成)進行擴增。序列：PTENP1：上游：5’-GGATCATTACCTCACACCATACC-3’，下游：5’-TCTAAGAAACAACTAAGCCAAAGTC-3’；β-actin：上游：5’-TCCCTGGAGAAGAGCTACG-3’，下游：5’-GTAGTTTCGTGGATGCCACA-3’。條件：94℃ 2 min，94℃ 30 s，63℃ 30 s，76℃ 30 s，38次循環。每個樣品設復孔6個。用2-△△Ct法計算組織中PTENP1表達量。

1.3.2 病例隨訪：于術后第1天開始對病例隨訪，形式包括住院查房及出院后門診、電話等，截止時間2021年8月31日，所有病例隨訪滿5年，以死亡作為結局事件，記錄患者總生存時間和5年生存率。

2 結果

2.1 PTENP1在結直腸癌和癌旁組織中的表達量 PTENP1在結直腸癌組織中的表達量為(0.24±0.09)，低于癌旁組織中的(1.02±0.13)，差異有統計學意義(t=52.036，P<0.001)。

2.2 PTENP1在不同臨床病理指標結直腸癌組織中的表達差異 PTENP1在不同性別、年齡、腫瘤部位和腫瘤大小中表達量差異無統計學意義(P>0.05)，而在不同分化程度、TNM分期、浸潤深度、是否發生脈管浸潤和淋巴結轉移中表達量有差異(P<0.05)。見表1。

表1 PTENP1在不同臨床病理指標結直腸癌組織中的表達差異

2.2 結直腸癌組織中PTENP1表達量與預后的相關性 106例患者隨訪時間2～60個月，中位隨訪時間60個月，以結直腸癌組織中PTENP1表達量的均值0.24為界值，將患者分為低表達組(n=60)和高表達組(n=46)，低表達組患者平均生存時間(32.85±2.78)個月，5年生存率為35.00%，高表達組分別為(51.02±2.28)個月和71.74%，Log-Rank檢驗有統計學意義(χ2=17.140，P<0.01)。見圖1。

圖1 結直腸癌組織中PTENP1表達量與預后的相關性

2.3 結直腸癌患者生存期的危險因素分析 分化程度、TNM分期、淋巴結轉移和PTENP1表達是影響患者生存期的風險因素(HR=0.518、2.061、2.342和0.424，P<0.05)。見表2。

表2 影響結直腸癌患者生存期的多因素分析

3 討論

結直腸癌患者由于早期不易診斷，一旦出現全身癥狀時已進展至中晚期，錯失最佳治療時機[7]，盡管腫瘤診療技術取得長足發展，但結直腸癌患者生存率依然較低，轉移和復發依然是造成患者死亡的主要原因[8]。lncRNA作為生物體內廣泛存在但不具有蛋白翻譯功能的長鏈RNA，已有研究顯示，其與細胞增殖、遷移、分化等密切相關[9]。并且，多項研究表明，lncRNA與惡性腫瘤發生進展密切相關[10,11]。有研究指出，結直腸癌組織中存在lncRNA表達譜異常，可能參與了結直腸癌轉移過程[12]。PTENP1作為一種lncRNA，是PTEN的假基因，位于人染色體9q13.3，有研究指出，其可抑制膀胱癌的進展[13]。亦有研究指出，PTENP1可作為口腔鱗癌早期標記物及治療靶點[14]。Fan等[15]則指出，PTENP1通過抑制miR-106b抑制宮頸癌進展。本研究結果顯示，結直腸癌組織中PTENP1呈低表達，提示PTENP1可能作為抑癌基因參與了結直腸發生。本研究結果顯示，低分化、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、浸潤深度T3～T4、發生脈管浸潤和淋巴結轉移的患者組織中表達量明顯降低，說明PTENP1可能參與了腫瘤惡性進展。

有研究指出，檢測血清PTENP1表達水平對胃癌有潛在診斷及預后評估價值[16]。張宇華等[17]指出，血清PTENP1可用于絨毛膜癌診斷和評估預后。這些研究報道表明，PTENP1可能與惡性腫瘤患者預后關系密切。本研究結果顯示，與高表達組比較，低表達組患者平均生存時間和5年生存率均顯著降低，說明結直腸癌患者組織中PTENP1表達水平與患者預后密切相關。本研究結果表明，PTENP1低表達是結直腸癌患者生存期的風險因素之一，進一步說明PTENP1低表達是影響預后的危險因素，提示PTENP1可能是評估患者預后的潛在標志物。

綜上所述，結直腸癌患者組織中PTENP1表達量降低，且與代表惡性進展的臨床指標有關，與患者不良預后有關，有望成為患者診療及評估預后的標志物。