蒙藥混其勒-7的蓄積毒性實驗研究

寶樂爾 白梅榮 胡伊力格其 那音臺 巴達拉胡 美麗 田香

摘要：目的 本研究在急性毒性實驗基礎上對混其勒-7進行蓄積毒性試驗，為混其勒-7的安全合理用藥奠定實驗依據。方法 將昆明種小鼠隨機分為混其勒-7組和正常對照組。以4d為1個階段，首次給藥劑量為0.1LD50，其他階段給藥劑量依次遞增為1.5倍，直至該組動物死亡一半為止。記錄各階段動物死亡情況并計算蓄積系數。同時計算臟器指數和相應生化指標。結果 蓄積毒性試驗結果顯示，混其勒-7的蓄積系數均為K>5，分級為弱蓄積。與正常對照組比較，混其勒-7組的肝脾指數明顯升高，AST和CREP的含量明顯升高，UREAL含量明顯降低，均有統計學意義（P<0.05或P<0.01）。結論 混其勒-7對肝腎有弱蓄積性毒性。

關鍵詞：蒙藥;混其勒-7;蓄積毒性;實驗研究

中圖分類號：R285.5?? 文獻標志碼：A?? 文章編號：1007-2349（2022）02-0080-03

據《通瓦嘎吉德》記載，高吉拉-7由制馬錢子、訶子、木香、白云香、天竺黃、紅花、沉香等七味藥組成，具有活血、舒氣、止痛的功能，主要用于胸脅、氣急、胸脅刺痛、壞疽等，孕婦禁用[1-2]。該復方的主要藥味馬錢子是馬錢科植物馬錢（Strychnos nux-Vomica L.）或長籽馬錢（Strychnos Sted.ex DC.）的干燥成熟的種子，為常用有毒蒙藥之一[3-5]，從而使混其勒-7臨床應用受到一定限制。臨床上，當藥物反復多次進入機體后，藥物進入機體的速度或總量超過機體代謝轉化的速度與排出機體的速度或總量時，藥物或其代謝產物就可能在機體內逐漸增加并貯留某些部位。這種現象就稱為藥物的蓄積作用，大多數蓄積作用會產生蓄積毒性[6]。蒙藥混其勒-7是多次口服的藥物，且含有有毒藥味馬錢子，因此，該藥在臨床應用中產生蓄積毒性的可能性很大。本研究以混其勒-7為示例藥物，以昆明種小鼠為研究對象，進行蓄積毒性研究，初步探討混其勒-7毒性強度、中毒劑量、毒性靶器官，為混其勒-7臨床安全合理應用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 昆明種小鼠，SPF級，雌雄各半，體質量（20±2）g，由遼寧長生生物技術股份有限公司提供（合格證號：SCXK（遼）2015-0001）。動物飼養于內蒙古民族大學蒙醫藥學院動物實驗室（室內溫度20℃～25 ℃，濕度40%～60%）。

1.1.2 實驗藥材 制馬錢子（批號：20200634）、訶子（批號：20200801）、木香（批號：20200615）、白云香（批號：20171109）、天竺黃（批號：20170721）、紅花（批號：20200622）、沉香（批號：20200641）均由內蒙古民族大學附屬醫院制劑室提供，由蒙醫藥學院包桂花教授鑒定。

1.1.3 實驗試劑 丙氨酸氨基轉移酶檢測試劑盒（ALT，批號 43546001）、天門冬氨酸氨基轉移酶檢測試劑盒（AST，批號44713101）、尿素/尿素氮檢測試劑盒（UREAL，批號48268901）、肌酐檢測試劑盒（CREP，批號 47756001）均購自羅氏診斷產品（上海）有限公司。

1.1.4 實驗儀器 CobasC311羅氏全自動生化分析儀（日本）;TG16-WS臺式高速離心機（長沙）;YP-5002電子天平;DE-200 g粉碎機（浙江）;BCH198K冰箱（青島）。

1.2 實驗方法

1.2.1 分組與給藥 40只昆明小鼠（雌雄各半）按體重和性別隨機分為正常對照組、混其勒-7組，每組20只。給藥前12 h禁食不禁水。給藥劑量以4 d為1個階段，第1個階段每只動物每天給藥劑量為0.1 LD50，以后各階段依次遞增1.5倍，直至該組動物死亡一半。正常對照組每日給予與實驗組相同體積的蒸餾水。

1.2.2 觀察指標

1.2.2.1 日常狀態觀察 給藥后每天稱重并詳細觀察并記錄給藥組小鼠的外部表現（運動狀態、毛發顏色、排泄物的形狀及死亡率等）。實驗最后一天處理小鼠后取五臟后生理鹽水漂洗并用濾紙擦干稱重，計算各臟器指數（公式：臟器指數=臟器重量/體重×100%）。

1.2.2.2 計算蓄積系數[6-8] 實驗最后1 d計算混其勒和混其勒-7的蓄積系數。（公式：蓄積系數K=累積劑量/LD50值）。

1.2.2.3 混其勒-7對蓄積毒性小鼠肝、腎功能的影響 實驗最后一天處理剩余小鼠，采血，3000 r/min離心10 min分離血清，檢測生化指標丙氨酸轉氨酶（ALT）、天冬氨酸轉氨酶（AST）、尿素（UREAL）、肌酐（CREP）。

1.2.2.4 統計學方法 用SPSS 22.0軟件分析數據，進行組間t檢驗。

2 實驗結果

2.1 蒙藥混其勒-7小鼠蓄積毒性日常狀態 實驗頭兩個階段混其勒-7組的小鼠沒有明顯的癥狀，給藥第三階段開始精神狀態欠佳、活動變少、全身蜷縮，給藥后出現顫抖甚至死亡現象。跟混其勒組基本相似。

2.2 蒙藥混其勒-7蓄積系數、用藥劑量、給藥時間及死亡現象 給藥后第三階段開始出現小鼠死亡現象，第五階段死亡小鼠的數量到達該組動物數量的一半，此時小鼠用藥總量為8329.8 mg/kg。蓄積系數K>5，出現了弱蓄積性。見表1。

2.3 蒙藥混其勒-7蓄積毒性對小鼠的臟器指數的影響 與正常對照組比較，混其勒-7組小鼠的肝脾指數明顯升高（P<0.05）。由此可見混其勒-7對小鼠肝脾具有一定程度的影響。見表2。

2.4 蒙藥混其勒-7蓄積毒性對小鼠的肝腎功能的影響 與正常對照組比較，混其勒-7組小鼠的血清中AST和CREP含量明顯升高（P<0.05，P<0.01），UREAL含量顯著降低（P<0.05）。由此進一步表明混其勒-7對小鼠肝腎具有一定程度的影響。見表3。

3 結論

蒙藥混其勒-7蓄積系數K均大于5，具有弱蓄積毒性。

4 討論

蓄積毒性實驗是每日給藥小于致死劑量的藥物使其染毒，判斷藥物代謝過程中是否有蓄積現象[7-8]。實驗結果表明，蒙藥混其勒-7蓄積系數K均大于5，出現了弱蓄積毒性。實驗前兩階段小鼠的日常狀態無明顯變化，第三階段開始小鼠的動作變緩慢、蜷縮、毛發光澤度下降，給藥后出現顫抖、甚至死亡現象。

與正常對照組比較，蒙藥混其勒-7組的肝腎指數均明顯升高且血清AST、ALT含量也明顯升高，統計學都具有顯著性差異。這可能由于開始階段藥物濃度較低，混其勒-7到達肝臟后，由肝臟解毒作用被初步解毒，接著藥物濃度增加后肝臟解毒作用逐漸變弱而出現中毒現象。蒙藥混其勒-7的UREAL含量明顯下降，CREP含量明顯升高。由此初步判定蒙藥混其勒-7的蓄積毒性的靶向器官是??? 肝和腎臟。該研究為混其勒-7臨床合理應用及慢性毒性研究奠定了實驗基礎。

參考文獻：

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（收稿日期：2021-08-27）