重組Fc融合蛋白類藥物研究進(jìn)展

孫鈺芳，宗 輝，郭詩(shī)雨，陳思敏，安毛毛*，慎 慧

1. 同濟(jì)大學(xué)附屬第十人民醫(yī)院藥學(xué)部，上海 200072

2. 同濟(jì)大學(xué)附屬東方醫(yī)院南院檢驗(yàn)科，上海 200120

近年來(lái)，治療性單克隆抗體是最暢銷的生物制劑。然而，隨著基因工程、蛋白質(zhì)工程等技術(shù)的成熟，新型抗體衍生物正在取代傳統(tǒng)的單克隆抗體，用于解決復(fù)雜的病理生理學(xué)問(wèn)題并改善現(xiàn)有療法［1］。IgG形式的抗體分子之所以在體內(nèi)具有長(zhǎng)半衰期，主要?dú)w因于其Fc片段與新生兒Fc受體（neonatal Fc receptor， FcRn）結(jié)合介導(dǎo)的再循環(huán)機(jī)制。通過(guò)重組表達(dá)技術(shù)將IgG-Fc片段連接到另一個(gè)具有生物學(xué)活性的分子上，所開發(fā)的藥物稱為重組Fc融合蛋白類藥物。IgG-Fc片段融合蛋白技術(shù)是目前延長(zhǎng)蛋白和多肽類藥物半衰期的最有效手段之一。Fc融合蛋白分子由免疫球蛋白的Fc結(jié)構(gòu)域（鉸鏈區(qū)-CH2-CH3）與功能分子連接構(gòu)成。細(xì)胞表面受體、細(xì)胞因子、酶、病原體表面肽類抗原等具有生物學(xué)意義的分子都可以與Fc段進(jìn)行融合表達(dá)［2］，從而延長(zhǎng)其體內(nèi)半衰期，達(dá)到藥效學(xué)作用［3］。此外，F(xiàn)c融合蛋白還具有抗體的其他生物學(xué)特性，如引發(fā)抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity， ADCC）效應(yīng)。

1989年，Capon等［4］將CD4分子細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域與人IgG1-Fc融合，構(gòu)建了第1個(gè)治療性Fc融合蛋白，該蛋白與人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus， HIV）的包膜（Env）糖蛋白特異性結(jié)合，抑制HIV感染CD4＋T細(xì)胞。近年來(lái)，F(xiàn)c融合蛋白類藥物快速發(fā)展。本文對(duì)重組Fc融合蛋白的結(jié)構(gòu)特征與藥理學(xué)特性進(jìn)行綜述，并介紹重組Fc融合蛋白的臨床藥物開發(fā)及其在非臨床領(lǐng)域中的應(yīng)用與發(fā)展。

1 重組Fc融合蛋白的藥理學(xué)作用機(jī)制

Fc融合蛋白由功能蛋白和Fc段構(gòu)成，其藥理學(xué)特性機(jī)制主要分為2類：（1）功能蛋白識(shí)別腫瘤細(xì)胞表面抗原，F(xiàn)c段與FcγRs作用激活免疫細(xì)胞，誘導(dǎo)ADCC、抗體依賴的細(xì)胞吞噬（antibodydependent cellular phagocytosis，ADCP）和補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性（complement-dependent cytotoxicity， CDC）效應(yīng)，產(chǎn)生溶細(xì)胞作用；（2）僅功能蛋白發(fā)揮其特定的生物學(xué)作用，F(xiàn)c段輔助延長(zhǎng)功能蛋白半衰期，使其在體內(nèi)長(zhǎng)效作用。

1.1 Fc段的主要功能

1.1.1 介導(dǎo)細(xì)胞毒性效應(yīng)Fc段的潛在免疫調(diào)節(jié)功能依賴其與FcγRs家族的相互作用來(lái)激活或抑制免疫細(xì)胞，介導(dǎo)ADCC、CDC及ADCP效應(yīng)，近而調(diào)控后續(xù)的免疫反應(yīng)。許多靶向腫瘤細(xì)胞表面抗原的治療性單克隆抗體依賴此機(jī)制發(fā)揮作用，如利妥昔單抗、曲妥珠單抗、阿侖單抗等。細(xì)胞表面蛋白的配體與Fc段構(gòu)建而成的融合蛋白同樣也可依賴Fc-FcγRs的相互作用發(fā)揮溶細(xì)胞作用。溶細(xì)胞性Fc融合蛋白的功能蛋白識(shí)別靶細(xì)胞表面抗原，F(xiàn)c段與自然殺傷（natural killer， NK）細(xì)胞表面的FcγRⅢA結(jié)合，激活NK細(xì)胞，釋放細(xì)胞毒性顆粒（穿孔素、顆粒酶），導(dǎo)致靶細(xì)胞凋亡［5］。增強(qiáng)Fc段與FcγRⅢA的親和力可改善ADCC效應(yīng)介導(dǎo)的腫瘤殺傷作用。補(bǔ)體復(fù)合物C1的亞組份C1q是由6個(gè)相同亞單位組成的對(duì)稱六聚體，與免疫復(fù)合物的Fc段結(jié)合后，介導(dǎo)CDC效應(yīng)，募集血清中存在的大量C1q，形成膜攻擊復(fù)合物（membrane attack complex， MAC），誘導(dǎo)靶細(xì)胞裂解［6-8］。用于治療B細(xì)胞淋巴瘤的抗CD20利妥昔單抗依賴CDC效應(yīng)控制并清除惡性B細(xì)胞。目前，關(guān)于增強(qiáng)抗體CDC活性的研究主要聚焦于Fc段與C1q的親和力。經(jīng)分子間Fc-Fc相互作用形成的IgG六聚體是六價(jià)C1q的最佳結(jié)合位點(diǎn)［9-11］。Jong等［11-12］研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)c段單點(diǎn)突變（E430G）使IgG更容易形成六聚體形式，增強(qiáng)CDC活性；而Wang等［13］發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)c段的單價(jià)靶點(diǎn)具有更有利的幾何定位，能夠更恰當(dāng)?shù)嘏cC1q結(jié)合，激活CDC效應(yīng)。

1.1.2 延長(zhǎng)功能蛋白半衰期內(nèi)源性IgG在FcRn的保護(hù)下，半衰期可達(dá)19 d。在酸性環(huán)境下，即細(xì)胞內(nèi)涵體中（pH 6.0～6.5），IgG-Fc段與FcRn相互作用，2個(gè)FcRn分子結(jié)合1個(gè)IgG分子，形成穩(wěn)定復(fù)合物，延緩溶酶體對(duì)IgG的降解，延長(zhǎng)IgG的血漿半衰期；而在pH7.4的生理環(huán)境下，二者不結(jié)合，因此FcRn以pH依賴性的方式維持血液循環(huán)中高水平的抗體濃度［14］。多肽及一些普通蛋白分子量較小，易被內(nèi)源性蛋白酶、肽酶水解，腎臟清除速率較快、半衰期較短，嚴(yán)重阻礙蛋白分子的藥物開發(fā)［15］。然而將小分子蛋白或多肽與Fc段構(gòu)建成融合蛋白后，賦予了蛋白分子類似于抗體的性質(zhì)，通過(guò)Fc段與FcRn的作用，其血漿半衰期被顯著延長(zhǎng)，能夠在體內(nèi)發(fā)揮長(zhǎng)效作用。例如，內(nèi)源性胰高血糖素樣肽-1（glucagon-like peptide-1，GLP-1）易被二肽基肽酶-4（dipeptidyl peptidase， DPP-4）水解失活，而將GLP-1突變體與hIgG4-Fc融合后得到的杜拉魯肽在體內(nèi)長(zhǎng)效激活GLP-1R，維持血糖穩(wěn)定。

1.2 功能蛋白的性質(zhì)Fc融合蛋白的藥理學(xué)特性除由Fc段介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用和延長(zhǎng)半衰期外，功能蛋白特有的藥理活性同樣重要。不同于以腫瘤抗原為靶點(diǎn)的單克隆抗體，F(xiàn)c融合蛋白的功能蛋白種類、來(lái)源、靶點(diǎn)、效應(yīng)都更加廣泛，在治療性單克隆抗體的基礎(chǔ)上改善藥效，彌補(bǔ)缺陷。例如，在用于治療年齡相關(guān)的濕性黃斑變性（wet age-related macular degeneration，wAMD）的生物制劑中，雷珠單抗為單靶點(diǎn)藥物，僅能作用于血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的A亞型（vascular endothelial growth factor-A， VEGF-A），而 阿 柏西普和康柏西普這2種Fc融合蛋白類藥物，可與VEGF-A、VEGF-B、胎盤生長(zhǎng)因子（placental growth factor， PLGF）結(jié)合，發(fā)揮更高效的抗腫瘤活性。百健艾迪研發(fā)的重組凝血因子Ⅷ-Fc融合蛋白（efmoroctocog alfa）可暫時(shí)性替代凝血過(guò)程中缺失的凝血因子，用于預(yù)防和治療A型血友病。此外，功能蛋白氨基酸殘基的微小變化也可導(dǎo)致其親和力和生物活性發(fā)生顯著改變，從而改善其治療特性。例如，2005年被FDA批準(zhǔn)用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）的Fc融合蛋白藥物阿巴西普，其功能蛋白為細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān) 蛋 白-4（cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4， CTLA-4）的胞外段。對(duì)CTLA-4進(jìn)行定點(diǎn)突變、替換氨基酸殘基（A29Y/L104E）得到的貝拉西普，與CD80和CD60的結(jié)合顯著增強(qiáng)［16-17］。2011年，貝拉西普被批準(zhǔn)上市，用于抑制器官移植排斥反應(yīng)［18］。IL-2-Fc三重突變體（IL-23XFc，R38D/K43E/E61R）與CD25的結(jié)合被抑制，優(yōu)先促進(jìn)CD25-CD122highMP（memory-phenotyp）CD8和NK細(xì)胞的增殖，活性、選擇性較IL-2WTFc和IL-2/mAb復(fù)合物明顯提高［19］。

2 重組Fc融合蛋白的分子設(shè)計(jì)

2.1 Fc骨架亞型的選擇不同的IgG亞型與FcγRs的親和力不同，導(dǎo)致其免疫學(xué)活性存在差異。hIgG的4個(gè) 亞 型 中，IgG1、IgG3與Ⅰ型FcγRs（FcγRⅠ、FcγRⅡA、FcγRⅡB、FcγRⅡC、FcγRⅢA、FcγRⅢB）的親和力較高，目前關(guān)于重組Fc融合蛋白藥物的研究多選用IgG1。由于IgG3的鉸鏈區(qū)較長(zhǎng)，易被蛋白酶水解，半衰期較短，導(dǎo)致其藥用功能的開發(fā)受到阻礙［20-21］。但有研究［20］發(fā)現(xiàn)，IgG3-FcR435H突變體與FcRn的結(jié)合明顯強(qiáng)于非突變體，體內(nèi)半衰期接近IgG1，對(duì)肺炎鏈球菌感染小鼠有強(qiáng)效保護(hù)作用。因此，當(dāng)功能蛋白的存在會(huì)阻斷IgG1-Fc與FcRs結(jié)合，而限制IgG1-Fc活性時(shí)，有較長(zhǎng)鉸鏈區(qū)的IgG3-FcR435H突變體將成為最佳的替代性選擇［22］。而hIgG2和hIgG4的Fc段 與FcγRs、C1q的 親和力較弱，因此可以用于自身免疫性疾病及異體移植排斥反應(yīng)等需要免疫抑制治療的疾病藥物 開發(fā)。

除IgG-Fc之外，以其他免疫球蛋白Fc段為骨架的Fc融合蛋白可靶向適應(yīng)性免疫細(xì)胞上的FcRs。例如，主要存在于黏膜組織的IgA與FcαR相互作用可誘導(dǎo)強(qiáng)烈抑制信號(hào)和凋亡信號(hào)，阻斷其他受體的激活，因此，以IgA-Fc為骨架的融合蛋白可被開發(fā)，用于黏膜部位抗炎［23-24］。而能夠與B、T（CD4＋、CD8＋）及NK細(xì)胞結(jié)合并刺激記憶反應(yīng)的IgM-Fc段是疫苗中最佳的天然佐劑［25］。IgEFc的受體表達(dá)在APCs（包括大部分DCs）表面。相關(guān)研究表明，抗原-IgE-Fc融合蛋白可能在基于細(xì)胞的腫瘤疫苗中有特殊用途［26］，IgE-Fc段也可用于抑制過(guò)敏反應(yīng)的藥物研究［27］。這些疫苗策略向臨床的安全轉(zhuǎn)化還需進(jìn)行全面深入評(píng)估。

2.2 糖基化的選擇由Fc段糖基化的不同所導(dǎo)致的結(jié)構(gòu)差異會(huì)影響Fc段與FcγRs、補(bǔ)體蛋白、FcRn等配體的結(jié)合，進(jìn)而影響后續(xù)的ADCC、CDC效應(yīng)及血漿半衰期。Fc段CH2結(jié)構(gòu)域Asn297位的N-連接聚糖是一個(gè)核心七糖結(jié)構(gòu)，包括4個(gè)N-乙酰基-葡萄糖胺和3個(gè)甘露糖殘基及數(shù)目可變的半乳糖、巖藻糖、唾液酸殘基，這些糖基是Fc段發(fā)揮生物學(xué)功能所必需的［28］，因此糖基化也被認(rèn)為是治療性抗體類藥物的關(guān)鍵質(zhì)量屬性（critical quality attributes，CQA）［29］。Fc段N-聚糖核心結(jié)構(gòu)可在酶作用下被修飾為不同的糖基化結(jié)構(gòu)，主要分為核心巖藻糖基化、末端唾液酸化、甘露糖基化等［30］。

Shields等［31］研究發(fā)現(xiàn)，相比于非巖藻糖基化的IgG，巖藻糖基化的Fc段所介導(dǎo)的ADCC效應(yīng)被降低100倍，而CDC活性無(wú)變化。另外，在重組Fc融合蛋白中，唾液酸的含量越高，同樣會(huì)導(dǎo)致Fc段與FcγRs的親和力降低，從而抑制ADCC活性［32］。然而，經(jīng)研究［33］發(fā)現(xiàn)，末端唾液酸化的IgG型抗體體內(nèi)半衰期被顯著延長(zhǎng)。因此，當(dāng)融合蛋白中Fc段僅起到延長(zhǎng)功能蛋白半衰期的作用時(shí)，可選擇巖藻糖基化、唾液酸化修飾，抑制Fc段的ADCC活性，減少不良反應(yīng)。然而，與唾液酸化恰好相反，甘露糖基化所具有的縮短半衰期和增強(qiáng)ADCC效應(yīng)的雙重屬性使其更適用于臨床急性感染的控制。甘露糖基化的融合蛋白在體內(nèi)清除病原體后，與肝臟巨噬細(xì)胞表面的甘露糖受體結(jié)合，被快速代謝，避免了藥物長(zhǎng)時(shí)間在體內(nèi)殘留可能出現(xiàn)的脫靶毒性［34］。如何精確地選擇并控制各種糖基化及其在Fc融合蛋白分子中所占比例，在藥效學(xué)與藥代動(dòng)力學(xué)之間達(dá)到最佳平衡，對(duì)其成藥性至關(guān)重要，是目前此類藥物開發(fā)中需要考慮的重要問(wèn)題。

2.3 Fc段的FcRn高親和力突變體良好的藥代動(dòng)力學(xué)特性是抗體類藥物相比于傳統(tǒng)藥物的一大優(yōu)勢(shì)。得益于Fc段與FcRn的結(jié)合保護(hù)作用，F(xiàn)c融合蛋白的半衰期較普通蛋白分子明顯改善，但仍不及IgG型全長(zhǎng)抗體（3周）［2］。因此，進(jìn)一步改善Fc融合蛋白的藥代動(dòng)力學(xué)也是其藥物開發(fā)重點(diǎn)關(guān)注的問(wèn)題。借助基因工程平臺(tái)技術(shù)，對(duì)融合蛋白的Fc段進(jìn)行氨基酸定點(diǎn)突變，改善Fc段與FcRn的親和力，可得到更為長(zhǎng)效穩(wěn)定的突變體。例如，阿斯利康制藥有限公司研制的呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）靶向抗體莫維珠單抗（motavizumab），其“YTE”突變體（M252Y/S254T/T256E）motavizumab-YTE， 在pH6.0時(shí)與FcRn的親和力較非突變體增強(qiáng)10倍，在健康人體內(nèi)半衰期可達(dá)100 d，約為非突變體的4 倍［35］。Motavizumab-YTE的265位谷氨酸（Glu， E）側(cè)鏈酸根基團(tuán)的氧原子與FcRn-Q2殘基側(cè)鏈的氨基之間形成穩(wěn)定的氫鍵；而254、252位分別突變?yōu)樘K氨酸（Thr， T）和酪氨酸（Tyr， Y）之后，引入了新的甲基和苯環(huán)，增強(qiáng)了Fc段與FcRn疏水殘基（L82、Y88、L112）的疏水相互作用。Zheng 等［36］將丁酰膽堿酯酶BChE（內(nèi)源性可卡因代謝酶）的突變體CocH3的1～529位與hIgG1-Fc段融合，在“YTE”突變的基礎(chǔ)上再進(jìn)行A530V/D671E/L673M突變，得到CocH3-Fc(M6)變體，與FcRn的親和力顯著增強(qiáng)。CocH3-Fc在小鼠體內(nèi)的半衰期約為4 d，而M6變體的半衰期長(zhǎng)達(dá)9 d。

3 重組Fc融合蛋白的應(yīng)用

3.1 Fc融合蛋白類藥物與傳統(tǒng)生物制劑相比，F(xiàn)c融合蛋白類藥物半衰期長(zhǎng)、特異性良好、靶點(diǎn)種類多、臨床應(yīng)用廣泛等優(yōu)勢(shì)已得到廣泛認(rèn)可［37］。1998年，F(xiàn)DA批準(zhǔn)了第1個(gè)Fc融合蛋白類藥物——依那西普，用于RA、強(qiáng)直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）的治療，療效顯著。目前，已有13種此類藥物被FDA批準(zhǔn)用于腫瘤、自身免疫性疾病、血液病、炎性疾病、移植排斥的治療（表1）［6］，還有大量藥物正處于臨床前或不同的臨床研究階段，涉及感染、藥物成癮等多個(gè)研究方向。

表1 已上市的重組Fc融合蛋白類藥物

3.1.1 VEGF受體拮抗劑血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是 一種高特異性的促血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，誘導(dǎo)新生血管形成，可分為A、B、C、D、E和PLGF 6種亞型。將VEGF-A、VEGF-B受體的胞外段通過(guò)TNT序列串聯(lián)后，與hIgG1-Fc的鉸鏈區(qū)N端融合形成的多特異性融合抗體阿柏西普（aflibercept， AFL）是VEGF受體拮抗劑。AFL與VEGF-A、VEGF-B、PLGF結(jié)合，阻斷這些因子與其內(nèi)源性受體的結(jié)合與活化，從而抑制新生血管形成，發(fā)揮直接的抗腫瘤活性。AFL還可用于治療新生血管引起的眼科疾病，給藥方式因患者疾病的不同而有差異，Zaltrap和Eylea這2種藥物中所含的AFL相同，但配比不同［38］。前者用于治療對(duì)含奧沙利鉑方案耐藥的轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌，后者則在2011年被FDA批準(zhǔn)用于治療wAMD和視網(wǎng)膜靜脈阻礙或糖尿病引起的黃斑水腫。

3.1.2 長(zhǎng)效GLP-1R激動(dòng)劑美國(guó)禮來(lái)公司研發(fā)的長(zhǎng)效胰高血糖素樣肽-1受體（glucagon like peptide-1 receptor，GLP-1R）激動(dòng)劑杜拉魯肽［39］由天然GLP-1突變體（A8G/A22E/R36G）以3段重復(fù)的GGGGS氨基酸序列為linker與hIgG4的Fc段的N端連接，單體再通過(guò)鉸鏈區(qū)鏈間二硫鍵形成二聚體（圖1）。GLP-1突變體彌補(bǔ)了天然GLP-1易被DPP-4降解失活的缺點(diǎn)，且活性與內(nèi)源性GLP-1相似，激活GLP-1R，以血糖依賴的方式促進(jìn)胰島β細(xì)胞分泌胰島素，并抑制胰島α細(xì)胞分泌胰高血糖素，維持血糖穩(wěn)定，避免了傳統(tǒng)降糖藥可能導(dǎo)致低血糖的風(fēng)險(xiǎn)，且體內(nèi)半衰期可延長(zhǎng)至5 d［40］。2014年9月，經(jīng)FDA批準(zhǔn)，杜拉魯肽皮下注射液正式上市，用于治療成人2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus， T2DM）。除單用形式外，杜拉魯肽還可與二甲雙胍、磺脲類、噻唑烷二酮或者膳食胰島素聯(lián)用，在有良好飲食計(jì)劃和定期體育鍛煉的患者中，藥效更優(yōu)。

圖1 杜拉魯肽示意圖

3.1.3 TPOR激動(dòng)劑Fc融合蛋白的功能分子大多在Fc段鉸鏈區(qū)的N端與其融合。但血小板生成素受體激動(dòng)劑羅米思亭（Nplate）的分子結(jié)構(gòu)（圖2）較為特殊，2個(gè)血小板生成素結(jié)合肽（thrombopoietin-binding peptide，TPBP）經(jīng)8個(gè)甘氨酸串聯(lián)形成多肽，再通過(guò)由5個(gè)甘氨酸組成的linker與Fc段CH3區(qū)域的C端融合［41］。TPBP的序列（IEGPTLRQWLAARA）不同于天然血小板生成素（thrombopoietin，TPO）的主要序列，是通過(guò)多種生物方法篩選而來(lái)的一段共同序列，與TPO競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合血小板生成素受體（TPOR）［42］， TPBP對(duì)TPOR的親和力高，可有效促進(jìn)巨核細(xì)胞的增殖和成熟［43］。2008年，F(xiàn)DA批準(zhǔn)羅米思亭用于慢性免疫性血小板減少性紫癜（immune thrombocytopenic purpura， ITP）治療。

圖2 羅米思亭示意圖

3.2 Fc融合蛋白在疫苗中的應(yīng)用抗原-Fc融合蛋白可特異性靶向APCs表面的FcRs，這一特性是其在疫苗領(lǐng)域中應(yīng)用的基礎(chǔ)。通過(guò)CH2-CH3結(jié)構(gòu)的鏈間二硫鍵可將單體Fc融合蛋白構(gòu)建為可攜帶12個(gè)抗原分子的六聚體，與APCs的受體交叉連接，提升抗原呈遞效率。Fc段與特定抗原融合已經(jīng)成為一種新型的黏膜疫苗接種策略，用于預(yù)防傳染性疾病［44］，例如流感（HA-HuFc）［45］、單純皰疹病毒（HSV，gD-Fc）［44］、結(jié)核病（ESAT6:HspX:Fc）［46］、 豬瘟病毒（E2-Fc）［47］。Zhang等［48］將RSV的F糖蛋白與IgG的Fc段融合形成六聚體F-Fc融合蛋白，以TLR4激動(dòng)劑單酰磷脂A(MPL)為佐劑聯(lián)合免疫小鼠，可減輕RSV感染后的肺部損傷。

3.3 靜脈免疫球蛋白療法Fc段的唾液酸殘基與抑制性非經(jīng)典FcγRs相互作用，如DC特異性細(xì)胞間黏附分子3-整合素（DC-SIGN）或鼠源同系物SIGN-R1、B細(xì)胞表面的CD22（Siglec-2），誘導(dǎo)APCs表達(dá)FcγRIIB，抑制APCs的抗原呈遞功 能［49］，介導(dǎo)IVIG的抑制作用。Fc結(jié)構(gòu)域的CH2結(jié)構(gòu)域存在混雜的致耐受性表位，有學(xué)者［50］提議將其命名為“Tregitopes”，其中一些Tregitopes與FcγR、FcRn的結(jié)合位點(diǎn)存在交疊。降解后的IgGFc經(jīng)MHC-Ⅱ類分子處理并呈遞后，限制性活化Treg細(xì)胞。這一結(jié)果與IgG-Fc參與誘導(dǎo)耐受性的多重機(jī)制的理論相符合。總之，包括FcγR依賴型、非依賴型在內(nèi)的多重作用機(jī)制，通過(guò)Fc結(jié)構(gòu)域的耐受性誘導(dǎo)活性，介導(dǎo)IVIG的抗炎活性。

3.4 非臨床應(yīng)用隨著Fc融合蛋白臨床應(yīng)用的快速發(fā)展，其非臨床應(yīng)用也受到了廣泛關(guān)注，如流式細(xì)胞術(shù)、免疫組化、蛋白質(zhì)芯片設(shè)備等［51］。哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)存在一些難以表達(dá)的蛋白質(zhì)，可將其與IgG3的Fc段融合形成構(gòu)建體，增強(qiáng)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，達(dá)到穩(wěn)定生產(chǎn)的目的［52］。在蛋白質(zhì)微陣列應(yīng)用中，F(xiàn)c融合蛋白被整合到具有支架的多價(jià)絡(luò)合物中，例如Protein-G/A微珠，作為鑒別新型低親和力蛋白質(zhì)相互作用的高通量方法，彌補(bǔ)了質(zhì)譜和酵母雙雜交技術(shù)無(wú)法檢測(cè)低親和力結(jié)合現(xiàn)象的 缺陷。

綜上所述，重組Fc融合蛋白具有更精準(zhǔn)的靶向性，特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性良好。然而僅將天然的功能蛋白與Fc段融合已不能滿足各種復(fù)雜疾病的臨床治療需求。重組Fc融合蛋白類藥物的開發(fā)可合理應(yīng)用合成生物學(xué)技術(shù)，改善天然位點(diǎn)，開發(fā)全人造抗原結(jié)合位點(diǎn)，對(duì)Fc段進(jìn)行定點(diǎn)突變、糖基化、脫酰胺化改造，以期望得到藥效學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)優(yōu)異且不良反應(yīng)少的重組Fc融合蛋白類藥物。另外，以融合蛋白為基礎(chǔ)的CAR-T細(xì)胞免疫療法、雙特異性抗體以及多價(jià)、多特異性抗體的迅速發(fā)展更是為腫瘤、自身免疫性疾病、重癥感染等臨床疾病提供了新的治療措施與方向。

利益沖突：所有作者聲明不存在利益沖突。