蘋果中啶蟲脒殘留量快檢測定及方法評估

◎ 張健偉，高 華，牛貴洋，譚慧林

（阿克蘇地區食品安全檢測中心，新疆 阿克蘇 843000）

啶蟲脒別名吡蟲清，是一類新煙堿類高效殺蟲劑，因具有廣譜、內吸、速效、低毒、活性高、用量少和持效期長等特性，在全球范圍內應用廣泛[1-2]。此類殺蟲劑在瓜果蔬菜等農作物中使用范圍廣，其在水體和土壤中的積累量逐年增加。常見的檢測啶蟲脒的方法包括超高液相色譜-串聯質譜法[3]、氣相色譜法[4]、超高效液相色譜法[5]等。此類方法選擇性好、靈敏度及準確度高，但操作復雜，耗時較長。而快檢技術的可操作性較強，能在短時間內快速出具檢驗結果。

本研究以《水果、蔬菜中啶蟲脒殘留的測定 液相色譜-串聯質譜法》（GB/T 23584—2009）為參比方法，根據《食品快速檢測方法評價技術規范》，對快速檢測試劑盒產品進行適用性評估，對3家公司生產的啶蟲脒快檢試劑盒的特異性、靈敏度、假陰性率及假陽性率等相關指標進行評價，為蘋果中啶蟲脒的快速篩查工作提供技術借鑒。

1 材料與方法

1.1 材料

蘋果樣品，均采購自阿克蘇市銷售場所的地產蘋果；啶蟲脒標準物質（濃度為100 μg·mL-1）；甲醇；甲酸；乙腈；乙酸；啶蟲脒快檢試劑盒，均采用競爭法免疫膠體金檢測技術，為避免評價結果成為廠家的宣傳工具，簡稱為試劑盒1、試劑盒2、試劑盒3。

1.2 試劑與儀器

Waters UPLC/TQD液相色譜-質譜儀；電子天平；高速勻漿機；渦旋儀；振蕩器；超聲波清洗器。

1.3 方法

1.3.1 樣品制備

取蘋果樣品2.5 kg經縮分后將其切碎，充分混勻后粉碎，制成待測樣，放入分裝容器中，于-20 ℃下保存，實驗備用。

1.3.2 液相色譜-質譜法測定

按照《水果、蔬菜中啶蟲脒殘留的測定 液相色譜-串聯質譜法》（GB/T 23584—2009）對待測樣品進行提取、凈化，并采用配有電噴霧電離源的液相色譜-質譜儀進行啶蟲脒含量的測定。檢測條件：流動相A為甲醇、B為0.1%的甲酸水溶液；流速0.30 mL·min-1；柱溫 40 ℃；進樣量 10 μL。

1.3.3 快檢試劑盒測定

（1）試劑盒1。稱取（1±0.1）g待測樣本表皮于樣品杯中（1 cm2左右，切勿將表皮切太碎，以免影響檢測結果），加入2 mL配套啶蟲脒稀釋液，手搖混勻（禁止劇烈振蕩），放置于水平實驗臺上，充分提取5 min，此樣品杯內混合液體即為前處理液。從包裝袋中取出檢測卡，水平放置于桌面上，取450 μL啶蟲脒稀釋液到1.5 mL離心管中，加入前處理液50 μL混勻，再取540 μL啶蟲脒稀釋液到1.5 mL離心管中，然后依次加入前處理待測液60 μL混勻此液體即為待測液。用移液器吸取80 μL的待測液，垂直緩慢地滴加到檢測卡加樣孔中，液體流動時開始計時，反應5～6 min，根據示意圖判定結果，其他時間判定無效。

（2）試劑盒2。沖洗掉樣品表面的泥土，剪成1 cm2左右的碎片，稱取1.0 g于30 mL透明瓶中，加入5 mL啶蟲脒提取液，上下翻轉振蕩搖勻50次以上，靜置2 min，待測。使用前將檢測卡和待測樣本溶液恢復至室溫。從包裝袋中取出試紙條，水平放置，用移液槍移取100 μL待測液于微孔中，反復吹打3～5次，混合均勻，靜置3 min，用一次性吸管將微孔待測液滴于加樣孔中，加樣后開始計時，5～8 min即可觀察結果，超過8 min后判讀無效。

（3）試劑盒3。稱取1 g待測樣品于5 mL刻度離心管中，加入1 mL啶蟲脒稀釋液，充分振蕩混勻2 min。使用前將檢測卡和待測樣本溶液恢復至室溫。從包裝袋中取出金標微孔，垂直加入4滴待測液，2 min后用滴管將微孔中的待測液混勻。從包裝袋中取出檢測卡，將檢測卡平放，用一次性吸管將微孔待測液全部滴加到檢測卡加樣孔中，加樣后開始計時，8～10 min即可觀察結果，10 min后判讀無效。

1.4 數據處理

依據《食品快速檢測方法評價技術規范》計算實驗所用試劑盒的靈敏度、特異性、假陰性率、假陽性率、顯著性差異和相對準確度，使用Mcirosoft Excel 2010對數據進行整理分析。

2 結果與分析

2.1 蘋果中啶蟲脒農藥殘留的測定結果

參考《水果、蔬菜中啶蟲脒殘留的測定 液相色譜-串聯質譜法》（GB/T 23584—2009）對樣品進行啶蟲脒殘留的測定，結果顯示未檢出，說明在市場銷售環節的蘋果沒有啶蟲脒殘留。

采用3個不同公司生產的快檢試劑盒對阿克蘇市市面銷售的蘋果樣品進行啶蟲脒殘留量的檢測。結果顯示，3種啶蟲脒快檢試劑盒檢測結果均為陰性，該結果與啶蟲脒國家標準檢測方法結果一致。

2.2 快檢試劑盒的評估

2.2.1 試劑盒1的適應性評估

用空白作為陰性對照，將檢測卡平放在桌面上，吸取啶蟲脒待測液，緩慢滴加80 μL（約3滴）于加樣孔中，開始計時，在5～6 min時讀取結果。樣品進行加標，濃度梯度分別為 0 mg·kg-1、0.25 mg·kg-1、0.30 mg·kg-1、0.50 mg·kg-1和 1.00 mg·kg-1。此試劑盒的檢出限為0.5 mg·kg-1，≥0.5 mg·kg-1為陽性樣品，＜0.5 mg·kg-1為陰性樣品，對同一濃度樣品進行10次檢驗。

由表1可知，通過對蘋果樣品添加系列啶蟲脒標準溶液，試劑盒的檢出限為0.5 mg·kg-1，樣品在0.3 mg·kg-1時就開始顯色。依據《食品快速檢測方法評價技術規范》計算此試劑盒的假陽性率、假陰性率、靈敏度、特異性和顯著性差異，此試劑盒靈敏度100%，特異性66.67%，假陰性率0，假陽性率33.33%，顯著性差異8.1，相對準確度80%。

表1 試劑盒1蘋果中添加啶蟲脒的顯色情況表

2.2.2 試劑盒2的適應性評估

以空白作為對陰性對照，用移液槍移取100 μL待測液于微孔中，反復吹打3～5次。混合均勻，靜置3 min，用一次性吸管將微孔待測液滴于加樣孔中，加樣后開始計時，5～8 min后觀察結果。樣品進行加標，濃度梯度分別為 0 mg·kg-1、0.1 mg·kg-1、0.2 mg·kg-1、0.4 mg·kg-1和 1.0 mg·kg-1。 此 試 劑 盒 的 檢 出 限 為0.2 mg·kg-1，≥ 0.2 mg·kg-1即為陽性樣品。對同一濃度進行10次檢驗。

由表2可知，通過對蘋果樣品添加系列啶蟲脒標準溶液，試劑盒的檢出限為0.2 mg·kg-1，樣品在0.2 mg·kg-1開始顯色。依據《食品快速檢測方法評價技術規范》計算此試劑盒的假陽性率、假陰性率、靈敏度、特異性和顯著性差異，結果為此試劑盒的假陽性率0、假陰性率0、靈敏度100%、特異性100%、顯著性差異0及相對準確度為100%。

表2 試劑盒2蘋果中添加啶蟲脒的顯色情況表

2.2.3 試劑盒3的適應性評估

以空白作為陰性對照，從包裝袋中取出檢測卡，將檢測卡平放，用一次性吸管垂直滴加3滴于加樣孔中，加樣后開始計時，10 min可觀察結果。樣品進行加標，濃度梯度分別為 0 mg·kg-1、0.25 mg·kg-1、0.50 mg·kg-1、0.80 mg·kg-1和 1.00 mg·kg-1。此試劑盒的檢出限為0.5 mg·kg-1，≥0.5 mg·kg-1為陽性樣品，＜0.5 mg·kg-1為陰性樣品，對同一濃度樣品進行10次檢驗。

由表3可知，試劑盒的檢出限為0.5 mg·kg-1，樣品在0.25 mg·kg-1時開始顯色，依據《食品快速檢測方法評價技術規范》計算此試劑盒的假陽性率、假陰性率、靈敏度、特異性及顯著性差異，結果為假陽性率50%、假陰性率0、靈敏度100%、特異性50%、顯著性差異8.1及相對準確度80%。

表3 試劑盒3蘋果中添加啶蟲脒的顯色情況表

3 結論與討論

通過采用啶蟲脒的國家標準檢測方法和啶蟲脒的的快檢試劑盒對阿克蘇市售蘋果樣品進行檢測，檢測結果均為未檢出。對蘋果樣品添加不同濃度的啶蟲脒標準物質，以試劑盒的檢出限區分陰性樣品、陽性樣品，按《食品快速檢測方法評價技術規范》評估啶蟲脒快檢試劑盒的靈敏度、特異性、假陰性率、假陽性率、顯著性差異和相對準確度，結果表明試劑盒2的相對準確度較高，靈敏度、特異性較強。

根據《食品安全國家標準 食品中農藥最大殘留限量》（GB 2763—2021），啶蟲脒在蘋果中的限量要求是0.8 mg·kg-1，試劑盒1及試劑盒2的檢出限為0.2 mg·kg-1，試劑盒 3 的檢出限為 0.5 mg·kg-1，3 種試劑盒的檢出限均在國家標準要求之下，且3種試劑盒在檢出限以上均呈陽性，因此此3種啶蟲脒快檢試劑盒均適用于開展蘋果中啶蟲脒的快速篩查。