肝星狀細胞SCAP特異性敲除對小鼠肝纖維化的影響*

侯曉俐， 饒雨涵， 姚盈程， 蘇玉， 李丹陽， 陳壓西

肝星狀細胞特異性敲除對小鼠肝纖維化的影響*

侯曉俐， 饒雨涵， 姚盈程， 蘇玉， 李丹陽△， 陳壓西△

（重慶醫科大學脂糖代謝性疾病重慶市重點實驗室，脂質研究中心，重慶 400016）

探討固醇調節元件結合蛋白裂解活化蛋白（SCAP）在肝星狀細胞中缺失能否延緩小鼠肝纖維化進程。將loxP/loxP小鼠與Lrat-Cre工具鼠繁殖得到Lrat-Cre+/+fl/fl、Lrat-Cre+/-fl/fl和Lrat-Cre-/-fl/fl鼠，并用PCR法對小鼠基因型進行鑒定。選取4～6周齡Lrat-Cre-/-fl/fl小鼠（雄性，=8）作為對照（Con）組，Lrat-Cre+/+fl/fl和Lrat-Cre+/-fl/fl小鼠（雄性，=8）作為實驗（-/-）組，均給予高脂飲食16周。稱量小鼠肝重和體重，計算肝指數；檢測血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、丙氨酸轉氨酶（ALT）和天冬氨酸轉氨酶（AST）水平；蘇木精-伊紅（HE）染色觀察肝臟形態，油紅O染色觀察肝臟脂質積聚，天狼星紅染色評估肝臟纖維化程度；RT-qPCR和Western blot檢測小鼠肝組織中TGF-β/Smad信號通路相關mRNA及蛋白表達。小鼠基因型鑒定結果與預期一致。提取兩組小鼠原代肝星狀細胞，RT-qPCR結果顯示-/-小鼠肝星狀細胞中SCAPmRNA表達顯著降低（<0.01），免疫熒光染色顯示-/-小鼠肝星狀細胞中SCAP不表達，表明-/-小鼠模型建立成功。與Con組相比，高脂飲食喂養的-/-組小鼠體重（<0.01）和肝重（<0.05）顯著降低，但肝指數無顯著差異；血清中TC水平顯著降低（<0.05），TG、AST和ALT水平無顯著差異；HE及油紅O染色結果顯示小鼠肝臟脂肪變性和脂質積聚無顯著差異；天狼星紅染色顯示肝臟纖維化程度減輕（0.05）；Smad2（<0.05）和Smad3（0.01）的mRNA表達顯著降低；Smad2/3和p-Smad2/3蛋白水平顯著降低（<0.05）。肝星狀細胞中缺失可延緩小鼠肝纖維化發展的進程，并與TGF-β/Smad信號通路有關。

固醇調節元件結合蛋白裂解活化蛋白；肝星狀細胞；肝纖維化；TGF-β/Smad信號通路

肝纖維化是肝臟的各種慢性損傷反復刺激肝臟后引起細胞外基質（extracellular matrix，ECM）過度沉積及纖維瘢痕形成的一種病理過程。持續發展的肝纖維化可導致肝硬化甚至肝癌。肝纖維化的主要原因包括病毒感染、酗酒和非酒精性脂肪性肝炎（nonalcoholic steatohepatitis，NASH），目前NASH來源的肝纖維化越來越常見［1］。

肝星狀細胞的激活是肝纖維化發生的驅動因素。正常肝臟中的肝星狀細胞位于Disse間隙，處于靜止狀態［2］。當各種急、慢性損傷刺激肝臟內免疫細胞釋放炎癥因子時，肝星狀細胞活化為肌成纖維細胞［3］，分泌大量ECM，ECM在肝內過量積聚，肝臟的正常結構被破壞，肝臟發生纖維化。轉化生長因子β（transforming growth factor-β，TGF-β）是一種主要的促纖維化細胞因子，可以刺激成纖維細胞大量增殖，促進膠原和彈性蛋白的形成，導致纖維化的發生［4-5］。活化的TGF-β可以激活TGF-β/Smad信號通路，引起Smad2/3磷酸化，觸發下游因子的轉錄，驅動肝星狀細胞激活并誘導纖維化反應［6］。

固醇調節元件結合蛋白（sterol regulatory element-binding protein，SREBP）裂解活化蛋白（SREBP cleavage-activating protein，SCAP）主要調節體內甘油三酯和膽固醇水平［7］。SCAP是一種內質網（endoplasmic reticulum，ER）固醇敏感蛋白，伴隨SREBP-1和SREBP-2從ER到高爾基體，通過影響低密度脂蛋白（low-density lipoprotein，LDL）受體和3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶調節細胞內膽固醇水平［8-9］。本課題組前期的研究表明，平滑肌細胞中過表達SCAP可以增加炎癥小體的激活，使脂質積聚，加速動脈粥樣硬化的發生發展［10］。肝星狀細胞活化成的肌成纖維細胞，與平滑肌細胞有相似的表型。但是肝星狀細胞的脂質代謝在肝纖維化中的作用尚不清楚。卵磷脂-視黃醇酰基轉移酶（lecithin-retinol acyltransferase，Lrat）驅動的Cre（Lrat-Cre）轉基因小鼠常被用于肝星狀細胞相關功能的研究［11］。本課題通過構建肝星狀細胞特異性敲除轉基因小鼠NASH模型，評估各組小鼠肝臟SCAP表達水平、肝臟脂質集聚情況、肝纖維化程度及TGF-β表達水平，探索肝星狀細胞中SCAP在肝纖維化發生中的作用，為進一步研究抗肝纖維化提供新的思路。

材料和方法

1　材料

高脂飼料（Research Diets，D12109C）；高糖DMEM培養液（HyClone）；油紅O染色試劑盒、蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色試劑盒和天狼星紅染色試劑盒（北京索萊寶科技有限公司）；Hanks平衡液、Triton X-100、DEPC水、RIPA裂解液和紅細胞裂解液（碧云天生物技術公司）；Ⅳ型膠原酶（Sigma）；兔抗GAPDH、TGF-β和α-平滑肌肌動蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）抗體（Proteintech）；SCAP抗體（Abcam）；Smad2/Smad3抗體和p-Smad2/Smad3抗體（Cell Signaling Technology）；SCAP熒光I抗（Santa Cruz）；熒光Ⅱ抗（北京中杉金橋生物技術有限公司）；DAPI染色液（Genview）；丙氨酸轉氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、天冬氨酸轉氨酶（aspartate aminotransferase，AST）、總膽固醇（total cholesterol，TC）和甘油三酯（triglyceride，TG）試劑盒（南京建成公司）；牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）和Tween 20（生工生物工程有限公司）；逆轉錄試劑盒和SYBR Green（TaKaRa）；引物（北京擎科生物科技有限公司）；BCA試劑盒和100 bp DNA marker（北京鼎國昌盛生物技術有限責任公司）。激光共聚焦顯微鏡（Leica）；熒光定量PCR儀、電泳儀和電轉儀（Bio-Rad）。

2　主要方法

2.1肝星狀細胞特異性基因敲除小鼠的繁殖所有小鼠為C57BL/6遺傳背景。Lrat-Cre工具鼠購自上海南方模式生物科技有限公司。loxP/loxP小鼠購自Jackson實驗室。loxP/loxP小鼠與Lrat-Cre+/+小鼠交配，得到Lrat-Cre+/-fl/+小鼠。Lrat-Cre+/-fl/+小鼠之間自交，得到Lrat-Cre+/+fl/fl和Lrat-Cre+/-fl/fl小鼠，即為肝星狀細胞特異性敲除（-/-）小鼠。選取Lrat-Cre-/-fl/fl小鼠（雄性，=8）作為對照（control，Con）組，肝星狀細胞特異性-/-小鼠（雄性，=8）為實驗（-/-）組，均喂高脂飲食16周。

2.2小鼠基因型鑒定通過PCR法鑒定小鼠基因型。取小鼠尾部組織，加入50 μL組織裂解液（25 mmol/L NaOH和0.2 mmol/L EDTA），剪碎組織，金屬水浴鍋100 ℃水浴1 h，冷卻后加入50 μL裂解終止液（40 mmol/L Tris-HCl），混勻，常溫12 000×離心3 min，提取上清液用于PCR鑒定，瓊脂糖凝膠電泳分離PCR產物［12］。PCR引物序列見表1。

表1　基因型鑒定引物信息

2.3原代肝星狀細胞提取選取普通飲食喂養小鼠，禁食不禁水12 h，腹腔注射肝素鈉，10 min后用戊巴比妥麻醉。將麻醉后小鼠固定于解剖臺上，消毒剪后開皮膚至頸部，向兩側鈍性分離，固定并暴露整個腹部。用鑷子輕挑外腹膜，剪開向上剪至胸骨下，暴露肝臟。撥開腸道，暴露下腔靜脈，平行插入留置針，用蠕動泵將Hanks液以4 mL/min的速度灌入下腔靜脈，液體進入后馬上剪開門靜脈，使灌注液從下腔靜脈流入，門靜脈流出，直至整個肝臟變成淡白色。關掉蠕動泵，將吸液管換在Ⅳ型膠原酶溶液中，繼續灌注，直至肝臟纖維支架完全消化，壓之不回彈。分離肝臟，去除膽囊，將肝臟轉移到裝有Ⅳ型膠原酶溶液培養皿中。去除肝臟包膜，將肝臟破碎成單個細胞，細胞團塊懸浮液，在體外用預加熱的Ⅳ型膠原酶溶液在37 ℃恒溫水浴箱進一步消化20 min。將懸浮液用70 μm細胞濾網過濾，然后4 ℃、580×離心10 min，棄上清液留下沉淀，用Hanks液清洗沉淀，離心棄上清液。紅細胞裂解液裂解5 min，高糖DMEM培養液重懸，用25% Percoll和100% Percoll梯度離心分離，4 ℃、1 380×離心15 min。吸取中間層的肝星狀細胞細胞，4 ℃、580×離心10 min，沉淀為肝星狀細胞，重懸后放入孵箱培養［13］。

表2 RT-qPCR引物序列

SCAP： sterol regulatory element-binding protein cleavage-activating protein； TGF-β： transforming growth factor-β； Col-I： collagen type I； Col-IV： collagen type IV.

2.4標本處理和指標檢測高脂飲食喂食16周后，禁食不禁水12 h，麻醉后稱量體重，眼球取血。分離肝臟標本，稱取肝重。用試劑盒說明方法檢測血清脂質指標TC和TG，以及肝功能指標ALT和AST。肝指數（%）=肝重（g）/體重（g）×100%。

2.5組織總蛋白提取和Western blot分析稱取高脂飲食喂養16周的小鼠肝臟組織（20 mg）置于EP管中，加入500 μL組織裂解液（含蛋白酶和磷酸酶抑制劑）勻漿2～3次，上清液轉移到新1.5 mL離心管，4 ℃旋轉裂解30 min，然后4 ℃、12 000×離心15 min，取上清液轉入新1.5 mL離心管并用BCA試劑盒進行蛋白定量。每組蛋白取100～200 μg，加入蛋白上樣緩沖液，100 ℃孵育10 min。進行SDS-PAGE（濃縮膠恒壓80 V，30 min；分離膠恒壓110 V，1～1.5 h），轉膜（恒流250 mA），3% BSA室溫封閉1 h，Ⅰ抗4 ℃過夜；TBST洗膜3次，每次10 min；加入Ⅱ抗，室溫1 h，TBST洗膜3次，每次10 min，ECL顯影，用ImageJ軟件進行灰度分析。

2.6肝臟組織HE及油紅O染色取肝臟組織石蠟切片，HE染色觀察肝臟組織結構。取肝臟的冰凍切片，油紅O染色觀察脂質積聚，脂滴呈紅色。

2.7組織RNA提取及RT-qPCR取20 mg小鼠肝組織放入1.5 mL勻漿管中，加入500 μL Trizol，按照常規方法提取RNA，用反轉錄試劑盒合成cDNA，定量PCR檢測基因mRNA表達，以GAPDH為內參照，采用2-ΔΔCt法計算目的基因mRNA的相對表達量。

2.8細胞免疫熒光染色用PBS清洗細胞3次，4%的多聚甲醛固定30 min，PBST清洗3次，用Triton X-100打孔15 min，PBST洗3次，3% BSA封閉1 h，加入Ⅰ抗4 ℃過夜。PBST洗3次，加入熒光Ⅱ抗，避光37 ℃孵育1 h后，用PBST清洗3次。然后用DAPI染細胞核6 min，抗熒光淬滅劑封片后避光拍照。

3　統計學處理

使用GraphPad Prism 8.0統計分析結果。實驗結果用均數±標準差（mean±SD）表示。多組間均數比較用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-檢驗。以<0.05為差異有統計學意義。

結果

1　肝星狀細胞特異性SCAP敲除小鼠的構建流程和基因型鑒定

將loxP/loxP小鼠與Lrat-Cre工具鼠交配繁殖，得到Lrat-Cre+/-fl/+小鼠，再使Lrat-Cre+/-fl/+小鼠之間自交（圖1A）。用PCR法對小鼠基因型進行鑒定（圖1B）。野生型（+/+）基因產物為400 bp，敲除打靶位點（fl/fl）基因產物為450 bp。P1P2無條帶，P3P4有246 bp條帶記為Lrat-Cre陽性純合子（Lrat-Cre+/+）；P1P2有700 bp條帶，P3P4有246 bp條帶記為Lrat-Cre陽性雜合子（Lrat-Cre+/-）；P1P2有700 bp條帶，P3P4無條帶記為Lrat-Cre陰性（Lrat-Cre-/-）。通過基因型鑒定結果選取Lrat-Cre+/+fl/fl和Lrat-Cre+/-fl/fl基因型小鼠作為-/-組小鼠，Lrat-Cre-/-fl/fl基因型小鼠作為Con組小鼠。

Figure 1.Construction process （A） and genotyping （B） of hepatic stellate cell-specific SCAP conditional knockout mouse model. The mouse model was constructed，and the mouse genotype was identified by agarosegel electrophoresis. The Lrat-Cre+/+SCAPfl/fl and Lrat-Cre+/-SCAPfl/fl mice served as experimental （SCAP-/-） group，while the Lrat-Cre-/-SCAPfl/fl mice served as control （Con） group. M： DNA marker.

2　肝星狀細胞特異性SCAP敲除小鼠的鑒定

在小鼠肝組織中，RT-qPCR檢測Con組小鼠與-/-小鼠SCAP mRNA表達，可見-/-小鼠肝臟中SCAP mRNA表達水平有降低趨勢，但差異無統計學意義（圖2A）。Western blot法檢測小鼠肝組織中SCAP蛋白表達，-/-小鼠中SCAP蛋白表達變化不大（圖2C）。進一步我們提取了小鼠原代肝星狀細胞，檢測了SCAP的mRNA水平，RT-qPCR結果顯示-/-小鼠原代肝星狀細胞中SCAP的mRNA表達顯著下降（0.05），見圖2B。我們用免疫熒光驗證的敲除效果，α-SMA是常用的肝星狀細胞激活標志物，在此我們標記為紅色熒光；SCAP標記為綠色熒光；細胞核常用DAPI染色標記為藍色熒光。結果顯示，兩組細胞均表達α-SMA（紅色熒光陽性細胞），提示肝星狀細胞的提取、純化成功。同時，Con組中肝星狀細胞可見明顯的SCAP表達（綠色熒光陽性染色），而SCAP小鼠肝星狀細胞中不表達SCAP（無綠色熒光陽性染色），見圖2D。這些數據表明肝星狀細胞特異性SCAP小鼠模型建立成功。

Figure 2.Verification of SCAP conditional knockout in mouse hepatic stellate cells （HSC）. A and B： the mRNA expression of SCAP in liver tissues （A） and primary HSC （B） was detected by RT-qPCR； C： the protein expression of SCAP in liver tissues was detected by Western blot； D： the expression of SCAP in primary HSC was detected by immunofluorescence staining （scale bar=100 μm； α-SMA： red； SCAP： green； DAPI： blue）. Mean±SD. n=5. *P<0.05 vs control （Con） group.

3　肝星狀細胞特異性SCAP敲除對小鼠肝重、肝指數及肝功能的影響

與Con組相比，高脂飲食喂養后，-/-小鼠體重（0.01）和肝重（0.05）均顯著降低，但肝指數無顯著變化（表3）。小鼠血清TC水平顯著降低（0.05），而TG、AST和ALT水平無顯著差異（表4）。

*<0.05，**<0.01control （Con） group.

表4　兩組小鼠血清相關指標

AST： aspartate aminotransferase； ALT： alanine aminotransferase； TC： total cholesterol； TG： triglyceride.*<0.05，**<0.01control （Con） group.

4　肝星狀細胞特異性SCAP敲除對肝臟形態、脂質集聚及纖維化程度的影響

HE染色可見，高脂飲食喂養16周后，Con組小鼠肝臟結構紊亂，可見彌漫性肝細胞大泡或小泡性的脂肪變性，而-/-小鼠肝細胞內的脂肪變性無顯著減少；肝臟油紅O染色顯示，兩組小鼠脂質積聚變化無顯著差異；天狼星紅染色顯示，-/-小鼠纖維化程度顯著減輕，見圖3A。RT-qPCR結果顯示，-/-小鼠肝臟中Ⅰ型膠原蛋白（collagen type I，Col-I）和Ⅳ型膠原蛋白（collagen type IV，Col-IV）的mRNA水平顯著降低（0.01），見圖3B。

Figure 3.Pathological changes of the liver （A） and the mRNA expression of liver fibrosis markers （B） in SCAP knockout mice. The morphological changes of liver tissues were observed by HE staining （scale bar=100 μm），the lipid aggregation was detected by oil red O staining （scale bar=200 μm），and the liver fibrosis was detected by Sirius red staining （scale bar=100 μm）. The mRNA expression of liver fibrosis markers collagen type I （Col-I） and collagen type IV （Col-IV） was detected by RT-qPCR. Mean±SD. n=5. *P<0.05，*P<0.01 vs control （Con） group.

5　肝星狀細胞特異性SCAP敲除對肝組織中TGF-β/Smad通路的影響

RT-qPCR結果顯示，與Con組相比，-/-小鼠肝組織TGF-β mRNA水平輕度降低，但Smad2（0.05）和Smad3（0.01）的mRNA水平顯著下降，見圖4A。Western blot結果顯示，高脂飲食喂養后，-/-小鼠TGF-β蛋白表達輕度降低，Smad2/3和p-Smad2/3蛋白水平顯著降低（0.01），見圖4B。

Figure 4.Effects of SCAP knockout on TGF-β/Smad signaling pathway. A： the mRNA expression of TGF-β，Smad2 and Smad3 in mouse liver tissues was detected by RT-qPCR； B： the protein levels of TGF-β，Smad2/3 and p-Smad2/3 in mouse liver tissues were detected by Western blot. Mean±SD. n=5. *P<0.05，**P<0.01 vs control （Con） group.

討論

肝纖維化是一種常見的持續肝損傷的病理表現，是慢性肝病進展到肝硬化或肝癌的必經階段，目前尚無有效的治療藥物。作為肝纖維化發生的重要病因之一，非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）的患病率越來越高，尤其是在肥胖人群和糖尿病患者中，患病率可高達70%～90%［14］。“二次打擊”學說是NAFLD的機制假說之一，其認為脂質在肝細胞聚集（第1次打擊）后觸發一系列細胞毒素反應（第2次打擊），導致肝損傷［15］。越來越多的研究證明，膽固醇穩態改變和肝臟游離膽固醇的積聚與NASH發病機制有關［16-17］，在NAFLD患者中，NASH和纖維化的發展與肝臟游離膽固醇積聚呈正相關關系［18］，并且膽固醇合成的主要轉錄因子SREBP1、SREBP2及其伴侶蛋白SCAP的表達是明顯上調的［19］。抑制SCAP可阻止SREBPs的激活以及脂肪酸和膽固醇合成所需基因的表達，從而抑制脂肪酸的從頭合成［20-21］。

目前，關于SCAP在NAFLD和NASH發生發展中的作用已有研究［21-22］，但在肝纖維化發生發展的作用研究較少。肝細胞特異性缺失可以減輕/小鼠的肝脂肪變性［23］。有研究表明，肝星狀細胞中游離膽固醇的積聚可以加速NASH小鼠的肝纖維化進程［24］。SCAP是膽固醇敏感器，肝星狀細胞的激活是肝纖維化發生的中心環節，尚無詳細的研究表明肝纖維化與肝星狀細胞中SCAP的作用。本課題組首次關注了肝星狀細胞中的SCAP在肝纖維化過程中的作用，并建立了肝星狀細胞特異性缺失小鼠，通過喂食高脂飲食16周構建NASH模型。我們的研究結果顯示，兩組小鼠均出現NASH表型，與Con組相比，肝星狀細胞特異性-/-小鼠TC水平顯著降低，組織學染色顯示纖維化程度顯著降低，表明肝星狀細胞中缺失可以延緩肝纖維化的進展。

TGF-β是肝纖維化的關鍵激活因子，可上調ECM相關蛋白的合成和多種基質蛋白的細胞受體［25］，與肝星狀細胞的激活密切相關，并且在組織纖維化中參與炎癥細胞浸潤、細胞生長、細胞凋亡等過程［26-27］。TGF-β與細胞表面的TGF-β受體結合后，激活下游Smad家族中的Smad2和Smad3，導致Smad2和Smad3磷酸化，Smad2/3復合物與Smad4結合并移位至細胞核以調節靶基因的表達［28-29］。進一步的研究顯示肝纖維化發展的過程中，TGF-β/Smad信號通路激活，Smad2/3的表達逐漸增加，肝星狀細胞隨之活化［27］。我們的研究也表明，在NASH進展到肝纖維化的過程中，TGF-β/Smad通路被激活，肝星狀細胞中缺失后，TGF-β/Smad通路被抑制，Smad2和Smad3 mRNA水平顯著下降，Smad2/3和p-Smad2/3蛋白水平顯著降低。有研究表明，在糖尿病腎病中，SREBP-1a可以調節Smad3轉錄活性從而調節纖維化的發生［30］。我們認為，SCAP作為SREBP的伴侶蛋白，缺失后SREBP入核減少，抑制了Smad2/3的轉錄，進而降低了Smad2/3的表達和磷酸化，減輕了小鼠肝臟纖維化，但具體的機制尚未做進一步研究。

綜上所述，肝星狀細胞中的缺失可以通過抑制TGF-β/Smad通路的激活來降低肝星狀細胞的活化，延緩肝纖維化發生。這初步揭示了肝星狀細胞中的SCAP在肝纖維化中的作用，為抗纖維化的治療提供了參考資料。

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Effects of hepatic stellate cell-specific deletion ofon hepatic fibrosis in mice

HOU Xiao-Li，RAO Yu-han，YAO Ying-cheng，SU Yu，LI Dan-yang△，CHEN Ya-xi△

（，，，400016，）

To investigate whether sterol regulatory element-binding protein cleavage-activating protein （SCAP） deletion in hepatic stellate cells attenuates the progression of liver fibrosis in mice.TheloxP/loxPmice were bred with Lrat-Cre tool mice to obtain Lrat-Cre+/+fl/fl，Lrat-Cre+/-fl/fland Lrat-Cre-/-SCAPfl/flmice，and the genotypes of the mice were identified by PCR. The Lrat-Cre-/-fl/flmice aged 4 to 6 weeks （male，=8） were selected as control （Con） group，while the Lrat-Cre+/+fl/fland Lrat-Cre+/-fl/flmice （male，=8） served as experimental （-/-） group. The mice in both groups were fed with high-fat diet for 16 weeks. The liver weight and body weight of the mice were measured，and the liver index was calculated. The serum was collected，and the levels of total cholesterol （TC），triglycerides （TG），alanine aminotransferase （ALT） and aspartate aminotransferase （AST） were recorded. Hematoxylin-eosin （HE） staining was used to observe the morphological changes of liver tissues，oil red O staining was used to observe the lipid accumulation，and Sirius red staining was used to evaluate the fibrosis of the liver. The TGF-β/Smad mRNA and protein levels in liver tissues were determined by RT-qPCR and Western blot，respectively.The results of genotype identification were the same as expected. The results of RT-qPCR showed that the mRNA expression of SCAP in primary hepatic stellate cells extracted from-/-mice was significantly decreased （<0.01），and the immunofluorescence staining results showed that SCAP was not expressed in the hepatic stellate cells from-/-mice，indicating that the hepatic stellate cell-specific-/-mouse model was successfully established. Compared with Con group，the body weight （<0.01） and liver weight （<0.05） of-/-mice fed with high-fat diet decreased，but there was no significant change in liver index. The level of TC in serum was decreased （<0.05），while TG，AST and ALT had no significant difference. HE staining and oil red O staining showed that no significant difference in fatty degeneration and lipid accumulation was observed. Sirius red staining showed that the liver fibrosis was reduced （<0.05）. The mRNA expression levels of Smad2 （<0.05） and Smad3 （<0.01） were significantly decreased，and the protein levels of Smad2/3 and p-Smad2/3 were also significantly decreased in-/-mice （<0.05）.Knockout ofgene in hepatic stellate cells attenuates the progression of hepatic fibrosis in mice，which is associated with TGF-β/Smad signaling pathway.

Sterol regulatory element-binding protein cleavage-activating protein； Hepatic stellate cells； Liver fibrosis； TGF-β/Smad signaling pathway

R575.5； R363.2

A

10.3969/j.issn.1000-4718.2022.02.008

1000-4718（2022）02-0250-09

2021-10-15

2021-11-18

［基金項目］國家自然科學基金資助項目（No. 82170586； No. 81900406）

陳壓西 Tel： 023-68486780； E-mail： chenyaxi@cqmu.edu.cn； 李丹陽 Tel： 020-68486780； E-mail： lidycq@cqmu.edu.cn

（責任編輯：盧萍，羅森）