ALDH2基因多態性與老年2型糖尿病患者冠狀動脈粥樣硬化性心臟病易感性的關系

吳和弟 許麗娃 吉家釵 陳訓春 王少津

(海口市人民醫院老年病科，海南 海口 570208)

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(簡稱冠心病)是2型糖尿病患者常見并發癥及主要死因，積極篩查糖尿病患者并發冠心病的遺傳易感因素，明確高危人群并及時予以有效防治干預，對于改善糖尿病患者預后有重要意義。研究表明〔1〕，乙醛脫氫酶(ALDH)2作為人體內乙醇代謝的關鍵酶，其基因多態性與空腹血糖受損存在明顯相關性。一項納入1 554例受試者的研究顯示〔2〕，ALDH2基因多態性與2型糖尿病發病風險相關。研究發現〔3，4〕，ALDH2基因突變參與了冠狀動脈粥樣硬化的病理過程，是心血管疾病的危險因素，但目前關于ALDH2基因多態性與2型糖尿病患者并發冠心病風險的相關性研究報道少見。本研究擬分析海南地區2型糖尿病患者ALDH2基因多態性與冠心病易感性的關系，旨在探討ALDH2基因多態性在2型糖尿病患者冠心病高危人群早期篩查中的臨床意義。

1 對象與方法

1.1研究對象 選取2015年1月至2017年12月海口市人民醫院接受冠脈造影檢查的老年2型糖尿病患者300例，其中男199例，女101例，年齡60～78〔平均(68.90±5.41)〕歲。納入標準：①符合《中國2型糖尿病防治指南(2013年版)》〔5〕中診斷標準；②年齡≥60歲；③本地常住居民。排除標準：①1型糖尿病患者；②伴嚴重肝腎功能不全、血液系統疾病者；③伴其他內分泌系統疾病者；④惡心腫瘤患者；⑤嚴重感染者。根據冠脈造影結果進行分組，將至少存在一支冠狀動脈血管內徑狹窄程度>50%的178例納入2型糖尿病合并冠心病組(冠心病組)，將任何分支血管內徑狹窄程度均≤50%的122例納入2型糖尿病未合并冠心病組(非冠心病組)。另選取同期接受冠狀動脈造影檢查顯示無明顯內徑狹窄或任何一支冠狀動脈血管內徑狹窄程度≤50%的150例老年非2型糖尿病患者為對照組。本研究通過醫院倫理委員會審批，受試對象均簽署知情同意書。

1.2一般資料及實驗室生化指標收集 收集所有受試對象性別、年齡、糖尿病病程(2型糖尿病患者)、體重指數、吸煙史、飲酒史、收縮壓、舒張壓。采集受試對象清晨空腹肘靜脈血5 ml，行空腹血糖(FPG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平的檢測；其中空腹血糖(FPG)采用葡萄糖氧化酶法進行檢測，HbA1c應用高效液相法進行檢測，血脂檢測采用日立7060型全自動生化分析儀進行。

1.3基因多態性檢測 留取上述血液標本2 ml，放置于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中，然后置于-80℃環境下保存備用。應用DNA提取試劑盒(北京鑫諾美迪基因檢測技術有限公司)提取全血基因組DNA，利用紫外分光光度計對DNA濃度的測定，光密度260/280=1.8～2.0表明樣品達標；DNA含量要求：所提取的標本≥50 ng/μl；基因組RNA提取完成后，立即應用ALDH2基因突變檢測試劑盒進行檢測。目的DNA片段擴增引物：上游5′-GTCAACTGCTATGATGTGTTTGG-3′，下游5′-CCACCAGCAGACCCTCAAG-3′。反應體系50 μl，模板DNA 2 μg，2×Master Mix 25 μl，上下游引物各2 μl。反應條件：94℃預變性3 min后進入循環，94℃變性45 s，然后60℃退火30 s，再以72℃延伸45 s，共進行35個循環，72℃延伸5 min，于4℃下保存。聚合酶鏈反應(PCR)擴增引物在2%瓊脂糖凝膠下行電泳，應用溴已啶染色，紫外燈下觀察結果。

1.4統計學方法 應用SPSS22.0軟件，計量資料(服從正態分布)，應用單因素方差分析進行多組間比較，SNK-q檢驗進行組間兩兩比較；計數資料應用χ2檢驗；Hardy-Weinberg遺傳平衡采取χ2檢驗；并應用Logistic回歸模型分析2型糖尿病患者發生冠心病的影響因素。

2 結 果

2.1各組一般資料及實驗室指標比較 與對照組相比，冠心病組及非冠心病組FPG、HbA1c、TG、LDL-C水平均顯著增高(P<0.05)；與非冠心病組相比，冠心病組糖尿病病程顯著較長(P<0.05)，FPG、HbA1c及LDL-C水平顯著增高(P<0.05)；各組其他基本資料差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

2.2ALDH2基因分型 本研究所有對象ALDH2基因型包括3種基因型，即純合野生型(GG型)、純合突變型(AA型)和雜交突變型(GA)型；且各組ALDH2基因型分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡(P>0.05)，有著良好的群體代表性。

2.3各組ALDH2基因型和等位基因分布頻率的比較 冠心病組GG基因型頻率顯著低于非冠心病組及對照組(P<0.05)，AA基因型頻率顯著高于非冠心病組及對照組(P<0.05)；非冠心病組與對照組各基因型頻率對比差異無統計學意義(P>0.05)。與對照組相比，冠心病組、非冠心病組G等位基因分布頻率顯著降低(P<0.05)，A等位基因分布頻率顯著增高(P<0.05)；與非冠心病組相比，冠心病組G等位基因分布頻率顯著降低(P<0.05)，A等位基因分布頻率顯著增高(P<0.05)。見表2。

表2 各組ALDH2基因型和等位基因分布頻率比較〔n(%)〕

2.4Logistic回歸分析2型糖尿病患者發生冠心病的影響因素 以冠心病作為因變量，以性別、年齡、糖尿病病程、FPG、HbA1c、TG、LDL-C及ALDH2基因A等位基因為自變量，行多因素Logistic回歸分析，結果顯示，糖尿病病程及ALDH2基因A等位基因是2型糖尿病患者發生冠心病的獨立影響因素。見表3。

表3 2型糖尿病患者發生冠心病影響因素的Logistic回歸分析

3 討 論

研究表明〔6〕，基因多態性在2型糖尿病、冠心病等多種疾病的發生發展過程中發揮著重要作用。ALDH2是酒精代謝的關鍵酶，還參與其他醛類的氧化，兼具脫氫酶活性和酯酶活性。研究證實〔7〕，ALDH2參與了2型糖尿病病理過程，其作用機制可能在于：ALDH2基因突變會引起醛類物質累積，引起線粒體DNA損傷，進而影響ATP產生及胰島素分泌，誘發胰島素抵抗，從而導致血糖增高。Koppes等〔8〕研究報道，ALDH2基因多態性對2型糖尿病患者血糖水平有影響，ALDH基因突變的2型糖尿病患者血糖水平控制難度更大。安宏亮等〔9〕研究發現，ALDH2基因504位點突變與漢族人2型糖尿病臨床易感性密切相關。研究顯示〔10〕，ALDH2基因多態性與2型糖尿病患者代謝性疾病、消化性疾病發生密切相關。本研究2型糖尿病患者A等位基因分布頻率顯著增高，與既往報道一致。

動脈粥樣硬化是2型糖尿病的一種常見并發癥，冠狀動脈是常見的靶器官。而ALDH2基因具有心血管保護作用，研究顯示〔4，11，12〕，ALDH2基因突變是心腦血管疾病的危險因素。You等〔13〕研究認為，ALDH2能夠通過抑制解毒4-羥基壬烯酸(4-HNE)途徑，下調活性氧生成，進而減輕心肌細胞損傷。Adeniji等〔14〕研究表明，ALDH2表達增高可有效抑制動脈粥樣硬化損傷，同時對心肌細胞凋亡有抵抗作用。He等〔15〕報道，ALDH2基因與2型糖尿病患者心腦血管并發癥密切相關。本研究顯示，海南地區老年2型糖尿病患者ALDH2基因多態性與冠心病發病風險緊密關聯，攜帶A等位基因的2型糖尿病患者發生冠心病的風險增加1.610倍，與前期研究〔16〕報道結果相似。而江玲等〔17〕研究顯示，ALDH2基因多態性與中國北方漢族人群冠心病發病無明顯相關性，與本研究結果不同，這可能是由種族、地區差異造成的，本研究受試對象源于海南地區，屬于中國南方，而江玲等〔17〕是針對中國北方漢族人群進行的研究。

關于ALDH2基因多態性影響2型糖尿病發生冠心病風險的機制，本課題組認為：①ALDH2基因的A等位基因突變，可使得2型糖尿病患者的血糖控制更困難，加重胰島素抵抗，進而促進動脈粥樣硬化進程；②ALDH2基因的A等位基因突變，影響解毒4-HNE途徑，降低其對乙醛產生的抑制作用，從而降低心肌保護作用；③ALDH2基因的A等位基因突變，ALDH2活性降低，炎癥因子失衡，氧自由基增多，炎癥損傷及氧化應激損傷促進心肌肥大及功能障礙〔18，19〕。本研究存在不足，首先屬于單中心小樣本量研究，其所得結果難免與真實世界存在一定偏差；其次，僅觀察了ALDH2基因第487位堿基一個突變位點的基因型分布頻率，關于其他位點多態性與冠心病臨床易感性的關系仍有待研究。

綜上，ALDH2基因多態性與海南地區老年2型糖尿病患者冠心病易感性密切相關，攜帶A等位基因會增加2型糖尿病患者發生冠心病的風險。對2型糖尿病患者予以基因型檢測，可能有助于冠心病高危人群的早期篩查，并及時予以干預，從而改善2型糖尿病患者預后。