兩種不同免疫檢測(cè)技術(shù)在乙肝病毒血清檢驗(yàn)中的價(jià)值分析

陳君茹，鞠健勝，高斌，楊錦玉

1.泰興市中醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇泰興 225400；2.泰興市中醫(yī)院消化內(nèi)科，江蘇泰興 225400

乙肝屬于我國(guó)高發(fā)的感染性疾病，潛伏期約1～6 個(gè)月，主要癥狀為厭食、乏力、腹脹以及肝區(qū)不適等，隨著病情加重，可發(fā)生肝功能損傷、脾大等，嚴(yán)重威脅患者健康[1]。且乙肝病毒有很強(qiáng)的傳染性，目前國(guó)內(nèi)乙肝病毒攜帶人群很多，如病毒激活，則將患上乙型肝炎，故有必要積極做好診斷與治療工作[2-3]。根據(jù)免疫系統(tǒng)在乙肝病毒侵襲所產(chǎn)生的特異性免疫反應(yīng)，臨床多通過(guò)對(duì)DNA、病毒血清學(xué)指標(biāo)等的檢測(cè)進(jìn)行診斷，并根據(jù)檢測(cè)結(jié)果評(píng)估患者預(yù)后，其中酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、電化學(xué)發(fā)光法(electroche‐miluminescent immunoassay,ECLIA)均屬于常用方法[4-5]。但就ELISA、ECLIA 檢驗(yàn)法的臨床應(yīng)用，仍存在爭(zhēng)議。基于此，本研究選取2020 年1—12 月于泰興市中醫(yī)院檢測(cè)的疑似乙肝患者200 例為研究對(duì)象，探討ELISA、ECLIA 檢驗(yàn)對(duì)疾病診斷以及血清學(xué)指標(biāo)陽(yáng)性檢出的價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取于本院檢測(cè)的疑似乙肝患者200 例為研究對(duì)象。200 例患者中男114 例，女86 例；年齡7～80歲，平均（44.28±10.15）歲；臨床綜合診斷結(jié)果：乙肝患者157 例，非乙肝患者43 例。研究已申報(bào)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①均存在乙肝典型癥狀；②存在乙肝患者接觸史；③認(rèn)知正常；④知情同意。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往精神疾病史者；②不配合研究者；③凝血功能異常者；④未獲得明確診斷者。

1.3 方法

所有受試者均采用ELISA、ECLIA 進(jìn)行檢驗(yàn)。于清晨時(shí)采集患者空腹?fàn)顟B(tài)下肘靜脈血5 mL，在4℃條件下以3 000 r/min 離心10 min，分離血清待檢。ELISA 檢驗(yàn)時(shí)，先將試劑和微孔反應(yīng)條室溫保存30 min，后將血清加入微孔反應(yīng)條，封片封鎖，在37℃水箱中水浴60 min，取出并去除液體，反復(fù)洗滌反應(yīng)條5 次，加入試劑并封鎖，在37℃水浴箱持續(xù)30 min，加入終止液。如血清值大于臨界值，則判定為陽(yáng)性。使用酶標(biāo)儀進(jìn)行比色并記錄結(jié)果。ECLIA 檢測(cè)時(shí)將血清樣本加入包被HBV 核心抗原的聚苯乙烯試管中，以100 μl 辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記，37℃條件下放置2 h，以PBS 緩沖下沖洗3 次，持續(xù)3 min，加入氫氧化鈉、魯米諾以及3%過(guò)氧化氫各100 μl，以電化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定。檢測(cè)結(jié)果超過(guò)臨界值則為陽(yáng)性。所有操作均嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)完成。

1.4 觀察指標(biāo)

①ELISA、ECLIA 診斷效能分析。以臨床綜合診斷結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，比較兩種診斷方法與金標(biāo)準(zhǔn)的一致性，分析兩種檢測(cè)方法診斷乙肝的準(zhǔn)確率、靈敏度、特異度；②比較ELISA、ECLIA 對(duì)血清學(xué)指標(biāo)的陽(yáng)性檢出率，檢測(cè)指標(biāo)包括HBeAg、HBsAg、HBeAb、HBcAb、HBsAb。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以[n(%)]表示，進(jìn)行配對(duì)χ2檢驗(yàn)，一致性予Kappa檢驗(yàn)，Kappa>0.75 表示一致性較好。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ELISA、ECLIA 診斷效能比較

ECLIA 檢測(cè)與金標(biāo)準(zhǔn)一致性較好（Kappa=0.93），ELISA 檢測(cè)與金標(biāo)準(zhǔn)一致性較好（Kappa=0.85）；ECLIA 檢測(cè)診斷乙肝的準(zhǔn)確率、靈敏度、特異度分別 為97.50%、98.09%、95.35%，與ELISA 的95.50%、95.54%、95.35%比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.250、2.250、0.001，P>0.05）。見(jiàn)表1。

表1 ELISA、ECLIA 與金標(biāo)準(zhǔn)一致性及診斷效能對(duì)比

2.2 ELISA、ECLIA 對(duì)血清學(xué)指標(biāo)陽(yáng)性檢出率比較

ECLIA 對(duì)HBsAg、HBeAg、HBeAb 的陽(yáng)性檢出率高于ELISA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；但兩種檢查方法對(duì)HBsAb、HBcAb 的陽(yáng)性檢出率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 ELISA、ECLIA 對(duì)乙肝患者血清學(xué)指標(biāo)陽(yáng)性檢出率對(duì)比[n(%)]

3 討論

乙肝即乙肝病毒感染而導(dǎo)致的傳染性疾病，通過(guò)檢測(cè)病毒血清標(biāo)志物，可評(píng)估感染嚴(yán)重程度以及機(jī)體免疫反應(yīng)狀態(tài)。HBsAg 作為乙肝病毒外殼無(wú)傳染性，但發(fā)生感染后表現(xiàn)為持續(xù)陽(yáng)性，HBsAb 則為病毒刺激下機(jī)體產(chǎn)生的抗體，能夠通過(guò)參與免疫反應(yīng)清除病毒；HBsAb 則為病毒核心顆粒中的蛋白質(zhì)成分，以HBcAg 為載體，在裂解之后能夠溶在血清中，也能夠反映病毒感染[6-7]。HBeAg 陽(yáng)性則表示患者病情處在活動(dòng)階段，傳染性很高[8-9]。HBeAb則為在HBeAg 的作用下產(chǎn)生的抗體，能反映病情控制情況。HBcAb 則為免疫球蛋白，能體現(xiàn)病毒感染的持續(xù)性、活躍性[10-11]。通過(guò)檢測(cè)該類血清標(biāo)志物水平，有利于評(píng)估機(jī)體病情，進(jìn)而指導(dǎo)臨床工作的開(kāi)展。ELISA、ECLIA 均屬于臨床常用的血清學(xué)檢測(cè)方法，其中前者的檢測(cè)原理為將標(biāo)本與酶標(biāo)抗原、抗體等發(fā)生特定反應(yīng)，利用酶和底物展現(xiàn)特定顏色反應(yīng)，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)[12-13]。該檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)單、成本低、應(yīng)用廣泛，但該檢驗(yàn)方法通過(guò)間接測(cè)定，檢測(cè)結(jié)果容易受到多種因素影響，誤診與漏診風(fēng)險(xiǎn)較高[14]。而ECLIA 監(jiān)測(cè)，可利用化學(xué)檢測(cè)中待檢測(cè)標(biāo)本的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度，該類物質(zhì)在特定條件下發(fā)光強(qiáng)度有線性定量關(guān)系，利用儀器檢測(cè)發(fā)光強(qiáng)度，有利于對(duì)待測(cè)物的含量進(jìn)行分析，操作簡(jiǎn)單可靠、操作時(shí)間短，且診斷范圍廣[15-16]。該監(jiān)測(cè)方法利用電磁鐵控制的順磁性微粒進(jìn)行自動(dòng)操作，定量檢測(cè)精準(zhǔn)性高，準(zhǔn)確性更好。

本研究中，ECLIA 檢測(cè)與金標(biāo)準(zhǔn)一致性較好（Kappa=0.93），ELISA 檢測(cè)與金標(biāo)準(zhǔn)一致性較好（Kappa=0.85）；ECLIA 檢測(cè)診斷乙肝的準(zhǔn)確率、靈敏度、特異度分別為97.50%、98.09%、95.35%，與ELISA的95.50%、95.54%、95.35%比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，本研究結(jié)果說(shuō)明ELISA 與ECLIA 檢測(cè)均有較高診斷價(jià)值。費(fèi)靜[17]研究中ECLIA 檢測(cè)敏感性、特異性、準(zhǔn)確性分別為93.75%、99.94%、99.86%，與ELISA 比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，且兩種方法診斷與金標(biāo)準(zhǔn)的一致性均較好，也佐證了兩種方法對(duì)診斷乙型肝炎的價(jià)值。而ECLIA 對(duì)HBsAg、HBeAg、HBeAb 的陽(yáng)性檢出率分別為36.94%、70.06%、32.48%，高于ELISA (P<0.05)，ECLIA 檢測(cè)血清學(xué)標(biāo)志物陽(yáng)性率更高。劉彬[18]研究中，ECLIA 對(duì)HBeAg、HBsAg、HBeAb 陽(yáng)性檢出率分別為32.00%、71.00%、29.00%，均高于ELISA (P<0.05)，也說(shuō)明ELISA 對(duì)血清標(biāo)志物的陽(yáng)性檢出率更高。

綜上所述，ELISA、ECLIA 在乙型肝炎診斷中均有較高的應(yīng)用價(jià)值，而ECLIA 在血清標(biāo)志物陽(yáng)性檢出率上較ELISA 更高，可為臨床診療提供更可靠的依據(jù)。