結核感染T 細胞檢測用于肺結核診斷的臨床價值研究

吳亞光，王潔，李亞明

宜興市人民醫院檢驗科，江蘇宜興 214200

肺結核屬于臨床常見慢性肺部傳染性疾病之一，是由感染結核分枝桿菌所致，嚴重影響患者日常工作、學習及生活。肺結核疾病癥狀較為復雜，部分患者癥狀表現較為隱匿，缺乏典型性，因此容易出現漏診、誤診情況。每年3 月24 日為世界肺結核病防治日，據2020 年數據統計結果顯示，全球新增肺結核病患者數量超過987 萬例，發病率約127/10 萬，我國新增肺結核病患者數量約84 萬例，發病率約59/10 萬[1]。及早鑒別診斷肺結核對疾病預防、控制與治療具有重要作用。目前臨床鑒別診斷肺結核疾病的方法較多，其中以痰培養結合分枝桿菌方式診斷結果為金標準，但前者對患者造成一定傷害，后者則需要較長時間的病原菌培養，操作復雜。因此，找尋一種結果準確、不對患者造成傷害、操作簡單的診斷方法成為臨床深入研究的內容[2]。醫學研究發現，患者感染肺結核分枝桿菌后，會對T 細胞形成刺激，提高其活性，因此可通過結核感染T細胞檢測技術鑒別診斷肺結核疾病。本文選取2021 年2—12 月宜興市人民醫收治的150 例疑似肺結核患者進行研究，分析結核感染T 細胞檢測技術的應用與效果，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院接診的疑似肺結核病住院患者150 例為研究對象，男、女分別為86 例、64 例；年齡31～76歲，平均（55.24±3.59）歲；初中及以下文化程度49例，高中文化程度65 例，大專及以上文化程度36例。本研究經醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 納入與排除標準

納入標準：均為首次疑似肺結核疾病；均同意配合本次診斷研究。

排除標準：合并免疫系統疾病患者；合并重度感染患者；溝通障礙、臨床資料缺失或排斥本研究患者。

1.3 方法

結核抗體檢驗方法：在非空腹狀態下即可完成外周靜脈血樣采集，采血點為肘窩主靜脈，每人采集血樣8 mL 即可。使用結核分枝桿菌特異性細胞免疫反應檢測試劑，以膠體金法對血樣中的結核桿菌抗體進行檢測。取反應板，在中間孔內加入封閉液，共2 滴即可，等待薄膜將其吸入。隨后取血清樣本，共40 μl，加入中間孔中，等待薄膜將其吸入。隨后依次加入吸活液、金標液，分別為6 滴、2 滴，待金標液被薄膜吸入后，再加入洗滌液共6 滴。觀察薄膜吸入后的檢測結果，如質控點顯示為紅色，反應孔的中間部位出現紅色的斑點，則說明檢測結果為陽性；如質控點顯示為紅色，反應孔的中間部位并無紅色斑點，或僅為少量紅色痕跡，則說明檢測結果為陰性。

結核感染T 細胞檢測方法：使用完全相同的采血方式，每人采集血樣量為8 mL 左右，將其放入含有抗凝物質的真空試管內，于規定時間轉運至檢驗科，所有操作均需在采血后8 h 內完成。要求操作全程均需在生物安全柜內完成，按照手柄方向，由左至右分別在三孔培養板內滴入對照培養液（N）、陽性對照培養液（P）、檢測培養液（T），每孔內各加入100 μl 樣本，并做好標記。取血樣樣本，緩慢上下顛倒3～5 次，使其充分混勻后分別滴入三孔內，每孔各1 mL 全血樣本。滴入樣本后將培養板上蓋旋緊，確認無誤后取出生物安全柜，并轉移至恒溫培養箱內孵化，箱內環境溫度設定為37℃，連續孵化16～24 h 即可，整個過程中需保持培養板水平放置。培養完成后檢查培養板上蓋是否旋緊，確認無誤后轉移回生物安全柜內，靜置1 min 以上。緩慢旋開上蓋，將每個孔內的上清液吸出部分，開展IFN-γ 檢測。注意吸取檢驗樣本時不得深入細胞層，以免出現溶血現象。

將采集的上清液樣本置入安圖全自動免疫分析設備內，于450 nm 處測量吸光度，再根據試劑盒上的校準品繪制標準曲線圖，從而獲得IFN-γ 指標。①如N<10 U/mL，且T 和N 的差值<0.438，或>0.438 但低于N 值的25%，P 和N 的差值超過0.625，則說明樣本為陰性，可能不存在結合感染T 細胞免疫反應。②如N<10 U/mL，且T 和N 的差值>0.438，并超過N 值的25%，則說明樣本為陽性，可能存在結合感染T 細胞免疫反應。③如N<10 U/mL，且T和N 的差值<0.438，或>0.438 但低于N 值的25%，但P 和N 差值<0.625，則樣本檢測結果不確定。④如N值>10 U/mL，則不論其他檢驗值如何，檢驗均為失敗，需重新對血樣進行檢查。

1.4 觀察指標

以臨床綜合診斷診斷結果作為金標準，分別記錄兩種檢測方法所得結果，計算兩種檢測方法靈敏度、特異度及準確度。靈敏度=真陽性例數/（真陽性例數+假陰性例數）×100.00%；特異度=真陰性例數/（真陰性例數+假陽性例數）×100.00%；準確度=（真陽性例數+真陰例數）/總例數×100.00%。

1.5 統計方法

采用SPSS 23.0 統計學軟件處理數據，計數資料用[n(%)]表示，差異比較采用χ2檢驗，P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種方法的診斷結果分析

150 例疑似肺結核住院患者經臨床綜合診斷結果顯示，45 例患者確診為肺結核疾病，占比30.00%，105 例患者結果為陰性，占比70.00%。見表1。

表1 兩種方法的診斷結果分析

2.2 兩種方法的靈敏度、特異度、準確度對比

結核感染T 細胞檢測的靈敏度、特異度及準確率度均高于結核抗體檢驗，差異有統計學意義（P<0.05）。見表2。

表2 兩種診斷方法的靈敏度、特異度、準確度對比（%）

3 討論

肺結核病是目前呼吸系統傳染性疾病之一，其主要是由于肺部感染結核分枝桿菌所引發的慢性傳染性病變，以肺結節的發病率較高。其中結核菌體以呼吸道內的氣溶膠為載體，借助空氣傳播至外界，可在一定時間內保持感染性，當其他人在含有感染源氣溶膠的環境內呼吸，便可將結核分枝桿菌吸入呼吸道中，若自身為易感人群，則發生肺結核的概率會更高[3-4]。當結核分枝桿菌吸入人體后，免疫系統便會對其產生特異性的應答反應，刺激機體合成相應的抗體，將結核分枝桿菌快速殺滅和清除，因而接觸結核分枝桿菌并不一定會染病。但其中部分菌株可能未被完全清除，這部分菌株會被肺泡中的巨噬細胞所吞噬，刺激產生正常的免疫應答，可在肺泡組織中形成肉芽腫[5-6]。在這一階段結核菌株自身的代謝功能、自我復制等均會受到一定限制，臨床也將其稱為“潛伏期”。處于潛伏期的患者并不會出現臨床癥狀，以影像學診斷胸部未見任何陰影，因而容易使患者和醫生忽略病情[7-8]。而當該感染者由于自身或外界因素誘導，從而出現免疫功能下降，或肺結核分枝桿菌毒性增加的情況時，該特異性抗原便會激活，在肺泡內大量繁殖，破壞肺實質結構，使肺部功能快速下降[9-10]。

目前臨床診斷肺結核的方法有結核抗體檢測法，其誤診率較高，且受菌株自身潛伏性的影響[11-12]。結核感染T 細胞法則主要是以檢驗T 細胞為基礎的體外IFN-γ 反應技術，是以T 細胞自身的免疫應答機制為基礎診斷方式。當人體初次感染結核分枝桿菌后，便會對T 淋巴細胞產生影響，使其致敏[13-14]。當二次感染或體內潛伏菌株爆發后，致敏T 淋巴細胞的釋放功能便會被異常激活，尤其是IFN-γ 指標，因此該指標的異常升高也視為感染結核桿菌的標志之一[15-16]。同時感染結核分枝桿菌后RD1 區的兩種分泌蛋白（CFP-10、ESAT-6）功能會被激活，從而使其分泌量大幅提升，該蛋白也屬于肺結核檢驗中特異性較強的蛋白[17-19]。

本研究結果顯示，150 例疑似肺結核病患者通過結核感染T 細胞檢測結果準確度（98.00%）明顯高于結核抗體檢測（84.67%）（P<0.05），與曹靜[20]研究結果“觀察組通過結核感染T 細胞檢測符合率（92.55%）高于對照組結核抗體檢驗（符合率74.47%）（P<0.05）”相一致。

綜上所述，臨床鑒別診斷肺結核疾病可采取結核感染T 細胞檢測技術，具有較高的準確度，能夠為臨床提供可靠數據支持。