濰坊市售雞蛋中滅蠅胺殘留水平分析

谷翠梅 王丹

摘 要：目的：對濰坊市售雞蛋中滅蠅胺的殘留水平進行分析。方法：選取了濰坊12個縣市區(qū)市場上銷售的雞蛋，對其中的滅蠅胺通過UPLC-MS/MS分析技術(shù)進行監(jiān)測。結(jié)果：空白基質(zhì)的加標回收率皆在56.0%～86.0%，相對標準偏差（RSD）為4.4%～9.60%。線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)r為0.999 5，表明經(jīng)過MCX陽離子交換固相萃取方法處理過的滅蠅胺殘留量檢測在1.0～200.0 ng/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。以3倍信噪比計算得到檢出限為0.73 ?g/kg，10倍信噪比算得定量限為2.19 ?g/kg。試驗證明，MCX陽離子交換固相萃取前方法可以作為本次研究雞蛋中滅蠅胺殘留量的檢測方法。連續(xù)抽檢近3年濰坊市售雞蛋樣品60份，檢出2份樣品中含有滅蠅胺，檢出率為3.33%，殘留量分別為0.22 mg/kg、0.15 mg/kg，均超出國家標準限量值。結(jié)論：雞蛋中滅蠅胺有檢出，且多出自夏季樣品，跟季節(jié)性添加劑的使用有一定關(guān)系，檢測值高于國家限量標準，應(yīng)該引起人們的重視。畜牧養(yǎng)殖合規(guī)合法的飼料添加劑使用還需更規(guī)范，相關(guān)人員應(yīng)加強監(jiān)管力度。

關(guān)鍵詞：雞蛋;滅蠅胺;殘留水平

Abstract： Objective： To analyze the residue level of Cyromazine in eggs sold in Weifang .Methods： Eggs sold in the markets of 12 counties and cities in Weifang were selected， and the Cyromazine was monitored by UPLC-MS/MS analysis technology. Results： The recoveries of blank matrix were in the range of 56.0%～86.0%， and the relative standard deviation （RSD） was in the range of 4.4%～9.60%. The correlation coefficients r of linear regression equation were 0.999 5 respectively， which showed that the detection of Chlorphenamine residues treated by McX cation exchange solid phase extraction had a good linear relationship in the range of 1.0～200.0 ng/mL. The detection limit calculated by 3 times signal-to-noise ratio is 0.73 ?g/kg， 10 times signal-to-noise ratio， the quantitative limit is 2.19 ?g/kg. The results show that the method before MCX cation exchange solid phase extraction can be used as a method for the determination of Chlorphenamine residues in eggs. 60 egg samples sold in Weifang City in recent three years were sampled continuously， and two samples were detected to contain Cyromazine， the detection rate was 3.33%， and the residues were 0.22 mg/kg and 0.15 mg/kg respectively， which exceeded the national standard limit. Conclusion： Cyromazine was detected in eggs， mostly from summer samples， which is related to the use of seasonal additives. The detection value is higher than the national limit standard， which should attract our attention. The use of legal feed additives in animal husbandry needs to be more standardized， and relevant personnel should strengthen supervision.

Keywords： egg; cyromazine; residual level

環(huán)丙氨嗪，又名滅蠅胺，環(huán)丙氨嗪在動物急性毒理實驗中有很高的劑量效應(yīng)關(guān)系，在慢性、亞慢性毒理實驗中，環(huán)丙氨嗪能夠造成實驗動物體重下降，肝腫大，血液中血紅蛋白、血細胞數(shù)減少，使動物胎兒骨骼發(fā)育遲緩、胎兒體重減輕、存活率下降[1]。近幾年，環(huán)丙氨嗪被廣泛地添加到動物飼料中用于控制動物廄舍內(nèi)蠅蛆的生長發(fā)育，雖然取得了較好的效果，但鑒于環(huán)丙氨嗪的毒理性作用，我國2019年發(fā)布的《食品安全國家標準 食品中獸藥最大殘留限量》規(guī)定環(huán)丙氨嗪在禽產(chǎn)品中的最高殘留限量為0.05 mg/kg。

目前國內(nèi)普遍常用的檢測方法多為農(nóng)業(yè)行業(yè)標準推薦方法——高效液相色譜法[2]，本研究建立靈敏度較高的MCX陽離子交換固相萃取-超高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法檢測雞蛋中的環(huán)丙氨嗪[3-4]，可作為雞蛋中滅蠅胺藥物殘留量測定的技術(shù)參考，也可作為本次研究中調(diào)查濰坊市售雞蛋中滅蠅胺殘留情況的技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

超高效液相色譜三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀Aglient1290-6460，離心機（ST16R，Thermo）;氮吹儀（NEVAP，美國）;色譜柱（Aglient RRHD Eclipse plus-C18），固相萃取儀，恒溫水浴鍋。

1.2 材料與方法

甲醇（CH3OH）：色譜純，甲酸（HCOOH），乙酸銨（CH3COONH4），氨水（濃度25%～28%），標準品：滅蠅胺（Cyromazine，CAS：66215-27-8），滅蠅胺-13C3（Cyromazine-13C3）同位素內(nèi)標，Waters MCX小柱60 mg/3 mL。

1.3 試驗方法

1.3.1 色譜條件

色譜柱（Aglient RRHD Eclipse plus-C18）（100 mm×3.0 mm，1.8 ?m）;流動相A為0.05%甲酸水，流動相B為乙腈;洗脫程序為0～1 min，50% B;1～3 min，60% B;3～6.5 min，95% B;6.5～7.6 min，25% B;7.6～8.5 min，50% B;流速0.3 mL/min;柱溫40 ℃;進樣量10 ?L。

1.3.2 質(zhì)譜條件

多反應(yīng)監(jiān)測正離子掃描模式，參數(shù)為干燥氣溫度300 ℃，流速為5 L/min;霧化器壓力為40 psi;鞘氣溫度400 ℃;流速為11 L/min;毛細管電壓為4 000 V;噴嘴電壓為500 V。滅蠅胺的質(zhì)譜參數(shù)見表1。

1.3.3 樣品前處理

（1）樣品制備。取適量雞蛋，去殼后高速勻漿混合均勻，分裝后于-18 ℃以下保存?zhèn)溆谩?/p>

（2）樣品提取和凈化。①提取。稱取5 g（精確到0.01 g）均質(zhì)后的試樣于50 mL離心管中，加入50 ?L內(nèi)標工作液、10 mL甲醇和0.05 mL甲酸，渦旋振蕩10 min，再超聲提取10 min。之后8 000 r/min離心5 min，上清液待凈化。②凈化。MCX柱預(yù)先用2 mL甲醇、2 mL水和1 mL甲醇活化。取離心后的上清液1.5 mL上柱，待快流干時依次用2 mL甲醇、2 mL水和1 mL甲醇淋洗，棄去所有淋洗液，之后用2.5 mL?2%氨水甲醇洗脫，收集洗脫液，于50℃氮吹近干，加1 mL的0.1%甲酸10%甲醇水溶液溶解殘渣，過0.22 ?m濾膜后，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。

1.3.4 溶液配制

（1）內(nèi)標和標準儲備液配制。分別準確稱取內(nèi)標和標準品0.010 0 g，置于兩個10 mL容量瓶中，加5 mL水和20 ?L甲酸溶解，用甲醇定容至刻度，濃度均為1 mg/mL，-20 ℃保存，有效期12個月。

（2）標準工作液配制。取適量標準儲備液，用甲醇逐級稀釋，配制成濃度為1 ?g/mL的標準工作液，-20 ℃保存，有效期6個月。

（3）內(nèi)標工作液配制。取適量內(nèi)標儲備液，用甲醇逐級稀釋，配制成濃度為1 ?g/mL的內(nèi)標工作液，-20 ℃保存，有效期6個月。

2 結(jié)果與分析

2.1 標準曲線的制作

取適量標準工作液，用0.1%甲酸、10%甲醇水溶液配制濃度為1.0～200.0 ng/mL的標準系列溶液，每mL標準溶液中加入10 ?L內(nèi)標工作液，得到相當于雞蛋中濃度為1.0～200.0 ?g/kg的標準工作系列溶液（按5 g樣品加入50 ?L內(nèi)標工作液計算），進樣測定。以標準和內(nèi)標定量離子對峰面積比值為縱坐標，濃度為橫坐標繪制工作曲線，得到標準曲線回歸方程、工作標準曲線及線性范圍，見圖1。相關(guān)系數(shù)R2為0.999 5，符合國標要求。

2.2 回收率和精密度試驗

在空白基質(zhì)中按0.5 ?g/kg、1.0 ?g/kg、5.0 ?g/kg和10.0 ?g/kg 4種濃度添加標準物質(zhì)，并按照上述選定的分析條件進行測定，平行進樣6次。測得回收率和精密度，結(jié)果見表2。

由表2可知，本法檢測雞蛋中滅蠅胺，添加標準品低、中、高濃度的回收率范圍為56.0%～86.0%，精密度為4.4%～9.6%，符合國標要求。

2.3 方法的檢出限和定量限

采用向空白基質(zhì)中添加目標化合物的方法進行檢測，進樣瓶中樣品濃度為5.00 ?g/L，取樣量為5 g，定容至10 mL。以3倍信噪比（S/N）所對應(yīng)的被測化合物的含量作為方法的檢出限，以10倍信噪比所對應(yīng)的被測化合物的含量作為方法的定量限。結(jié)果見表3，可知，本法滅蠅胺檢出限為0.73 ?g/kg，定量限為2.19 ?g/kg，符合國標要求。

2.4 樣品檢測結(jié)果

由表4、表5可知，抽檢市售雞蛋樣品60份，其中采集正規(guī)超市、農(nóng)貿(mào)市場樣品各30份。按照本文中的方法進行檢測，共檢出2份樣品中含有滅蠅胺，均來源于農(nóng)貿(mào)市場，不合格率為為6.67%，殘留量為0.22 mg/kg、0.15 mg/kg，超出國家標準限量值[5]，正規(guī)超市樣品合格率為100%。通過對檢出樣品的季節(jié)分析發(fā)現(xiàn)，夏季樣品檢出率高，可能與季節(jié)性滅蠅飼料添加有關(guān)。

3 結(jié)論與討論

本研究采用方法線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)R2為0.999 5，空白基質(zhì)的加標回收率在56.0%～86.0%，相對標準偏差（RSD）在4.4%～9.60%。檢出限為0.73 ?g/kg，定量限為2.19 ?g/kg。試驗證明，MCX陽離子交換固相萃取前方法各項指標符合國標要求，可以作為本次研究雞蛋中滅蠅胺殘留量的檢測方法。試驗樣本來自于濰坊12個縣市區(qū)的各大商超和集貿(mào)市場，涵蓋多個季節(jié)的樣品采集，共采集60批次雞蛋樣品。其中農(nóng)貿(mào)市場采集樣品30份，檢出2份樣品中含有滅蠅胺，均超過國家標準限量，且檢出樣品集中在夏季，相關(guān)人員考慮有季節(jié)性添加的因素。綜合檢出率雖然不高，但仍然應(yīng)該引起重視，也提醒人們應(yīng)加強養(yǎng)殖單位及個人對于國家相關(guān)法律法規(guī)的學(xué)習和貫徹;合理使用獸藥，嚴格按照國家規(guī)定進行添加;加強禁用獸藥的管理，提高食品安全意識，從源頭進行控制;加強集貿(mào)市場的食品流通管理，為消費者提供一個安全的食品環(huán)境。

參考文獻

[1]曾丹，徐桂云，魏紅剛，等.蛋雞飼料中添加滅蠅胺在雞蛋中的殘留[C]//中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2009學(xué)術(shù)年會論文集（下冊）.石家莊：中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會，2009：178.

[2]中華人民共和國農(nóng)業(yè)部.蔬菜中滅蠅胺殘留量的測定 高效液相色譜法：NY/T 1725—2009[S].北京：中國標準出版社，2009.

[3]CARBRAS P，MELINI M，SPANEDDA L.High performance liquid chromatographic separation of cyromazine[J].Journal of Chromatography A，1990，505（2）：413-416.

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[5]中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部，國家衛(wèi)生健康委員會，國家市場監(jiān)督管理總局.食品安全國家標準 食品中獸藥最大殘留限量：GB 31650—2019[S].北京：中國標準出版社，2019.