抗病毒核苷酸類似物磷酸化修飾研究進展

梁星星 王佳 許文濤

（1. 中國農業大學營養與健康系，北京 100091；2. 中國農業大學食品科學與營養工程學院，北京 100083）

核苷（酸）是構成生命遺傳信息的基礎物質，參與細胞內生物大分子DNA和RNA的合成，同時還以不同形態參與人體內大量的生化反應過程，如細胞的信號傳遞，能量代謝，以及各種酶的調節與表達等。核苷（酸）類似物是一類合成的、經化學修飾的，模仿核苷（酸）生理學性質的物質，它們可以參與到細胞內的代謝過程，嵌入到DNA及RNA中阻斷其延伸復制，從而抑制細胞的生長和增殖［1］。核苷（酸）類似物已廣泛應用于抗病毒治療，如由人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）、皰疹病毒（herpes virus，HPV）、乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）、丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）等引起的疾病［2-3］，并且，瑞德西韋（remdesivir，一種腺嘌呤核苷類似物前藥）對治療最近爆發的SARS CoV-2感染表現出很好的治療前景［4］。

核苷（酸）類似物通過與內源核苷（酸）相同的代謝機制而被激活，其首先通過細胞膜上特定的核苷（酸）載體（如一些轉運蛋白載體、有機陰離子和陽離子交換蛋白等）進入細胞［5］，隨后在細胞內激酶的作用下逐步磷酸化，生成具有生物活性的核苷三磷酸類似物，這些活化后的核苷酸類似物可競爭性抑制病毒編碼的DNA或RNA聚合酶的作用，如HIV逆轉錄酶、HCV編碼的RNA聚合酶等；也可直接參與病毒內DNA/RNA的合成，嵌入其中并導致鏈延伸的終止，從而發揮抗病毒作用［3，6］。由于核苷（酸）類似物的第一步（或第二步）磷酸化是由病毒編碼的激酶催化完成的，這也保證了這些藥物只作用在被病毒感染的細胞中［7］。接下來的磷酸化步驟由宿主細胞內的激酶催化完成，由于核苷（酸）類似物的性質不同，其細胞內的磷酸化過程可能需要一種、兩種、三種甚至更多酶來催化完成，不同核苷（酸）類似物與激酶的親和力也各不相同，激酶在細胞內的含量和有效性也各不相同［8-9］。因此，激酶催化是整個反應的限速步驟，其催化過程經常不充分，導致最后生成的核苷三磷酸類似物在細胞內的含量偏低，降低了藥物的生物活性。因此，開發高度磷酸化的核苷酸類似物是很有必要的，它們可以避開細胞內的限速步驟（即激酶催化），提高細胞內生成的核苷三磷酸類似物的濃度，從而提高抗病毒治療效果。然而，未修飾的核苷酸類似物在生理條件下帶負電荷從而顯示出極性，使其不易穿過細胞膜；其次，核苷酸類似物在體內易受磷酸酶的降解而脫磷酸［10］。為改善和解決上述問題，研究人員開發了多種合成方法，如通過在核苷酸類似物上修飾親脂性基團，以確保其不易被血液中的磷酸酶降解，同時增強被細胞攝取吸收的能力，最終實現高效的抗病毒作用［11-13］。根據磷酸化程度的不同以及核苷酸類似物的發展過程，可將核苷酸類似物分為3種：核苷單磷酸、雙磷酸和三磷酸類似物。

目前，已通過美國食品藥品監督管理局（FDA）或歐洲藥品管理局（EMA）的核苷（酸）藥物有替諾福韋酯（tenofovir dipivoxil）、司他夫定（stavudine）、伐昔洛韋（valacyclovir）、西多福韋（cidofovir）等，并且已被批準用于治療人類疾病［14］。本文總結概述了核苷酸類似物在抗病毒藥物領域的研究進展，以磷酸化修飾為主，重點介紹了核苷單磷酸、雙磷酸和三磷酸類似物的發展，并分析了核苷酸類似物在臨床藥物應用中存在的局限和未來發展的趨勢，以期為開發新型、高效的核苷酸藥物提供有益參考。

1 核苷單磷酸類似物

核苷單磷酸類似物是在核苷類似物基礎上修飾單磷酸基團得到的核苷酸類似物，它能避開細胞內的第一步磷酸化步驟，在一定程度上提高抗病毒效果。然而由于其生理電負性和脫磷酸化作用，極大地限制了該類物質的應用。因此，為保證藥物能順利進入細胞，并不易被血液中的磷酸酶降解，需要對磷酸基團上帶的負電荷進行掩蔽，常見的修飾基團有bisPOM-、SATE-、CycloSal-和氨基磷酸酯等［15-16］，通過這些方法制備的中性親脂性核苷單磷酸三酯能通過被動運輸進入細胞并在酶解或者化學水解作用下生成相應的具有生物活性的核苷單磷酸類似物。

早在1983年，Farquhar等［17］就報道了雙-碳氧甲基修飾的磷酸酯衍生物在肝酯酶和血漿中具有很好的穩定性。隨后，該團隊又利用中性雙-酰氧基甲基修飾核苷單磷酸，其能有效提高藥物的親脂性，結構如圖1所示。該藥物易于進入細胞，并能在羧酸酯酶作用下裂解產生羥甲基核苷單磷酸中間體，該中間體繼續發生裂解，生成核苷單磷酸［18］。雙-酰氧基甲基修飾的核苷單磷酸具有很好的穩定性，因此其在體內循環過程中不易被降解，提高了其到達細胞內的有效濃度。利用雙-新戊酰氧基甲基［bis（pivaloyloxymethyl），bis（POM）］修飾的無環核苷單磷酸類似物具有廣譜的抗病毒活性［19］，對bis（POM）修飾的5-疊氮基甲基2′-脫氧尿苷（AmdU）的代謝合成進行研究發現，其可以高效地活化為核苷三磷酸形式從而合成到DNA中，且在細胞培養基中展示了較高的穩定性［20］。

圖1 雙-酰氧基甲基核苷單磷酸Fig. 1 Bis-acyloxymethyl nucleoside monophosphate［18］

與雙-酰氧基甲基修飾類似，S-酰基-2-硫乙基（S-acyl-2-thioethyl，SATE）基團修飾的核苷單磷酸類似物的水解也是依賴酯酶激活，接著發生自發裂解。根據酸堿理論，對于巰基乙醇取代的磷酸衍生物，巰基會進攻β-C進而使巰基乙醇從磷酸上水解下來，形成核苷酸。基于此，Peyrottes等［21］采用SATE基團作為核苷單磷酸的保護基團，其結構如圖2所示（R表示烷基或者芳基，Nu表示核苷類似物），SATE基團在細胞外基質中有很好的穩定性，而在細胞內可以快速地降解，這有利于在細胞內選擇性地釋放核苷單磷酸藥物，從而提高抗病毒效果。作為一個生物可裂解的磷酸保護基團，該雙-SATE-核苷單磷酸在細胞內酯酶的介導下水解生成不穩定的磷酸三酯，接著發生自發裂解，最后得到具有生物活性的核苷單磷酸。體外實驗表明，雙-SATE-磷酸三酯衍生物的抗病毒活性均高于未修飾的核苷。SATE法可廣泛用于核苷單磷酸類似物的修飾，如雙-（叔丁基-SATE）-阿糖胞苷（bis（tBuSATE）-araC）［22］，雙-（叔丁基SATE）-7-芳基取代的7-脫氮雜腺苷［23］等。

圖2 Bis-（SATE）-核苷磷酸三酯的結構Fig. 2 Structure of bis-（SATE）-nucleoside phosphotriester［21］

除了依靠酶解產生活化的核苷酸藥物外，還可以依賴化學裂解來激活核苷單磷酸藥物。CycloSal-核苷酸是由水楊醇與核苷單磷酸反應形成的三酯化合物，由苯基酯鍵和芐基酯鍵組成環化雙功能基團，以2′，3′-雙脫氫-2′，3′-雙脫氧胸腺嘧啶核苷單磷酸（d4TMP）為例，其結構如圖3所示，CycloSal-核苷酸在細胞內的裂解完全依賴pH驅動的化學裂解。由于水楊醇的修飾掩蔽了磷酸基團上的單鍵氧，因此得到的CycloSal-核苷酸呈中性，且親脂性大大提高。相比于2′，3′-雙脫氫-2′，3′-雙脫氧胸腺嘧啶核苷（d4T），CycloSal-d4TMP能夠通過被動運輸穿過細胞膜，并且成功地避開了第一步磷酸化，使得最終活化后的d4TTP的濃度顯著提高［24］。利用CycloSal的亞氯酸鹽與核苷反應可生成相應的CycloSal修飾的核苷單磷酸，基于此方法，Kamata等［25］合成了CycloSal修飾的4′-乙炔基-2′-脫氧腺苷（EdA）磷酸酯衍生物，其可有效地抑制HBV的復制，且對宿主細胞無毒。CycloSal-核苷酸的抗病毒活性不僅與核苷及取代基團的種類有關，其立體構象也顯著影響著抗病毒活性。以甲基-取代的CycloSal-d4TMP為例，其抗病毒活性強烈依賴于磷酸基團及CycloSal基團中甲基的手性，不同立體構象的CycloSal-d4TMP的抗病毒活性可以相差7-20倍［26］。

圖3 CycloSal-d4TMP的結構Fig. 3 Structure of CycloSal-d4TMP［24］

此外，氨基磷酸酯也是一類常用的核苷單磷酸修飾基團，以P-N鍵代替P-O鍵，結合氨基酸側鏈修飾，不僅能有效穩定磷酸基團，同時有助于增強藥物的抗病毒活性［27］。例如，芳香基和氨基磷酸甲酸酯修飾的無環核苷單磷酸對DNA病毒有很好的抗性［28］；通過氨基磷酸酯修飾合成的2′-β-甲基-2′-α-氟尿苷單磷酸（sofosbuvir，索非布韋）可用于治療丙型肝炎病毒（HCV）引起的疾病［29］；最近研究較多的瑞德西韋（remdesivir）是一種氨基磷酸酯修飾的單磷酸前藥，研究表明，其可有效地抑制SARSCoV-2在人肺細胞培養物中的復制［30］。

核苷單磷酸類似物胞內傳遞的實現推動了核苷酸類似物在體內的應用，通過在磷酸基上修飾親脂性基團，提高了核苷單磷酸類似物的穩定性和膜穿透性。雙-酰氧基甲基修飾的核苷單磷酸藥物中有兩種已用于臨床治療，替諾福韋酯（tenofovir dipivoxil）和阿德福韋酯（adefovir dipivoxil），可分別用于治療HIV和HBV感染。bis（SATE）修飾雖然可以提高核苷單磷酸藥物的親脂性，但是SATE基團裂解的過程中會產生副產物硫化乙烯，該物質對機體有毒性，因此bis（SATE）修飾的核苷單磷酸藥物的使用劑量應盡可能降低，以減小對機體的傷害。CycloSal-法合成的核苷單磷酸類似物的脫磷酸化過程是pH依賴型的，無需酶的參與，且只需要一個激活步驟，由于CycloSal-基團的雙功能性，合成過程中CycloSal-基團與核苷酸分子的比率為1∶1，從而沒有副產物的產生［12］，是修飾核苷酸類似物常用的一種方法。氨基酸側鏈修飾得到的核苷單磷酸前藥的抗病毒潛力與氨基酸種類有關，通過使用不同的氨基酸側鏈，可以調整核苷單磷酸前藥的生物活性。此外，CycloSal-法也可用于合成核苷雙磷酸類似物［16，31］，氨基磷酸酯修飾的核苷單磷酸前藥大部分也實現了在臨床上的應用［32-33］，因此，近幾年關于CycloSal法和氨基磷酸酯修飾的研究報道也較多。目前用于臨床研究或治療的核苷單磷酸藥物除了阿德福韋酯和替諾福韋酯外，還有帕拉德福韋（pradefovir）、索菲布韋（sofosbuvir）、CMX-001（brincidofovir）、貝西福韋（besifovir）、ODE（HDP）-（S）-HPMPA、MCC-478和USC-087等［34］。

2 核苷雙磷酸類似物

核苷單磷酸類似物雖然避開了細胞內的第一步磷酸化，但對于某些核苷酸類似物來說，第二步的磷酸化仍是限速步驟，所以對于核苷雙磷酸藥物的研究是很有必要的。例如，第一個通過的抗HIV藥物AZT，在AZT磷酸化為核苷三磷酸AZT-TP的過程中，由于第二步磷酸化（即AZT-DP的形成）仍是限速步驟，導致了AZT-MP的累積，因此產生了一些不良副作用［35］。然而，由于磷酸酐鍵的不穩定性，且磷酸基團只有在帶負電荷的狀態下才可以阻止親核攻擊而不裂解，因此核苷雙磷酸類似物的穩定性較差，易被血清內非特異性磷酸酶水解而發生脫磷酸；另外，帶負電荷的磷酸基團具有極性，這就導致核苷雙磷酸類似物不易穿過細胞膜［36］。早期有許多關于核苷雙磷酸類似物的研究，如利用雙甘油酯［37-38］、肉豆蔻酸［39-40］和CycloSal［41］來修飾β-磷酸上的單鍵氧，這些方法在一定程度上提高了核苷雙磷酸類似物的跨膜能力和穩定性，但其裂解的最終產物大部分都是核苷單磷酸，且伴隨著一些副產物的產生，使細胞內有效的核苷雙磷酸產物的濃度降低。

為保證磷酸酐鍵在最初的裂解反應中不受影響，采用酶解法取代化學裂解法來產生核苷雙磷酸（NDPs）［41］。Weinschenk等［36］采用DiPPro法合成核苷雙磷酸類似物，在β-磷酸上修飾兩個一樣的酰氧芐基酯，α-磷酸不修飾任何基團，因此核苷二磷酸類似物整體仍帶負電荷，從而阻止磷酸酐鍵的裂解，保持焦磷酸酐的穩定，且不影響細胞吸收。其結構和水解途徑如圖4所示（R為烷基或者烯基），其中，第一步在細胞內酯酶的催化下，修飾基團的酯基發生裂解產生負電荷，接著其內部繼續發生裂解，從而生成單酰氧基芐基修飾的核苷雙磷酸，最后，再通過同樣的機制生成最終產物NDPs。由于第一步酶催化的裂解不涉及磷酸酐鍵，因此可以成功地得到NDPs。

圖4 DiPPro-藥物的結構及水解路徑Fig. 4 DiPPro-drug’s structure and hydrolysis path［36］

由于細胞內酯酶含量高，因此核苷雙磷酸類似物的裂解活化主要發生在細胞內部。此法可用于合成一系列的核苷雙磷酸藥物，通過使用不同的取代基來調節核苷雙磷酸類似物的穩定性和親脂性［36-42］。但是，裂解產物中除了目標核苷雙磷酸外，也檢測到了少量的核苷單磷酸。因此，Weinschenk等［43］發展了第二代DiPPro-藥物，利用兩個不同的酰氧芐基酯來修飾β-磷酸，其中一個修飾基團是較短的烷烴鏈取代的酰氧芐基酯，酶解速度較快；另一個是較長的烷烴鏈取代的酰氧芐基酯或者苯基取代的酰氧芐基酯，以提高分子的親脂性，此DiPPro-藥物可以快速地裂解掉第一個修飾基團，從而使副反應產物NMPs減少，提高了藥物的選擇性。該方法有許多應用，如利用DiPPro法合成的T-1105核糖核苷雙磷酸類似物抑制RNA病毒合成的效果要優于T-1105，因此提高了其抗病毒效果［44］；除了用于抗病毒外，DiPPro法還可用于合成腺苷二磷酸核糖（ADPR）的前體物質，作為瞬時受體電位褪黑素2（TRPM2）的激活劑，DiPPro合成的ADPR衍生物可提高其激活效果，有望成為研究TRPM2的新方法［45］。

與核苷單磷酸藥物不同的是，發展核苷雙磷酸藥物的關鍵在于保持磷酸酐鍵的穩定性。利用DiPPro-法合成核苷雙磷酸類似物，僅對β-磷酸進行修飾，α-磷酸帶的負電荷可穩定磷酸酐鍵，基于酯酶裂解發生脫磷酸化，由于細胞內的酯酶含量高且該藥物在生理pH下可以保持很高的穩定性，因此可以保證NDPs只有在細胞內被釋放。通過選擇合適的取代基R，可以調節藥物的穩定性和親脂性，合成具有親脂性的、帶部分電荷的核苷雙磷酸類似物，從而實現核苷雙磷酸藥物的傳遞。核苷雙磷酸類似物適用于前兩步磷酸化為限速步驟的核苷類似物，對于缺乏核苷雙磷酸激酶活性的靶細胞來說，核苷雙磷酸藥物的抗病毒效果就會大大降低，因此只有傳遞核苷三磷酸類似物才可以解決此問題。

3 核苷三磷酸類似物

核苷單磷酸和雙磷酸類似物的開發逐步實現了磷酸化形式核苷的遞送，成功地避開了一步或兩步磷酸化限速步驟，但釋放的核苷酸仍需要通過細胞激酶進一步磷酸化成為核苷三磷酸才可發揮作用［46］。因此，直接開發核苷三磷酸藥物具有重大優勢和意義，它既能提高到達細胞內的活性藥物濃度，也能減少細胞磷酸化過程中副產物的生成，從而有效提高治療效果。然而，由于三磷酸基團帶有4個負電荷，不易穿過細胞膜；且三磷酸基含有兩個不穩定的磷酸酐鍵，其化學穩定性差，易被磷酸酶水解；同時，化學法合成核苷三磷酸藥物也比較困難［47］。因此，核苷三磷酸類似物的發展極具挑戰。

1995年，Bonnaffé等［48］首次提出制備酰基修飾的核苷三磷酸，通過酰基化增加其親脂性，從而更易跨越細胞膜。以抗HIV的胸腺嘧啶核苷類似物d4T和AZT為研究對象，利用酰基化的焦磷酸與核苷磷酰嗎啉反應制得了酰基化的NTPs。此外，Kreimeyer等［49］利用肉豆蔻酸與氯甲酸乙酯反應生成的酸酐與ADP或GDP反應，制備了嘌呤核苷三磷酸類似物。然而，通過以上兩種方法制得的核苷三磷酸類似物產量極低，且易被水解。

隨后，研究人員嘗試僅對NTPs上的γ-磷酸進行酯化修飾，保留α-，β-磷酸的負電荷，在提高三磷酸基團的穩定性的同時，增加了NTPs的親脂性，有利于其穿過細胞膜，使用不同的酰基酯可以調節NTPs的親脂性、膜穿透性和穩定性［46，50］。Warnecke等［31］提出通過酯化反應合成酰氧芐基修飾的NTPs（TriPPPro法），利用不同的取代基團來調節核苷三磷酸類似物的親脂性和化學穩定性，當該核苷三磷酸類似物進入細胞后，在酯酶作用下形成核苷三磷酸。該研究團隊以d4T為研究對象，首先利用CycloSal技術合成了d4TDP，隨后，此d4TDP與一系列含有兩個相同的酰氧芐基修飾的亞磷酰胺單體反應，最后制得酰氧芐基修飾的d4TTP藥物，其結構如圖5所示（R為烷基、烯基、氧烷基和氨基烷基）［46］。

圖5 酰氧芐基修飾的d4TTPFig. 5 Acyloxybenzyl modified d4TTP［46］

但是，該方法中核苷三磷酸類似物的最終產量仍然受到NDPs合成產率的限制。鑒于NMPs的制備相對NDPs較容易，該團隊又研究了基于NMP和P，P-雙-（4-壬酰氧芐基）修飾的焦磷酸反應生成TriPPPro-核苷酸類似物［9］。首先，采用CycloSal-法合成核苷單磷酸類似物［31］，接著與P，P-雙-（壬酰氧芐基）修飾的焦磷酸反應從而制得TriPPPro-核苷三磷酸類似物。利用此方法，Weising等［51］合成了抗HIV藥物阿巴卡韋（abacavir，ABC）的親脂三磷酸前藥，活化后的ABCTP可作為dATP的競爭者參與DNA合成。

由于含碳酸酯的TriPPPro-核苷類似物的化學穩定性要高于含酰氧基的TriPPPro-核苷類似物，因此，Meier等［52］分別合成了酰氧芐基（acyloxybenzyl，AB，含酯基）和碳酸酯芐基（alkoxycarbonyloxybenzyl，ACB，含碳酸酯）修飾的核苷三磷酸類似物。通過研究γ-AB-ACB-d4TTPs和γ-ACB-ACB-d4TTPs在PBS溶液中的水解情況發現，γ-ACB-d4TTP的半衰期顯著高于γ-AB-d4TTP，表明含碳酸酯修飾基團的藥物具有更高的化學穩定性。此外，在γ-磷酸上修飾親脂性的、生物可降解的ACB基團，增加核苷三磷酸的親脂性，便于其穿過細胞膜。與γ-（AB，ACB）-d4TTPs不同，用兩個不同長度的酰氧芐基修飾的d4TTPs在磷酸鹽緩沖液和CEM細胞提取物中的水解速率并無差別［53］；除了在γ-磷酸上修飾可降解的酰氧芐基外，還可修飾非裂解的烷基（alkyl），合成的γ-（AB，alkyl）-d4TTP在酯酶的作用下生成γ-alkyl-d4TTP，其可選擇性地作為HIV逆轉錄酶的底物合成到DNA鏈中終止病毒復制，這種選擇性使γ-（AB，alkyl）-核苷三磷酸特異性地作用于感染病毒的細胞中［54］。

雖然TriPPPro前藥的磷酸基團仍帶負電荷，但通過在γ-磷酸上修飾親脂的、生物可降解的基團，以提供足夠的親脂性從而跨越細胞膜，并生成高含量的核苷三磷酸。通過在γ-磷酸上進行非對稱的修飾，不僅可以同時提高TriPPPro前藥的穩定性和親脂性，而且可以實現修飾基團的逐步裂解，得到目標中間體。TriPPPro法合成的核苷三磷酸類似物可以完全避開細胞內磷酸化限速步驟，極大地提高了核苷酸藥物的抗病毒效果，并且可以將無活性的核苷轉化為有效的核苷酸類似物，在抗病毒和抗腫瘤應用中均有很好的應用前景，近幾年的研究也主要集中在非對稱修飾的TriPPPro前藥［53-55］，未來還需要進一步研究更加穩定、親脂的核苷三磷酸前藥，增強非天然的NTPs的在體內的傳遞效果，從而提高抗病毒核苷酸藥物的治療效果。

4 總結與展望

核苷酸類似物有很好的應用前景，本文概述了近幾十年來抗病毒核苷酸類似物前藥的研究進展，分別介紹了三類核苷酸類似物及其合成修飾方法，其主要通過對核苷酸進行磷酸化修飾各種親脂性基團，合成可穿膜的具有活性的核苷酸類似物，在實現藥物穿膜進入細胞的同時有效地緩解了血液中酶的脫磷酸作用，從而提高了進入細胞內核苷酸藥物的濃度，最終生成具有活性的核苷三磷酸，從而發揮抗病毒作用。與核苷類似物不同，磷酸化修飾的核苷酸類似物可以避開細胞內的磷酸化限速步驟，有效地彌補了核苷類似物在應用中的局限性，提高了核苷酸藥物的抗病毒效果，在一定程度上可以減少抗病毒藥物的使用劑量，從而降低了機體對藥物的敏感性。總的來說，核苷酸類似物具有高效的抗病毒應用潛力。

核苷酸藥物的開發可以結合不同修飾基團的特點，如氨基磷酸酯基的穩定性和芐基的親脂性，利用不同修飾基團對核苷酸進行磷酸化修飾，以提高核苷酸類似物的治療效果。目前對于核苷酸類似物的開發研究比較多，但對于核苷酸類似物的細胞吸收機制以及吸收數量的研究還較少，修飾基團的種類對于抗病毒活性的影響也需要進一步的研究，通過不斷優化修飾基團以達到更好的治療效果。目前大多數的核苷酸類似物的裂解主要依靠酶解，核苷酸類似物在細胞內和血液中穩定性的差別大小決定了核苷酸類似物是否可以成功應用于體內，或許需要開發新的激活機制以提高核苷酸藥物在血液中的穩定性和細胞內的裂解活性。另外，為了降低核苷酸藥物對機體的毒副作用，核苷酸藥物的使用劑量與抗病毒活性的關系還需要不斷探索。

由于長期使用抗病毒藥物會引起病毒的耐藥性，同時為了降低機體對藥物的敏感性，未來不僅需要進一步開發新型的、具有更高藥效的抗病毒核苷酸類似物，更重要的是聚焦藥物的低毒性、高水溶性和高特異性，開發具有低細胞毒性的藥物遞送系統，降低抗病毒藥物的使用劑量，以減小機體對藥物的敏感性。根據體內病毒水平選擇不同強效的核苷酸藥物，在病毒產生耐藥性前換用另一種核苷酸藥物，或者通過聯合使用核苷酸藥物，以降低病毒的耐藥性，當然，規范用藥，選擇適當的核苷酸藥物也是避免病毒產生耐藥性重要措施。目前，超過100種抗病毒藥物正在進行臨床試驗，但是大多數只針對一種病毒感染，新型的核苷酸藥物還應具有針對多種病毒類型的廣譜性。最后，要實現核苷酸類似物的廣泛應用還需要進一步研究，如毒性試驗，藥物代謝動力學研究，臨床試驗以及如何實現大規模的生產等。