高效液相色譜法測定燙發類化妝品中巰基乙酸的方法學驗證

嚴筱楠，高 霞，高 娟

(榆林市藥品檢驗所，陜西 榆林 719000)

隨著人民生活水平的提高，人們對自我形象管理意識越來越強，燙發已成為提升自我形象的一種普遍風尚，因此燙發類產品的質量直接關系到消費者的使用安全。巰基乙酸及其鹽類作為燙發類產品的主要功效成分，通過使頭發中角朊的多肽鏈上側鏈的二硫化物鍵斷裂，致使頭發中胱氨酸的部分二硫基還原至半胱氨酸，發生一系列化學變化，使頭發柔軟，起到頭發卷曲定型的功效[1-3]，但其毒性較大，易對人體皮膚和多種組織器官造成損傷[4-7]，《化妝品安全技術規范》(2015年版，以下簡稱安全技術規范)將其列為限用物質，限度為一般用總量≤8%(以巰基乙酸計)，專業用總量≤11%(以巰基乙酸計)[8]。本文結合實際檢測工作條件，通過對方法的檢出限、精密度、重現性和回收率進行考察，證明該方法操作簡單，并具有較高的靈敏度和選擇性，可滿足化妝品的分析要求。

1 儀器與試藥

Agilent 1260Ⅰ高效液相色譜儀(紫外檢測器)，美國安捷倫公司；MS205DU電子天平，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；旋渦混勻器，德國IKA公司；超聲波清洗器，浙江昆山超聲儀器有限公司；PURELAB flex 2超純水機，英國ELGA公司。

巰基乙酸對照品(STBF3702V，純度99.1%)，乙腈(色譜純)，均為Sigma-Aldrich西格瑪奧德里奇(上海)貿易有限公司；磷酸二氫鉀(分析純)，鹽酸(分析純)，磷酸(優級純)，均為天津市科密歐化學試劑有限公司；測試樣品為市售三種不同品牌燙發類化妝品。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

WelchC18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，檢測波長：215 nm，流速：1.0 mL/min，進樣量：20 μL，柱溫：30 ℃，流動相：乙腈-0.01 mol/L KH2PO4(磷酸調節pH至2.5)(8:92)。

2.2 樣品處理

精密稱取樣品0.5 g(精確到0.0001 g)于25 mL具塞刻度管中，加入20 mL乙腈水溶液(乙腈:水10:90)，渦旋使樣品分散，超聲(功率：400 W)提取15 min，取出，冷卻至室溫后用乙腈水溶液定容至25 mL刻度，混勻，取上層溶液，經0.45 μm有機濾膜過濾，濾液用乙腈水溶液稀釋10倍，稀釋液作為待測溶液，備用。

2.3 方法學考察

2.3.1 標準曲線

準確稱取巰基乙酸對照品0.13879 g置100 mL棕色容量瓶中，用10%乙腈水混合溶液溶解定容至刻度，配置成1000 μg/mL標準儲備液，常溫保存，3 d內穩定。精密吸取上述標準儲備溶液，分別配制成0.687675 μg/mL、1.37535 μg/mL、2.75070 μg/mL、6.87675 μg/mL、13.7535 μg/mL、27.5070 μg/mL、68.7675 μg/mL、137.535 μg/mL、275.070 μg/mL的巰基乙酸標準系列溶液，臨用時現配。混勻后，經 0.45 μm濾膜過濾，進樣測定。以峰面積對濃度回歸得標準曲線，Y=3.705C-0.685，相關系數為0.99999。結果表明，巰基乙酸在0.687675～275.070 μg/mL范圍內，線性關系良好。

2.3.2 檢出限與定量下限

取系列標準溶液最低濃度點(std1)，進樣，按信噪比S/N≥3計算，巰基乙酸檢出限為0.003 μg，按信噪比S/N≥10計算，巰基乙酸定量限為0.012 μg。

2.3.3 精密度

取巰基乙酸系列標準溶液的中間點(std5)，在相同的條件下，連續進樣9次，計算峰面積的相對標準偏差為0.3%。

2.3.4 回收率

選擇其中一批巰基乙酸含量較低的燙發類化妝品(A品牌，批號：20190828)為樣品，加入不同量的巰基乙酸標準儲備溶液，按照3.2的方法處理樣品，根據3.3.1的標曲進行測定，計算回收率，結果見表1，符合回收率要求。

表1 巰基乙酸加標回收率結果Table 1 The recovery rate of Thioglycolic acid

2.3.5 重復性

按照3.2的樣品處理方法，處理樣品(B品牌，批號：20191016)6份，測定樣品中巰基乙酸的含量，結果見表2，表明方法重復性良好。

表2 巰基乙酸重復性測定結果Table 2 Repeatability test results

2.3.6 實際樣品的測定

按照本文的方法對市售不同品牌燙發劑(生化燙、離子燙)中巰基乙酸進行檢測，主峰與相鄰雜質峰分離度滿足要求，基質干擾小(見圖1～圖3)，實驗結果與樣品標簽標識成分吻合，均未超過安全技術規范規定的限度，表明此方法可用于燙發類化妝品中巰基乙酸的測定。

圖1 樣品A色譜圖Fig.1 The chromatogram of sample A

圖2 樣品B色譜圖Fig.2 The chromatogram of sample B

圖3 樣品C色譜圖Fig.3 The chromatogram of sample C

3 結 論

(1)按照安全技術規范，流動相為乙腈-0.01 mol/L KH2PO4(磷酸調節pH至2.5)比例為10:90時，部分樣品中巰基乙酸主峰與相鄰雜質峰的分離度不滿足要求，通過減少有機相比例，分離度滿足要求，故流動相比例調整為乙腈-0.01 mol/L KH2PO4(磷酸調節pH至2.5)(8:92)。

(2)與離子色譜法比較，高效液相色譜法測定巰基乙酸的靈敏度更高，檢出限低、線性范圍寬[9]，本文所建立的測定方法，比安全技術規范中線性范圍更寬，跨度為2000倍，且回收率試驗符合要求，可以滿足日常化妝品監管的要求。