飼料中添加天蠶素抗菌肽對南美白對蝦免疫功能、抗病力的影響

房 媛，董林娟，王 孟，張龍龍

（陜西服裝工程學院，陜西西安 712046）

南美白對蝦是我國海水養殖的重要對象，其肉質鮮美、營養豐富、經濟價值高，深受人們的喜愛（羅智偉等，2019；張小利等，2019）。南美白對蝦的生長速度快，繁殖數量高，且后代存活率高，已成為我國市場重要的水產品之一，其市場具有廣闊的發展前景（沈春蕾等，2019）。近年來，由于南美白對蝦養殖規模不斷增大，養殖戶濫用抗生素預防疾病，導致南美白對蝦的耐藥性增強，造成水體大量污染，嚴重威脅水產品安全。與抗生素相比，天蠶抗菌肽具有蛋白分子小、安全、健康、性質穩定等優勢，對宿主內細胞的影響程度較小。而天蠶素抗菌肽是一種常見的抗菌肽，已作為飼料添加劑在魚類飼料中使用，顯著提高了魚類的生長發育（董俊等，2020）。

目前，抗菌肽作為飼料添加劑被廣泛應用于魚類養殖中，發揮了良好的作用（羅陽瑞等，2020）。研究結果表明，飼料中添加抗菌肽可顯著提高魚類的生長性能，增強機體免疫功能（張耀文等，2020）。盡管抗菌肽作為飼料添加劑在魚類中的應用比較廣泛，但抗菌肽在南美白對蝦養殖中的研究較少；本文主要以南美白對蝦為研究對象，分析飼料中天蠶抗菌肽的添加水平對南美白對蝦免疫功能、抗病力的影響，為天蠶抗菌肽在南美白對蝦養殖的合理使用量提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料天蠶素抗菌肽、玉米蛋白粉、進口魚粉、魚油、花生粕及玉米，礦物質原料和維生素原料均購置于嘉康飼料有限公司，南美白對蝦來自當地養殖場。

1.2 飼料配方設計試驗飼料成分如表2所示，南美白對蝦飼料配方中天蠶抗菌肽的添加水平為0%、1%、2%、3%、4%和5%。稱取所有南美白對蝦飼料原料后，測定其飼料配方中營養元素含量，放入飼料破碎儀破碎，并加入水混合，制成2 mm的顆粒料，放入烘干箱干燥處理，放入4℃冰箱備用。

表2 飼料中添加天蠶素抗菌肽對南美白對蝦的生長性能影響

1.3 飼養管理方法試驗的南美白對蝦均來自于試驗和教學人工養殖基地。養殖試驗在教學基地室內養殖循環桶內進行，將（2.36±0.11）g的南美白對蝦隨機分為對照組和試驗組，對照組飼喂常規飼料，試驗組在常規飼料中添加天蠶素抗菌肽，每組4個重復，每組重復44尾。正式飼養試驗開始之前對循環養殖桶進行消毒處理，南美白對蝦放入暫養池內暫養2周。飼養期間，每天定時投喂適量餌料，每天3次，根據天氣、水溫、攝食狀況及時調整餌料，并記錄南美白對蝦的養殖情況，定時檢測養殖水質狀況，包括溶氧（＞6 mg/L），氨氮，pH（7.9～8.5）和水溫（26.8℃），鹽度為25%。飼養試驗期間定期換水，溶氧程度達到9～15 mg/L，養殖試驗為期8周。

表1 試驗飼料配方組成 %

1.4 生長性能指標飼養試驗結束后，測定南美白對蝦的初體重和末體重，依據相應的公式計算南美白對蝦生長發育情況，具體計算公式如下：

1.5 免疫指標測定飼養試驗結束后，將南美白對蝦禁食24 h，靜脈采血10 mL，采用相關酶聯免疫吸附試劑盒測定南美白對蝦血清的酸性磷酸酶（ACP），過氧化物酶（POD），超氧化物歧化酶（SOD）的濃度，檢測方法參照試劑盒說明書。

1.6 腸道酶活指標測定南美白對蝦飼養周期結束后，將試驗組中分別取出3條健康的南美白對蝦，取出南美白對蝦腸道中的沉積物，采用試劑盒檢測南美白對蝦腸道酶活指標，包括胃蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶。

1.7 數據分析試驗數據采用Excel表格記錄，用SPSS 22.0軟件進行方差分析，P＜0.05表示組間差異顯著。

2 試驗結果

2.1 天蠶素抗菌肽對南美白對蝦的生長性能影響由表2可知，隨著飼料中天蠶素抗菌肽添加水平的升高，南美白對蝦的增重率和特定生長率隨著飼料中天蠶素抗菌肽含量的增加先升高后下降，3%組南美白對蝦的增重率和特定生長率最大，為348.2%和3.06%，與對照組有顯著差異（P＜0.05）；南美白對蝦的餌料系數與飼料天蠶素抗菌肽呈現負相關。隨著飼料中天蠶素抗菌肽的添加水平不斷上升，3%組南美白對蝦的蛋白質沉淀率顯著高于對照組（P＜0.05），其余組南美白對蝦的蛋白質效率與對照組無顯著差異（P＞0.05）。飼料中不同添加水平天蠶素抗菌肽對南美白對蝦攝食率和存活率無顯著影響（P＞0.05）。

2.2 天蠶素抗菌肽對南美白對蝦的免疫指標影響由表3可知，隨著飼料中天蠶素抗菌肽添加水平的不斷增加，3%組南美白對蝦的ACP含量達到最大水平，為89.69 ng/L，SOD含量達到最大水平，為27.23 U/ml，與對照組有顯著差異（P＜0.05），2%組和4%組南美白對蝦的ACP含量無顯著差異，與對照組有顯著差異（P＜0.05）；隨著飼料中天蠶素抗菌肽添加水平的不斷增加，3%組南美白對蝦的POD含量達到最大水平，為3.54 ng/L，與對照組有顯著差異（P＜0.05）；2%組和4%組南美白對蝦的POD含量類似，與對照組有顯著差異（P＜0.05）。

表3 飼料中添加天蠶素抗菌肽對南美白對蝦的免疫指標影響

2.3 天蠶素抗菌肽對南美白對蝦的腸道酶活指標影響由表4可知，隨著飼料中天蠶素抗菌肽添加水平的不斷上升，3%組南美白對蝦的淀粉酶、胃蛋白酶和脂肪酶含量最高，分別為1.99、3.34和4.54 U/mg，與對照組差異顯著（P＜0.05）；4%組和5%組南美白對蝦的胃蛋白酶、淀粉酶的含量無顯著差異，與對照組有顯著差異（P＜0.05）；1%組和2%組南美白對蝦的脂肪酶與對照組有顯著差異（P＜0.05）。

表4 飼料中添加天蠶素抗菌肽對南美白對蝦的腸道指標影響 U/mg

3 討論

3.1 飼料中添加天蠶素抗菌肽對南美白對蝦生長性能的影響天蠶素抗菌肽是一種廣譜抗菌藥物，能有效抵御外界病原菌的侵襲，參與體內的免疫反應，促進淋巴細胞的分化，增強機體免疫反應，改善腸道內部酶活性，促進腸道內部食物營養物質的消化，有利于動物的生長發育（李波和韓文瑜，2014）。在本研究中，飼料添加3%的天蠶素抗菌肽可顯著提高南美白對蝦的特定生長率和增重率，提高南美白對蝦的生長發育速度。黃小紅等（2018）研究發現，飼料中天蠶素抗菌肽的添加水平為500mg/kg可顯著提高草魚的生長發育速度，顯著提高草魚的特定生長率和增重率。王自蕊等（2014）研究發現，飼料中添加150mg/kg的天蠶素抗菌肽可顯著提高湘云鯽的特定生長率和增重率，有利于湘云鯽的生長發育，一旦飼料中天蠶素抗菌肽的添加水平超過150mg/kg，湘云鯽的生長發育將會受到抑制。因此，南美白對蝦的特定生長率和增重率與飼料中天蠶素添加水平息息相關。

本研究中，適宜的天蠶素抗菌肽添加水平可以促進南美白對蝦腸道內部消化酶的活性，促進腸道消化速度，從而降低南美白對蝦的餌料系數。隨著飼料中天蠶素抗菌肽添加水平的不斷上升，3%組南美白對蝦的蛋白質沉淀率達到最高，提示3%添加水平有利于南美白對蝦的蛋白質沉積，有利于南美白對蝦的營養累積，可加快對蝦的生長發育速度，降低飼料成本。且飼料中抗菌肽的添加水平對南美白對蝦的存活率和攝食率不存在顯著影響，提示飼料中抗菌肽與南美白對蝦的攝食和存活率無關聯。

3.2 飼料中添加天蠶素抗菌肽對南美白對蝦的免疫功能、抗病力的影響南美白對蝦腸道內消化酶對南美白對蝦的消化吸收有密切聯系，有助于營養物質的消化、吸收，提高飼料利用率。胃蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶是腸道內重要的消化酶之一，可反應腸道內部的消化能力（黃小紅等，2018；王自蕊等，2014）。在本研究中，隨著飼料中天蠶素抗菌肽添加水平的上升，3%組南美白對蝦的淀粉酶和胃蛋白酶含量最高，提示飼料中添加適量的天蠶素抗菌肽有助于刺激南美白對蝦腸道消化酶的分泌，顯著提高其消化酶活性，從而提高腸道內營養物質的利用率，顯著促進南美白對蝦的營養物質沉積，有利于南美白對蝦的生長發育。

ACP是參與動物機體免疫應答的重要活性物質，POD可參與機體內部的免疫反應，超氧化物歧化酶有效清除體內自由基的作用，是反映動物健康狀態的重要指標。在本研究中，隨著飼料中天蠶素抗菌肽添加水平的不斷增加，3%組南美白對蝦的ACP、SOD、POD含量最大，且免疫水平不斷增強，提示飼料中添加適量的天蠶素抗菌肽有助于提高南美白對蝦的免疫力，提高南美白對蝦的免疫耐受能力和環境適應能力。飼料中天蠶素抗菌肽與內部黏膜免疫發生作用，與外來病原發生作用機制，從而刺激機體的免疫反應，增強機體免疫功效，清除外來病原菌。

4 結論

飼料中添加天蠶素抗菌肽可顯著提高南美白對蝦的增重率和特定生長率，提高動物的生長發育速度，有利于促進腸道消化酶的分泌，促進消化吸收，增強南美白對蝦的免疫活性，提高免疫抗病力。在本次試驗中，飼料中添加3%的天蠶素抗菌肽有利于南美白對蝦的生長發育，增強了南美白對蝦的抗病力。