食用玫瑰和土壤中啶酰菌胺殘留量的測定研究

姚福泉，侯祿懷，趙 云，孟文俊，張 瓊，和順琴*

（1.中國建筑材料工業地質勘查中心云南總隊，云南昆明 650500；2.云南醫藥健康職業學院，云南昆明 650106）

食用玫瑰含有豐富的氨基酸、膳食纖維、維生素及各種微量元素，具有很高的營養保健價值，可作食用和藥用[1]。云南省是食用玫瑰的主要產區，經不斷發展已形成完整的產業鏈，其已被廣泛應用于鮮花餅、鮮花醬、花茶等產品的加工，帶來了明顯的經濟、社會效益[2]。但受氣候環境、種植模式、區域分布等因素的影響，食用玫瑰的病害發生日益頻繁，危害嚴重。在玫瑰花開時節氣候環境普遍低溫、高濕，易引起灰霉病、根腐病等病蟲害的發生[3]。啶酰菌胺（Boscalid）是德國巴斯夫公司開發的一種新型煙酰胺類內吸性殺菌劑，是一種低毒殺菌劑[4]。其作用機制是通過葉面滲透在植物中轉移，抑制線粒體琥珀酸酯脫氫酶的生成，阻礙三羧酸循環，使氨基酸、糖缺乏，能量減少，干擾細胞的分裂和生長，因此對植物病害具有防治作用。啶酰菌胺殺菌譜較廣，幾乎對所有類型的真菌病害都有活性，對防治白粉病、灰霉病、菌核病和各種腐爛病、褐腐病和根腐病等非常有效，對其他藥劑的抗性菌亦有效，與多菌靈、速克靈等無交互抗性[5-7]。其主要用于油菜、葡萄、草莓、果樹、蔬菜和大田作物等病害的防治，對作物安全、活性高、滲透傳導作用優良，是一種應用前景廣闊的殺菌劑[8-9]。

啶酰菌胺為目前最常用的琥珀酸脫氫酶抑制劑（Succinate Dehydrogenase Inhibitors，SDHIs）化學農藥，具有低毒、高效的優點，但目前對于食用玫瑰病蟲害防治方面的應用尚未見報道[10-14]。考慮到食用玫瑰的實用性及病蟲害影響，本文對云南省安寧市八街鎮種植的食用玫瑰進行施藥處理，對啶酰菌胺在食用玫瑰和土壤中的殘留量檢測方法進行研究，以期為探索啶酰菌胺產品在食用玫瑰灰霉病等病蟲害防治中的可行性應用奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

氣相色譜儀（Agilent 7890A，配ECD 檢測器）；色譜柱（Agilent，HP-5，30 m×0.32 mm，0.25 μm）；旋轉蒸發儀（BUCHI R-300 型）；粉碎機；低速大容量離心機（TDL-5-A，上海安亭），50 mL 塑料離心管；超聲波萃取器。

啶酰菌胺標準品（純度≥99.97%，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；50%啶酰菌胺水分散粒劑，巴斯夫?股份公司；所用有機溶劑、無水硫酸鈉、氯化鈉等均為分析純（市售）。

1.2 試驗方法

1.2.1 田間試驗方法

供試作物為滇紅玫瑰（Dian Hong Rose），露天種植，試驗地點為云南省昆明市安寧市八街鎮，試驗時間 為2021 年4 月14 日至2021 年5 月15 日。種植期間分別設置低劑量（375 g a.i.·hm-2）、高劑量（750 g a.i.·hm-2）以及3 次和4 次施藥處理，施藥間隔期為5 d，并設空白對照。最后一次施藥后3 d、5 d、7 d 時分別取玫瑰莖葉、花瓣和土壤樣品測定啶酰菌胺殘留量。

1.2.2 樣品處理

將玫瑰花瓣、莖葉及土壤充分粉碎后，取10 g樣品至50 mL 磨口三角瓶中，加入20 mL 乙腈（0.1%醋酸），密封后置于超聲波萃取器中提取5 min。靜置5 min 后加入1 g NaCl，再置于超聲波萃取器中提取5 min。萃取液轉移至離心管，于6 000 r·min-1離心5 min，取10 mL 上清至三角瓶中，無水硫酸鈉干燥后，過濾，取1 mL 濾液至樣品瓶備用。

1.2.3 標準曲線繪制

將啶酰菌胺標準品溶解于乙腈，配制100 mg·L-1的母液。用乙腈將啶酰菌胺母液稀釋成0.01 mg·L-1、0.05 mg·L-1、0.10 mg·L-1、0.50 mg·L-1、1.00 mg·L-1和5.00 mg·L-1的系列標準工作溶液。

1.2.4 色譜檢測條件

參考已報道的條件[15-16]并加以優化確定本次色譜檢測條件，具體參數為氣相色譜儀（Agilent 7890A，ECD 檢測器）；色譜柱（Agilent，HP-5， 30 m×0.32 mm，0.25 μm）；恒壓模式：100 kPa；升溫程序：初始柱溫150 ℃，保持1 min，以10 ℃·min-1升溫至260 ℃，保持10 min；進樣口溫度：260 ℃；檢測器溫度：280 ℃；進樣量：1.0 μL；進樣模式：分流進樣，分流比1 ∶10；載氣：高純氮氣（純度≥99.999%），流量：2 mL·min-1；ECD 尾吹： 30 mL·min-1。

2 結果與分析

2.1 標準曲線

測定系列標準工作溶液，以啶酰菌胺濃度為x軸，峰面積為y軸，繪制標準曲線（圖1），并進行回歸分析。啶酰菌胺在0.01 ～5.00 mg·L-1線性關系良好，回歸方程為y=854 035x+9 365.6，R2=0.999 5。啶酰菌胺的最低檢出濃度為0.01 mg·kg-1。

圖1 啶酰菌胺標準工作曲線

2.2 方法回收率及精密度試驗結果

將不同濃度的啶酰菌胺標樣溶液分別加入未施用啶酰菌胺的玫瑰花瓣、莖葉及土壤空白樣品中，進行樣品處理，添加水平分別為0.01 mg·kg-1、 1.00 mg·kg-1、5.00 mg·kg-1，每個添加濃度重復檢測5 次，計算方法回收率，結果如表1 所示。結果表明，使用本方法測得啶酰菌胺在玫瑰花瓣、莖葉及土壤中的回收率均分別為94.80%～97.00%、94.69%～96.71%、94.25%～100.14%，變異系數分別為1.42%～7.05%、2.29%～4.41%、1.14%～4.99%。本方法準確度和精密度符合農藥殘留分析的要求。

表1 啶酰菌胺在食用玫瑰及土壤中的加標回收率及精密度試驗結果（n=5）

2.3 啶酰菌胺在玫瑰和土壤中的殘留檢測結果

最后一次施藥后3 d、5 d、7 d 時分別取玫瑰莖葉、花瓣和土壤，按照1.2.2 樣品處理方法進行前處理，根據1.2.4 色譜檢測條件進行檢測，試驗共重復3 次，結果如表2 所示。施用量為750 g a.i.·hm-2時，啶酰菌胺在玫瑰花瓣、莖葉和土壤中的殘留量整體高于施用量為375 g a.i.·hm-2時的殘留量。施藥次數對啶酰菌胺在玫瑰花瓣、莖葉和土壤中的殘留量無明顯影響。《食品安全國家標準 食品中農藥最大殘留限量》（GB 2763—2021）規定啶酰菌胺在黃瓜中的最大殘留量（Maximum Residue Limit，MRL）為5 mg·kg-1，在蘋果中的最大殘留量為2 mg·kg-1，草莓和甜瓜等水果中的最大殘留量為3 mg·kg-1[17-18]。本研究開展的試驗中，在最后一次施用375 g a.i.·hm-2和750 g a.i.·hm-2劑量的啶酰菌胺水分散粒劑后3 d，玫瑰花瓣中啶酰菌胺殘留量多大于水果的MRL；最后一次施藥5 d后，啶酰菌胺殘留量有所下降，但仍高于蘋果的MRL；最后一次施藥7 d 后，玫瑰花瓣中的農藥殘留低于水果中（除蘋果外）啶酰菌胺的MRL。

表2 啶酰菌胺在食用玫瑰和土壤中的最終殘留量（n=3）

3 結論

本文建立了食用玫瑰和土壤中啶酰菌胺殘留量的氣相色譜分析方法。該方法對啶酰菌胺的最低檢出濃度為0.01 mg·kg-1，在0.01 ～5.00 mg·L-1線性關系良好，相關系數R2為0.999 5，方法的回收率和精密度符合農藥殘留分析要求。對田間試驗的食用玫瑰花瓣、莖葉和土壤中啶酰菌胺殘留量進行檢測，最后一次施藥7 d 后，玫瑰花瓣中的農藥殘留低于水果中（除蘋果外）啶酰菌胺的MRL。本方法可應用于食用玫瑰和土壤中啶酰菌胺的殘留量檢測及后期消解動態研究。