妊娠期糖尿病孕婦IL-1β和IL-10基因多態性分析

林 鳳，張利娜

陜西省渭南市婦幼保健院產科，陜西渭南 714000

妊娠期糖尿病(GMD)是指妊娠期間首次發生或首次發現的糖耐量異常[1-2]，是孕期常見的一種疾病，臨床研究顯示，GMD在世界各國妊娠期女性中發病率為1.1%～10.4%，且近年來發病率呈逐年增加趨勢[3-4]。GMD的具體發病機制尚不明確，普遍認為與妊娠期間胎盤產生的生乳素、糖皮質激素、孕激素及垂乳素水平增加，抑制胰島素分泌，造成機體內胰島素功能降低有關[5]。GMD可增加流產、胎兒畸形、妊娠期高血壓、羊水感染及早產等的發生率，嚴重影響孕婦及胎兒的健康，因此，早期診斷及預防GMD的發生意義重大[6]。炎癥細胞因子介導的免疫反應在GMD的發生和發展中發揮重要作用，GMD孕婦血清白細胞介素(IL)-1β和IL-10水平較健康人明顯升高[7]。單核苷酸多態性(SNP)為基因組水平上由單個核苷酸變異所引起的DNA序列多態性，其廣泛存在于生物基因組中，也是當前臨床與科研實驗中比較常見的分子標記。隨著測序技術的普及與功能基因組學研究的進步，越來越多的疾病相關易感基因被挖掘出來，已有研究發現與糖尿病發病相關的部分SNP也與GMD的發病相關[8]。本研究探討了GMD孕婦IL-1β和IL-10的基因多態性情況，為臨床早期診斷及干預提供依據，從而降低GMD的發生率，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年2月至2021年6月在本院建檔分娩的488例孕婦作為研究對象。根據GMD發生情況分為發生GMD(GDM組)18例，未發生GMD(非GDM組)470例。納入標準：均順利完成健康體檢；均在本地區居住且無長期外地居住史；本院倫理委員會批準了此研究；年齡20～45歲；單胎妊娠；孕20～28周；均自愿參與本研究并簽署知情同意書。排除標準：患有嚴重的心腦血管、肝腎肺等器官組織疾病；未完成建檔分娩；孕期搬家遷出本地區；既往有2型糖尿病的孕婦；妊娠前曾服用過影響糖代謝藥物者；合并甲狀腺功能低下或亢進者；精神疾病患者等。

1.2方法

1.2.1血糖檢測 所有孕婦均給予75 g口服葡萄糖耐量試驗，禁食6～8 h后采集空腹靜脈血4 mL，然后將75 g葡萄糖粉充分溶入300 mL溫開水，一次喝完，然后在2 h后再次進行靜脈抽血檢查。空腹血糖(FBG)<5.1 mmol/L、餐后2 h血糖<8.5 mmol/L為正常水平，任意一項血糖水平異常即可診斷為GMD。

1.2.2IL-1β和IL-10基因多態性檢測 采集所有孕婦空腹靜脈血2～3 mL，分離血清后采用酶聯免疫吸附試驗檢測血清IL-1β和IL-10水平。然后提取基因組DNA，本研究中IL-1β rs231362和IL-10 rs2283194位點的聚合酶鏈反應擴增引物及單堿基延伸引物采用NCBI的primer軟件進行設計，并由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。擴增后采用序列SNP檢測技術[生工生物工程(上海)股份有限公司]進行基因測序與分析。見表1。

表1 IL-1β和IL-10基因多態性檢測序列

2 結 果

2.1兩組孕婦一般資料比較 GDM組孕婦年齡、孕周、體質量指數、腰圍、三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)與非GDM組比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 兩組孕婦一般資料比較

2.2兩組孕婦血清IL-1β和IL-10水平比較 GDM組孕婦血清IL-1β和IL-10水平均高于非GDM組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表3。

2.3IL-1β和IL-10基因多態性比較 兩組孕婦IL-1β rs231362和IL-10 rs2283194位點符合Hardy-Weinberg平衡。GDM組孕婦IL-1β rs231362位點CC基因型與C等位基因頻率、IL-10 rs2283194位點TT基因型與T等位基因頻率與非GDM組比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 兩組孕婦IL-1β和IL-10基因多態性比較[ n(%)]

表3 兩組孕婦血清IL-1β和IL-10水平比較

2.4IL-1β和IL-10基因多態性與GMD發生的相關性分析 Spearman相關分析結果顯示，GMD與IL-1β rs231362位點CC基因型與C等位基因、IL-10 rs2283194位點TT基因型與T等位基因均存在相關性(P<0.05)。見表5。

表5 IL-1β和IL-10基因多態性與GMD發生的相關性

2.5影響GMD發生的多因素分析 非條件多因素Logistic回歸分析結果顯示，IL-1β rs231362位點CC基因型與C等位基因、IL-10 rs2283194位點TT基因型與T等位基因均為GMD發生的影響因素(P<0.05)。見表6。

表6 影響GMD發生的多因素分析

3 討 論

GMD當前在臨床上比較多見，易造成孕婦及胎兒并發癥發生。本研究結果顯示，488例孕婦中發生GMD 18例，發生率為3.7%。臨床有研究顯示，GMD可嚴重影響胎兒發育，流產發生率高達15.0%～25.0%，同時妊娠期高血壓發生率為正常孕婦的3～4倍，這與GMD孕婦嚴重的胰島素抵抗有關[9]。GMD還可增加妊娠期感染發生率，進一步加重機體糖代謝紊亂，嚴重者可出現酮癥酸中毒等嚴重并發癥。受高血糖及高滲性利尿等因素影響，GMD孕婦羊水過多發生率也增加。有研究顯示，GMD孕婦再次妊娠后其GMD復發率高達35.0%～61.5%，部分患者還可發展為2型糖尿病，嚴重影響孕婦生命健康[10]。GMD還可對胎兒造成嚴重危害，有研究顯示，GMD孕婦巨大胎兒發生率高達26.8%～39.7%，主要認為與機體長期處于高胰島素狀態，增強胎兒蛋白質及脂肪合成，引起胎兒發育過度有關[11]。同時，高血糖對胚胎營養供應抑制可造成胎兒生長受限，胎兒畸形發生率增加，且新生兒呼吸窘迫綜合征發生率也提高，嚴重影響了胎兒的發育及健康，為此，明確GMD的發生機制具有重要價值。隨著臨床對IL-1β和IL-10研究的深入，發現不同糖尿病患者其循環水平存在明顯差異。本研究結果顯示，GDM組孕婦血清IL-1β和IL-10水平均高于非GDM組，差異均有統計學意義(P<0.05)。從機制上分析，GMD孕婦存在血小板被激活破壞，在此過程中大量IL-1β和IL-10被釋放，使血清IL-1β和 IL-10水平明顯增加[12]。特別是當孕婦處于高血糖狀態時，促進了有絲分裂激酶的介導作用，胎盤微血管慢性缺氧，也刺激了IL-1β和 IL-10的廣泛表達[13]。

GMD和2型糖尿病有相似的病理生理機制，特別是妊娠期母體雌激素、孕激素和胰島素分泌增加，導致其拮抗胰島素的作用增強，當胰島素分泌不足以補償胰島素抵抗時引起的血糖水平升高時，可導致GMD發生。目前主要認為，GMD發生是遺傳因素、外界環境因素及妊娠期特殊生理條件共同作用的結果[14]。有研究發現，胎兒可使孕婦內分泌腺體代償性增大，且刺激胎盤分泌胰島素拮抗劑，共同作用造成機體胰島素水平明顯提升[15]。糖尿病家族史是GMD的獨立危險因素，已經發現多個易感基因與GMD發病風險相關[15]。本研究結果顯示，GDM組和非GDM組孕婦IL-1β rs231362和IL-10 rs2283194位點符合Hardy-Weinberg平衡。GDM組孕婦IL-1β rs231362位點CC基因型與C等位基因頻率、IL-10 rs2283194位點TT基因型與T等位基因頻率與非GDM組比較，差異均有統計學意義(P<0.05)；Spearman相關分析結果顯示，GMD與IL-1β rs231362位點CC基因型與C等位基因、IL-10 rs2283194位點TT基因型與T等位基因均存在相關性(P<0.05)；非條件多因素Logistic回歸分析結果顯示，IL-1β rs231362位點CC基因型與C等位基因、IL-10 rs2283194位點TT基因型與T等位基因均為GMD發生的影響因素(P<0.05)。從機制上分析，IL-1β是一種含DNA結構域的轉錄因子，IL-10 rs2283194長度為99 bp，受檢人群的基因型為TT、AT、AA型位點，以AT野生型為主，二者均可間接介導Wnt/β-連環蛋白信號傳導通路，激活胰高血糖素原基因發生轉錄，具有調節血糖穩態的作用。IL-1β發生變異，使胰高血糖素原基因mRNA在腸內分泌細胞的表達減少，可致血糖升高，促使GMD發生。本研究也存在一定的不足，納入的孕婦數量比較少，調查的指標也比較少，將在后續研究中進一步探討。

綜上所述，GMD孕婦多伴有血清IL-1β和IL-10水平的高表達，IL-1β和IL-10基因多態性為GMD發生的影響因素。