覆盆子果實中鞣花酸含量變化與影響因素分析

錢 燦 ，侯卓妮 ，李宏法 ，梁宗鎖 *，童建全

（1.浙江理工大學 生命科學與醫藥學院，浙江 杭州 310018；2.浙江省植物次生代謝調控重點實驗室，浙江 杭州 310018；3.淳安漢廣中藥材初加工有限公司，浙江 杭州 311703；4.淳安縣農業局中藥材管理站，浙江 杭州 311799）

近年來，隨著藥用植物消費量的增加，許多野生資源現已瀕臨滅絕。藥用植物作為大健康產業發展的基礎，其質量的優劣和安全直接影響著下游系列產品的質量，只有保證藥材的品質，才能確保藥品的療效[1-3]。

覆盆子藥材是薔薇科植物華東覆盆子（Rubus chingii Hu）的干燥果實，為藥食同源，使用歷史悠久。現代藥理學表明，覆盆子具有顯著的抗腫瘤、抗氧化、降血糖血脂、抗衰老、抗血栓、抗阿爾茨海默病、改善腎臟等作用。在臨床上常用于遺尿尿頻、遺精滑精和陽痿早泄等疾病的治療[4-8]。覆盆子中的主要化學成分有二萜（苷）、三萜（苷）、黃酮（苷）、甾體、香豆素類、酚酸類等。其中鞣花酸是《中華人民共和國藥典》（2020版，一部）中藥覆盆子中判別質量的成分之一，鞣花酸具有抗腫瘤[9-14]、抗氧化、抗過敏、消炎抑菌、調節雌激素分泌和抗纖維化等多種生物學活性[15-19]，其含量是衡量覆盆子藥材質量優劣的重要指標。

目前，關于覆盆子的研究主要集中在資源調查、種源分化、成分分離、質量控制及藥理作用[20-28]方面，對覆盆子果實分級分類以及生長環境對覆盆子鞣花酸含量的影響仍不清楚。本研究通過對不同生長海拔高度、采收時間下獲得的相同種源的覆盆子樣品進行分級分類和鞣花酸含量差異分析，為尋找影響覆盆子中鞣花酸含量積累的因素提供有力依據。

1 材料與試藥

1.1 儀器

Waters ACQUITYTMUPLC超高效液相色譜儀；Waters ACQUITYTMUPLC BEH C18液相色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；Sartorius BT25S 電子天平；電熱恒溫水浴鍋；LG-01高速中藥粉碎機。

1.2 試劑

鞣花酸對照品購自上海源葉生物科技有限公司（批號為 S24D11G135548，純度≥98%），甲醇、乙腈、甲酸（分析純）。

1.3 藥材

覆盆子果實藥材樣品均為2021年在浙江漢廣集團覆盆子種植基地采摘，經浙江理工大學生命科學與醫藥學院梁宗鎖教授鑒定為薔薇科植物掌葉覆盆子的干燥果實，具體見表1、表2。

表1 覆盆子藥材樣品

表2 覆盆子藥材批號

2 方法

2.1 溶液制備

2.1.1 對照品溶液的制備

取鞣花酸對照品適量，精密稱定，加70%甲醇制成每1 mL含5 μg的溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備

取覆盆子粉末（過四號篩）約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，稱定重量。水浴鍋60℃加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液1mL，置5 mL量瓶中，用70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2 鞣花酸色譜條件

柱溫 35℃；流速 0.4 mL/min；進樣量 5.0 μL；檢測波長254 nm；流動相為0.1%A甲酸溶液-B乙腈溶液（0～2 min，94%→94%A；2～3 min，94%→84%A；3～8 min，84%→80%A；8～10 min，80%→94%A）。

理論板數按鞣花酸峰計算應不低于3000。色譜圖如圖1、圖2所示。

圖1 鞣花酸標準品色譜圖

圖2 覆盆子樣品色譜圖

2.3 標準曲線繪制

用鞣花酸對照品配制成 5.0 μg/mL、7.0 μg/mL、10.0 μg/mL、12.0 μg/mL 和 14.0 μg/mL 的標準溶液，采用超高效液相色譜法測定，進樣量5 μL，測定峰面積。以峰面積為縱坐標，鞣花酸質量濃度（μg/mL）為橫坐標進行回歸，繪制鞣花酸含量的標準曲線和回歸方程，得到回歸方程為y=101 402x-102 299，R2=0.999 2。

2.4 樣品分析

精密稱取覆盆子樣品粉末，測定并計算覆盆子中鞣花酸含量。

3 結果與分析

3.1 覆盆子分級

據《中華人民共和國藥典》（2020版）記載，覆盆子為聚合果，由多數小核果聚合而成，呈圓錐形或扁圓錐形。表面黃綠色或淡棕色，頂端鈍圓，基部中心凹入。宿萼棕褐色，下有果梗痕。小果易剝落，每個小果呈半月形，背面密被灰白色茸毛，兩側有明顯的網紋，腹部有突起的棱線。因此，將覆盆子果實分為果核、果肉、被茸毛3個部位。

市售覆盆子果實直徑0.8 cm以上為精品。因此，將覆盆子果實分為覆盆子果實直徑0.5～0.8 cm的0.5果和覆盆子果實直徑0.8 cm以上的0.8果。

3.1.1 覆盆子果實不同部位對覆盆子鞣花酸含量的影響

鞣花酸在覆盆子中的含量見表3：被茸毛＞果肉＞果核。被茸毛中鞣花酸含量遠大于果肉和果核，果肉和果核中鞣花酸含量差別不大。因此，在種植、采收時應重點關注被茸毛的保護。

表3 覆盆子果實不同部位中鞣花酸含量

3.1.2 覆盆子果實大小對覆盆子鞣花酸含量的影響

以浙江省夏同線基地為例，如圖3所示。鞣花酸的積累在不同大小的覆盆子果實中是有一定區別的，鞣花酸在果實直徑0.5～0.8 cm（0.5）中的含量＞在果實直徑0.8cm以上（0.8）中的含量。果實變大過程中糖分的積累增加，從而使酸性物質減少。因此，采收時應挑選直徑0.5～0.8 cm的果實，并不是果實越大越為精品。

圖3 覆盆子不同果實直徑的鞣花酸含量

3.2 覆盆子采收時間對覆盆子鞣花酸含量的影響

以浙江省龍嶺塘基地0.5果為例，如圖4所示。鞣花酸的積累在采收時間早晚期是有一定區別的。覆盆子藥材應以灰綠色和黃綠色為主，紅棕色越少越好，紅棕色通常為近成熟果實，這種顏色果實也容易霉變或變質。在4-5月采收期內，采收期早期優于晚期，4月末之后鞣花酸含量會逐漸降低。因此，建議應在4月中旬覆盆子果實酸澀時盡早采摘。

圖4 覆盆子不同采收時間的鞣花酸含量

3.3 覆盆子生長海拔對覆盆子鞣花酸含量的影響

以浙江省基地各海拔高度為例，如圖5所示。鞣花酸的積累在海拔高與海拔低地區是有一定區別的，高海拔地區的覆盆子鞣花酸含量高。因此，覆盆子栽培時應選擇海拔高的地區進行種植。

圖5 覆盆子不同生長海拔高度的鞣花酸含量

4 討論與總結

覆盆子在浙江省內多地均為主導產業，姚鑫等[29]確定了浙江省掌葉覆盆子青果具有較大的單株種質選擇的潛力；毛菊華等[30]分析了華東覆盆子不同藥用部位果實、根、殘莖的化學成分含量；付彩群等[31]發現了浙江產覆盆子的鞣花酸含量顯著高于江西產，不同采收期的覆盆子青果的鞣花酸比黃果高，不同種植條件下向陽與背陽覆盆子中鞣花酸含量差異相對較小，但是對覆盆子被茸毛部位、果實大小、生長海拔、具體采收時間以及浙江具體種植地方面的研究尚少。故本研究對浙江省內不同覆盆子果實部位、大小，不同生長海拔和具體采收時間下的覆盆子鞣花酸含量進行UPLC測定，能夠快速準確地進行指標成分測定。

研究發現覆盆子中鞣花酸含量在被茸毛上積累較多，并非集中在果肉果核上，且果實直徑為0.5～0.8 cm的覆盆子中鞣花酸含量高，并非市售認定的果實越大越為精品。在浙江省不同的種植基地中，生長海拔高約為630 m、生長采收期在4月中旬采摘的覆盆子中鞣花酸含量高。因此，在覆盆子種植時應選擇高生長海拔，采收時應注重被茸毛的保護，果實直徑控制在0.5～0.8 cm，于4月中旬盡早采摘。

研究建立了鞣花酸含量和覆盆子果實部位、果實大小、生長海拔高度和生長采收時間之間的聯系，從而為建立系統性種植及采收方法并解決產業發展技術瓶頸奠定基礎。