2019—2021 年北京市獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對

杜 鵑，吳 迪，吳惠明，周德剛，巴洪宇，史 記，范君文，傅彩霞，沈光年

（北京市動物疫病預(yù)防控制中心，北京 100026）

為全面了解獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力和動物疫情監(jiān)測預(yù)警水平，促進北京市整體動物疫病檢測能力的提升，按照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部統(tǒng)一要求，2019—2021 年，北京市動物疫病預(yù)防控制中心組織全市獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室開展了檢測能力比對工作。比對施行統(tǒng)一的檢測標(biāo)準(zhǔn)、檢測時間和試劑樣品，并在規(guī)定時間內(nèi)收回檢測結(jié)果進行統(tǒng)計分析，比對結(jié)果真實反映了北京市各區(qū)基層實驗室的檢測能力水平，這對促進基層實驗室加強檢測能力建設(shè)，提高質(zhì)量控制水平意義重大。

1 材料與方法

1.1 比對方法

2019—2021 年北京市獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對，共設(shè)置了檢測項目14 個（表1）。每個比對項目設(shè)置5～6 個檢測盲樣。全市配有實驗室的12 個區(qū)全部參加了本次比對，包括順義、平谷、房山、門頭溝、昌平、密云、豐臺、懷柔、大興、朝陽、通州、延慶，其中有2 個區(qū)實驗室不具備分子生物學(xué)檢測能力，不參加分子生物學(xué)檢測項目，2020、2021 年分別單獨為其設(shè)置了1 項血清學(xué)檢測項目，保證每個實驗室每年參加3～4 個檢測項目。

表1 2019—2021 年北京市獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對項目 單位：個

1.2 試驗項目和試劑

2019—2021 年不同比對項目選取的方法、標(biāo)準(zhǔn)及試劑見表2，個別重復(fù)的比對項目采用的方法、標(biāo)準(zhǔn)及試劑相同。

表2 比對項目的方法、標(biāo)準(zhǔn)和試劑

1.3 比對樣品制備

比對樣品由國家參考實驗室或相應(yīng)試劑公司生產(chǎn)，由北京市動物疫病預(yù)防控制中心進行測試、分裝和編號，并標(biāo)定樣品參考值，每份樣品量可保證足夠用于重復(fù)性檢測。

1.4 比對樣品保存和發(fā)放

比對所用檢測試劑由北京市動物疫病預(yù)防控制中心統(tǒng)一購入，按試劑盒要求條件存放。比對樣品制備完成后-20℃保存。由各區(qū)參與比對的實驗室在規(guī)定時間統(tǒng)一領(lǐng)取，放入裝有冰袋的保溫箱中4 h 內(nèi)送至比對實驗室。

1.5 評判標(biāo)準(zhǔn)

口蹄疫病毒O 型抗體檢測、H5 亞型禽流感病毒抗體試驗、H7 亞型禽流感病毒抗體檢測評判標(biāo)準(zhǔn)：檢測值與參考值的偏差不超過1 個滴度，判為結(jié)果符合。

布魯氏菌抗體檢測、口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體檢測、豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測、H7N9 亞型禽流感病毒檢測、豬瘟病毒抗體檢測、禽流感病毒通用型檢測、非洲豬瘟病毒檢測、小反芻獸疫病毒抗體檢測、禽白血病病毒p27 抗原檢測評判標(biāo)準(zhǔn)：陽性樣品的檢測結(jié)果應(yīng)為“陽性”，陰性樣品的檢測結(jié)果應(yīng)為“陰性”。

1.6 結(jié)果分析

各項目根據(jù)評判標(biāo)準(zhǔn)進行結(jié)果分析。2019—2021 年北京市獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對共設(shè)置的14 個檢測項目中，除F-PCR 設(shè)置為定量試驗外，其余項目均設(shè)置為定性試驗，不再作進一步的偏離程度分析。本研究僅對2019 年的H7N9 亞型禽流感病毒檢測（熒光RT-PCR），2020 年的禽流感病毒通用型檢測（熒光RT-PCR）、非洲豬瘟病毒檢測（熒光PCR）和2021 年的非洲豬瘟病毒檢測（熒光PCR），按照《能力驗證結(jié)果的統(tǒng)計處理和能力評價指南》（CNAS-Gl002）中方法進行能力統(tǒng)計量的計算。以相對偏差（D）和Z 比分數(shù)，分析各實驗室檢測值和給定參考值的差異。計算公式：D=（檢測值-參考值）×100%/ 參考值；Z=（檢測值-參考值）/σ，其中σ表示能力評定標(biāo)準(zhǔn)差，根據(jù)經(jīng)驗值（預(yù)期值）設(shè)定為0.2×參考值。2019 年的H7N9 亞型禽流感病毒檢測（熒光RT-PCR）強陽性樣品H7、N9 的Ct 值參考值均為20，弱陽性樣品H7、N9 的Ct 值參考值均為30；2020 年的禽流感病毒通用型檢測（熒光RT-PCR）強陽性樣品Ct 值參考值為18，弱陽性樣品Ct 值參考值為24，非洲豬瘟病毒檢測（熒光PCR）強陽性樣品Ct 值參考值為25，弱陽性樣品Ct 值參考值為31；2021 年的非洲豬瘟病毒檢測（熒光PCR）強陽性樣品Ct 值參考值為28，弱陽性樣品Ct 值參考值為33。結(jié)果分析：｜Z｜≤2，表明“滿意”；2 ＜｜Z｜＜3，表明“有問題”，產(chǎn)生警戒信號，提醒實驗室應(yīng)引起注意；｜Z｜≥3，表明“不滿意”，產(chǎn)生措施信號，實驗室應(yīng)分析原因，制定針對性整改措施。

2 結(jié)果

2019—2021 年共開展了14 個項目的比對。根據(jù)檢測結(jié)果評判規(guī)則，全市區(qū)級獸醫(yī)實驗室中不同年份、不同比對項目的結(jié)果統(tǒng)計見表3。

表3 2019—2021 年北京市獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對結(jié)果

2.1 各年份實驗室比對結(jié)果

按照不同年份統(tǒng)計，2019—2021 年各年份實驗室檢測能力比對結(jié)果見表4。實驗室全部符合率從2019 年的75.00%提至2021 年100%，樣品符合率從2019 年98.02%提高到2021 年100%。

表4 2019—2021 年各年份實驗室檢測能力比對結(jié)果

2.2 各實驗室3 年比對結(jié)果

全市共有區(qū)級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室12 個，3 年全部參加實驗室比對，參與率100%。按照結(jié)果全部符合的年數(shù)進行了統(tǒng)計（圖1）。

圖1 2019—2021 三年實驗室全部符合率分布圖

2.3 各檢測技術(shù)類別比對結(jié)果

按檢測技術(shù)類別統(tǒng)計，實驗室各技術(shù)類別檢測能力比對結(jié)果見表5。2019—2021 年開展的14個比對項目，涵蓋了血凝抑制試驗（HI）、試管凝集試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、F-PCR 4 個技術(shù)類別，HI 實驗室符合率為100%，試管凝集試驗實驗室符合率為100%，ELISA 實驗室符合率83.33%，F(xiàn)-PCR 實驗室符合率為70.00%。

表5 2019—2021 年各技術(shù)類別檢測能力比對結(jié)果

2.4 熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（F-PCR）比對結(jié)果

對2019 年的H7N9 亞型禽流感病毒檢測（熒光RT-PCR），2020 年的禽流感病毒通用型檢測（熒光RT-PCR）、非洲豬瘟病毒檢測（熒光PCR）和2021 年的非洲豬瘟病毒檢測（熒光PCR）結(jié)果Ct 值進行差異分析表明，除2019 年H7N9 亞型禽流感病毒檢測（熒光RT-PCR）2 個實驗室分別有1 個弱陽性樣品未檢出，判定陰性，2020 年的禽流感病毒通用型檢測（熒光RT-PCR）1 個實驗室1 個弱陽性樣品未檢出，判定陰性外，其他實驗室結(jié)果均未出現(xiàn)判定結(jié)果結(jié)論性錯誤。除2019 年H7N9 亞型禽流感病毒檢測（熒光RT-PCR）1 個實驗室強陽性樣品2 ≤｜Z｜≤3，表明“有問題”，其他實驗室檢測樣品均為｜Z｜≤2，表明“滿意”。各實驗室比對結(jié)果Ct 值的相對偏差與Z 比分數(shù)見表6～9，Z比分數(shù)情況見圖2～5。

圖2 2019 年H7N9 亞型禽流感病毒檢測（熒光RT-PCR）比對結(jié)果Z 比分數(shù)

表6 2019 年H7N9 亞型禽流感病毒檢測（熒光RT-PCR）比對結(jié)果

表7 2020 年禽流感病毒通用型檢測（熒光RT-PCR）比對結(jié)果

圖3 2020 年禽流感病毒通用型檢測（熒光RT-PCR）比對結(jié)果Z 比分數(shù)

圖4 2020 年非洲豬瘟病毒檢測（熒光PCR）比對結(jié)果Z 比分數(shù)

圖5 2021 年非洲豬瘟病毒檢測（熒光PCR）比對結(jié)果Z 比分數(shù)

3 討論

每年比對項目的設(shè)置，都結(jié)合國家中長期動物疫病防治規(guī)劃以及當(dāng)前動物疫病防控重點，盡量覆蓋ELISA、F-PCR 等獸醫(yī)實驗室常用檢測技術(shù)類別。對實驗室間檢測能力比對出現(xiàn)結(jié)果錯誤的實驗室，由市動物疫病預(yù)防控制中心提供技術(shù)支持，協(xié)助其發(fā)現(xiàn)問題，落實整改，并重新進行比對復(fù)測，直至結(jié)果達標(biāo)，這對強化基層獸醫(yī)實驗室的技術(shù)能力具有很大幫助。

北京市近3 年區(qū)級實驗室間檢測能力比對符合率逐年提高，各年度實驗室符合率分別為75.00%、83.33%、100%，各年度樣品符合率分別為98.02%、99.21%、100%。說明通過每年的實驗室檢測能力比對，查找問題并整改落實，大多數(shù)實驗室的檢測能力在逐漸進步，特別是分子生物學(xué)檢測能力有了質(zhì)的突破，但是仍然有2（2/12）個實驗室不具備分子生物學(xué)檢測能力，需要加強軟硬件建設(shè)。

近3 年沒有實驗室重復(fù)出現(xiàn)錯誤，全對及出現(xiàn)過1 次錯誤的實驗室分別占比58.33%和41.67%，說明實驗室檢測能力整體理想，但是穩(wěn)定性還有待提高，需要加強人員培訓(xùn)，進一步提高準(zhǔn)確度。

從3 年試驗時間比對覆蓋的檢測技術(shù)類別來看，HI、試管凝集作為常用檢測技術(shù)，各實驗室操作比較熟練，符合率穩(wěn)定性比較好；ELISA 也是獸醫(yī)實驗室常用檢測技術(shù)，但是有競爭ELISA、液相阻斷ELISA 等眾多種類，所以ELISA 試驗也是基層獸醫(yī)實驗室常出問題的項目；而F-PCR 是近幾年在北京市各基層獸醫(yī)實驗室剛剛普及的檢測技術(shù)，培訓(xùn)頻率高、強度大，也是進步最為突出的檢測技術(shù)。

對F-PCR 比對結(jié)果進一步分析表明，除2019年H7N9 亞型禽流感病毒檢測（熒光RT-PCR）2個實驗室分別有1 個弱陽性樣品未檢出，判定陰性，2020 年的禽流感病毒通用型檢測（熒光RTPCR）1 個實驗室1 個弱陽性樣品未檢出，判定陰性外，其他實驗室結(jié)果均未出現(xiàn)判定結(jié)果結(jié)論性錯誤。2019 年H7N9 亞型禽流感病毒檢測（熒光RTPCR）1 個實驗室強陽性樣品2 ≤｜Z｜≤3，表明“有問題”，同時該實驗室也是有弱陽性樣品未檢出的實驗室，提示該實驗室引起注意，查找原因加強培訓(xùn)，提升該項目檢測能力。其他實驗室檢測樣品均為｜Z｜≤2，表明“滿意”，尤其是非洲豬瘟病毒檢測（熒光PCR）項目在北京市具備分子生物學(xué)檢測能力的10 個區(qū)級實驗室中標(biāo)準(zhǔn)化程度高，一致性強。10 個實驗室全部作為北京市2019 年第一批授權(quán)開展非洲豬瘟檢測的實驗室，在近年的非洲豬瘟疫情監(jiān)測工作中發(fā)揮了重要作用。

此外，近3 年實驗室檢測能力比對中各實驗室的原始記錄來看，原始記錄信息不完整、沒有可追溯性等問題突出。這些問題需要實驗室進一步強化管理，不斷提高實驗室管理水平和檢測人員的技術(shù)水平，確保實驗室檢測的科學(xué)性、準(zhǔn)確性和規(guī)范性，為北京市動物疫病的防控以及食品安全和公共衛(wèi)生安全的保障提供有力的技術(shù)支持。