生殖道沙眼衣原體和生殖支原體與女性不孕不育的相關性分析

袁曉文 袁詩韻 梁景星 吳國新 吳智鑫 張 欣 關紫云▲

1.廣東省佛山市南海區人民醫院檢驗科，廣東佛山 528200；2.廣東省佛山市南海區人民醫院急診科，廣東佛山 528200；3.廣東省人民醫院南海醫院病案統計科，廣東佛山 528251；4.廣東省佛山市中醫院ICU，廣東佛山 528200；5.廣東省佛山市南海區人民醫院婦科，廣東佛山 528200

近年來，女性不孕不育癥的發病率逐年上升，在門診流產患者統計發現胚胎停止發育的比例不斷增高，已高度引起社會以及醫務工作者的關注。在一些環境污染嚴重的地方，女性不孕不育的發病率更高，不少學者針對何種因素導致女性不孕不育發病率的增加進行研究。女性不孕不育癥的影響因素有很多，可分為內分泌、陰道、宮頸、輸卵管和盆腔-腹膜等[1]。其中感染因素作為影響女性不孕不育的一個重要因素引起了學者們的高度關注[2-3]。據統計，8%～12%的育齡夫婦出現不孕不育，其中生殖道感染的占20%～60%，導致不孕不育癥的一個關鍵原因是女性生殖道急性和慢性感染，而生殖道支原體（Mycoplasma genitalium，Mg）和沙眼衣原體（Chlamydia trachomatis，CT）是引起生殖道炎癥的重要病原體[4]。近年以來，研究發現自身免疫失調也可能導致不孕不育，抗子宮內膜抗體（anti endometrial antibodies，EmAb）就是引起不孕不育的一個重要免疫性抗體[5]。基于此，本研究探討CT 和Mg 與女性不孕不育的相關性，為治療女性不孕不育提供理論基礎和指導意見。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月至2018年3月佛山市南海區人民醫院收治的165 例不育不孕患者作為病例組，選取同期100 例正常生育女性為對照組。病例組患者年齡21～45 歲，平均（29.92±4.63）歲；原發性不孕不育78 例，繼發性不孕不育87 例。對照組患者年齡23～46歲，平均（30.90±4.49）歲。兩組患者的一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。納入標準：①病例組患者符合《婦產科學》中關于不孕不育的診斷標準[5]；②患者染色體正常；③有1年正常性生活，未采取任何避孕措施，而未懷孕者。排除標準：①存在精神障礙者、內分泌失調、排卵障礙等引起不孕者；②生殖器畸形者；③合并嚴重器質病變者。所有患者及其家屬均知情同意；本研究經醫院醫學倫理委員會審核批準。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 用醫用棉拭子深入女性宮頸口中旋轉1 周，停留10 s 后取出陰道分泌物，將拭子頭置于1 ml 生理鹽水中浸泡，選取500 μl 浸泡液與500 μl尿樣保存液混合，該樣本為待測樣本。空腹抽兩組患者靜脈血液，離心后留取血清，將血清放在-20℃冰箱中保存待測EmAb。

1.2.2 儀器與試劑 ABIPrism 7500 型熒光定量PCR儀，Mg 和CT 檢測試劑盒均購自上海仁度生物科技有限公司。FC 型酶標儀，抗子宮內膜抗體免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）抗體檢測試劑購自濰坊市康華生物技術有限公司。

1.2.3 樣本檢測 Mg 和CT 檢測：進行實驗嚴格按照試劑盒以及儀器操作說明書，同時設置陰性、陽性和內標對照。采用實時熒光核酸恒溫擴增檢測技術（simultaneous amplification and testing，SAT） 進行擴增，擴增條件為42℃1 min，40 個循環，熒光素通道設定為F1（FAM）和F2（HEX 或者VIC），熒光信號收集每分鐘進行一次。陽性對照和陰性對照的dt 值應滿足以下條件，否則，實驗視為無效，需重新進行。①陽性對照，F1 通道： 陽性對照dt≤臨界弱陽性對照dt≤35，同時熔解曲線在68±5℃區間有吸收峰，F2 通道有或者無數值；②陰性對照，F1 通道：dt 無數值或為40，熔解曲線在68±5℃區間無吸收峰，同時F2 通道：dt<35。抗子宮內膜抗體IgG 抗體檢測：采用免疫酶聯法測定患者血清抗子宮內膜IgG 抗體，試劑盒購于濰坊市康華生物技術有限公司，操作嚴格按照試劑盒說明書進行。EmAb 結果判斷：Cut-off value（COV）參考值計算：COV=NC×3； 若NC<0.100，則按0.100 計算，NC>0.100 時，按實際值計算。陽性判定：樣品吸光度（optical density，OD）值（S）COV≥1.0，說明該待測樣本EmAb IgG 結果為陽性；陰性判定：樣品OD 值（s）CO<10，說明該待測樣本EmAb IgG 結果為陰性。

1.3 觀察指標

比較兩組患者Mg 及CT 的陽性檢出率、 病例組中Mg 或CT 陽性患者與陰性患者的EmAb 陽性率、生殖道CT 及Mg 感染與女性不孕不育的相關性。

1.4 統計學分析

采用SPSS 25.0 統計學軟件進行數據分析，計量資料用均數±標準差（±s）表示，兩組間比較采用t 檢驗；計數資料用率表示，兩組間比較采用χ2檢驗；相關性分析采用Spearman 相關分析，以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者生殖道CT 及Mg 陽性檢出率的比較

病例組患者Mg 和CT 陽性檢出率均高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05），Mg 和CT 合并感染有8 例，檢測結果見表1。

表1 兩組患者生殖道CT及Mg 陽性檢出率的比較[n（%）]

2.2 病例組中Mg 或CT 陽性患者與陰性患者EmAb陽性率的比較

病例組165 例不孕不育患者中EmAb 陽性13例，EmAb 陰性152 例；Mg 和CT 陽性患者的EmAb 陽性率高于Mg 和CT 陰性患者，差異有統計學意義（P<0.05）（表2）。

表2 病例組中Mg 或CT 陽性患者與陰性患者EmAb 陽性率的比較[n（%）]

2.3 CT、Mg 和EmAb 與女性不孕不育的相關性分析

Spearman 相關性分析顯示生殖道CT 及Mg 感染與女性不孕不育成正相關（P<0.05）（表3）。

表3 CT、Mg 和EmAb 與女性不孕不育的相關性分析

3 討論

隨著社會的高速發展，人們交往頻繁，性觀念不斷變化，泌尿道生殖道疾病由于不潔性行而不斷蔓延，而人們缺乏保護意識，嚴重缺乏性衛生相關知識，泌尿道生殖道感染疾病不斷增多，對人類身體健康造成嚴重威脅[6]。據統計，8%～12%的育齡夫婦會出現不孕不育，其中生殖道感染有關的占20%～60%，導致不孕不育的一個重要原因是女性生殖道急性和慢性感染，而Mg、CT 是誘發泌尿道生殖道炎癥的重要病原體[4]。

Mg 能在無生命的培養基中生長繁殖，在動物或者人的腔道黏膜上存在的原核微生物。它在人體腔道的黏膜上寄宿，當機體免疫力下降或黏膜受損，可誘發人體的泌尿系統感染[7]。Risser 等[8]報道，支原體感染可通過引起女性泌尿生殖道阻塞、粘連和炎癥從而成為造成女性不孕癥的主要原因之一。方智淑等[9]報道，支原體感染既可單獨引起盆腔炎癥，還可協同其他病原體促進盆腔炎癥的發生，進而導致女性不孕不育。衣原體也是一種原核微生物，如果黏膜衣原體感染，其產生的疤痕可能會導致輸卵管炎后致不育，而CT 是革蘭氏陰性病原體，它有始體和原體兩種發育形式，而原體的感染力很強，它偏向于侵入柱狀上皮細胞，所以其主要靶器官是宮頸[10]。CT 侵入人體后主要存在于糞便、精液、尿道分泌物、宮頸及宿主細胞內，它經過性交、直接的體液交換和親密接觸來傳播，在泌尿道感染中，CT 感染已成為歐洲國家性傳播疾病的首位病原體，CT 感染率在我國也有上升趨勢[11]。CT 和Mg 主要通過性行為傳播，導致自然流產和胚胎停止發育的概率較大，由于抗生素的濫用，病原菌耐藥性不斷增強，防治CT 成為一個難題[12-13]。

本研究結果顯示，病例組患者Mg 和CT 陽性檢出率均高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05），提示不孕不育與生殖道Mg 和CT 感染有一定的關系。本研究進一步證實了實生殖道CT 及Mg 感染均與婦女的不孕不育存在相關性。女性感染Mg 或CT 后，炎癥可以沿生殖道上行，引發輸卵管阻塞、輸卵管炎癥、子宮內膜炎癥等，炎癥一方面可通過直接影響女性卵子運行和受精、受精卵運行、胚胎著床發育來引起不孕或流產，炎癥另一方面還可通過引起單核巨噬細胞和T 淋巴細胞聚集置炎癥部位，同時吞噬受損的組織，進而誘發免疫反應，造成機體自身丟失或重復的配子，進而會形成染色體單體或部分染色體三體的合子，從而致使受精卵卵死亡最終流產[14]。

EmAb 是育齡婦女針對子宮內膜異位癥、子宮內膜炎等病理情況而產生的免疫抗體，婦女子宮內膜正常情況下在卵巢激素的調節下產生周期性剝落，然后隨月經排出，所以一般不會誘導產生自身免疫抗體[10，15-16]。本研究結果顯示，Mg 和CT 陽性患者的EmAb 陽性率高于Mg 和CT 陰性患者，差異有統計學意義（P<0.05），提示不孕不育患者的EmAb 的產生和Mg、CT 感染有一定關系，生殖道感染可以誘導機體產生EmAb。女性患者生殖道感染后，損傷子宮內膜，巨噬細胞吞噬損傷的組織，誘導機體免疫反應，產生EmAb。

綜上所述，CT 和Mg 與女性不孕不育具有相關性，應當引起高度關注，而EmAb 的產生與生殖道Mg、CT 感染有關，可作為輔助診斷女性不孕不育的重要有效手段。從優生優育角度考慮，可將CT、Mg 和EmAb 列入孕前篩查，同時也列入不孕不育常規檢查，有助于早發現、早治療，從而減少泌尿生殖道感染引起的不孕不育，提高優生優育水平。