55對(duì)不良孕產(chǎn)史夫婦的細(xì)胞遺傳學(xué)研究

曾南陽(yáng)，謝妍，洪欽明，王彧

1.廣東省揭陽(yáng)市榕城區(qū)婦幼保健計(jì)劃生育服務(wù)中心 檢驗(yàn)科，廣東 揭陽(yáng) 522000；2.廣東省揭陽(yáng)市榕城區(qū)婦幼保健計(jì)劃生育服務(wù)中心 產(chǎn)前診斷生殖保健中心，廣東 揭陽(yáng) 522000

0 引言

不良孕產(chǎn)史是指曾經(jīng)有過(guò)唇腭裂、神經(jīng)管缺損、唐氏綜合征等畸胎兒生育史，胚胎停育、死胎、死產(chǎn)、自然流產(chǎn)等妊娠史[1]。二胎開(kāi)放后，優(yōu)生優(yōu)育咨詢門(mén)診中有過(guò)不良孕產(chǎn)史的患者越來(lái)越多，隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，生活水平的提高，不良孕產(chǎn)史的問(wèn)題越來(lái)越被人們關(guān)注。對(duì)于已婚夫婦而言，不良孕產(chǎn)史疾病的發(fā)生率較高。脫氧核糖核酸（deoxyribo nucleic acid，DNA）的主要載體為染色體，如果染色體出現(xiàn)數(shù)目異常或者結(jié)構(gòu)畸變，有可能增加或減少基因，從而導(dǎo)致不良孕產(chǎn)[2]。不良孕產(chǎn)史的病因十分復(fù)雜，染色體異常、內(nèi)分泌異常、環(huán)境及母體全身性疾病等都有可能是其發(fā)生的原因[3]。其中孕早期流產(chǎn)的胚胎組織中，染色體異常的發(fā)生率為50%～60%。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理念認(rèn)為，在精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展下，根據(jù)個(gè)體差異制定疾病的預(yù)防和發(fā)展方案，有助于疾病的診斷和治療，因此進(jìn)行外周血染色體檢查非常必要[4]。這對(duì)了解不良孕產(chǎn)的原因診斷有重要的意義，更重要的是檢出攜帶者，包括家族中的攜帶者，對(duì)明確有染色體異常者，應(yīng)進(jìn)行產(chǎn)前診斷，避免遺傳病患兒出生，對(duì)做好優(yōu)生優(yōu)育，提高人口素質(zhì)有重要意義，同時(shí)也是為人類遺傳性疾病的診斷尋找病因提供了科學(xué)依據(jù)[5]。基于此，本研究選擇于本院治療的不良孕產(chǎn)史夫婦探討其染色體異常的發(fā)病率，及篩查外周血染色體的意義，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年5月-2021年2月于廣東省揭陽(yáng)市榕城區(qū)婦幼保健計(jì)劃生育服務(wù)中心治療的不良孕產(chǎn)史夫婦110例（55對(duì)）作為研究對(duì)象，臨床特征呈現(xiàn)出胚胎停育、習(xí)慣性流產(chǎn)、畸胎史、染色體異常兒孕產(chǎn)史等。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，且所有患者均簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

染色體核型檢查方法：取患者靜脈血4mL，肝素鈉（廠家：國(guó)藥集團(tuán)容生制藥有限公司；生產(chǎn)批號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20033326）抗凝，接種于外周血細(xì)胞培養(yǎng)基，用1mL無(wú)菌注射器加0.5mL于培養(yǎng)基內(nèi)，然后混勻，在37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)約72h，而后加入80μL秋水仙素（濃度：100μg/mL；廠家：西雙版納版納藥業(yè)有限責(zé)任公司；生產(chǎn)批號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H53020871），繼續(xù)培養(yǎng)30min，再收獲滴片烤片，進(jìn)行G顯帶處理。每個(gè)患者常規(guī)計(jì)數(shù)20個(gè)中期分裂相，分析5個(gè)核型，嵌合體核型數(shù)到100個(gè)。根據(jù)人類細(xì)胞遺傳學(xué)國(guó)際命名體制（international system for human cytogenetic nomenclature，ISCN）2016的標(biāo)準(zhǔn)描述染色體核型。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察所有不良孕產(chǎn)史夫婦的臨床表現(xiàn)及異常核型，同時(shí)比較不同性別、流產(chǎn)次數(shù)染色體異常檢出率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用例或率表示，比較用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 110例不良孕產(chǎn)史夫婦異常核型及臨床表現(xiàn)

在110例不良孕產(chǎn)史夫婦中，22例出現(xiàn)染色體異常，占比20.00%。其中7例平衡易位，占比31.82%（7/22）；15例正常變異，占比68.18%（15/22）。正常變異中，2例染色體倒位，占比13.33%（2/15）；13例染色體多態(tài)性，占比86.67%（13/15），見(jiàn)表1。

表1 不良孕產(chǎn)史夫婦110 例異常核型及臨床表現(xiàn)

2.2 不同性別染色體異常檢出率比較分析

不同性別染色體異常檢出率對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2 不同性別染色體異常率比較（n，%）

2.3 不同流產(chǎn)次數(shù)染色體異常檢出率比較分析

不同流產(chǎn)次數(shù)染色體異常檢出率對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表3。

表3 不同流產(chǎn)次數(shù)染色體異常檢出率比較（n，%）

3 討論

目前，由于染色體異常治療困難，療效不滿意，對(duì)于先天性智能障礙的治療也沒(méi)有有效藥物[6]。不同類型染色體發(fā)育不全預(yù)后不盡相同，智力低下和生長(zhǎng)發(fā)育遲滯是染色體病的共同特征[7]。有文獻(xiàn)報(bào)道染色體異常在自然流產(chǎn)患者中的發(fā)生率約為12.6%。性染色體從胎兒期就決定了個(gè)體的性分化、性成熟，從而影響了患者的生殖器官發(fā)育、第二性征及身高、智力等[8]。性染色體異常在女性患者中表現(xiàn)為原發(fā)性閉經(jīng)、月經(jīng)不調(diào)、性器官發(fā)育差，而在男性患者表現(xiàn)為小睪癥、無(wú)精子癥、外生殖器發(fā)育差，甚至出現(xiàn)女性第二性征等，結(jié)果均造成了生殖能力的下降甚至喪失，常見(jiàn)的有特納綜合征（45，X）及克氏綜合征（47，XXY）等[9]。

隨著生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的發(fā)展，人們逐漸認(rèn)識(shí)到醫(yī)學(xué)實(shí)踐中所遇到的一些問(wèn)題需要用遺傳學(xué)的理論和方法才能得以解決，遺傳已成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中的另外一個(gè)重要方面，臨床醫(yī)生在臨床工作中遇到越來(lái)越多的遺傳學(xué)問(wèn)題，其中染色體異常與不良孕產(chǎn)史有著密切的關(guān)系。染色體是遺傳物質(zhì)的載體，它具有儲(chǔ)存和傳遞DNA、控制基因活動(dòng)和調(diào)整基因重組的作用[10]。人類染色體核型分析是將人的一個(gè)體細(xì)胞有絲分裂中期的染色體，在G顯帶技術(shù)基礎(chǔ)上，按照染色體的大小和形態(tài)特征，對(duì)染色體進(jìn)行分組、排隊(duì)和配對(duì)[11]。這對(duì)探索人類遺傳病的發(fā)病機(jī)制具有重要意義。

染色體易位同不良孕產(chǎn)史有一定相關(guān)性，染色體易位中比較常見(jiàn)的就是羅伯遜易位與平衡易位，屬于臨床中最常見(jiàn)的一種造成胚胎停育及流產(chǎn)的不正常核型。平衡易位的患者因?yàn)槲磥G失遺傳物質(zhì)，通常有正常的智力及臨床表型，然而病人生殖細(xì)胞于減數(shù)分裂期間會(huì)分裂18種配子，同正常人婚配有1/18的概率會(huì)分娩正常的后代，1/18屬于有正常表型的易位攜帶者[12]。于減數(shù)分裂期間，正常染色體會(huì)被易位染色體干擾，出現(xiàn)雜合體，于臨床上呈現(xiàn)為無(wú)精癥或生精阻滯。本研究110例不良孕產(chǎn)史夫婦中，7例出現(xiàn)平衡易位，均有不良孕產(chǎn)史。

染色體倒位因?yàn)槲淳哂羞z傳物質(zhì)改變，所以染色體倒位患者的表型往往是正常的，然而它能夠出現(xiàn)類型不同的4種配子，若倒位圈內(nèi)交換1次，染色體倒位患者會(huì)攜帶不平衡配子2種，若倒位圈不交換，會(huì)出現(xiàn)倒位染色體配子及正常配子各1種[13]。不平衡配子是一些缺失或重復(fù)不正常染色體攜帶者，他們?nèi)笔Щ蛑貜?fù)片段的基因致死效應(yīng)及片段長(zhǎng)短是遺傳效應(yīng)產(chǎn)生的關(guān)鍵。倒位的片段越長(zhǎng)，基因缺失或重復(fù)片段就越短，這一配子同正常配子相結(jié)合的合子比較容易孕育到生產(chǎn)，但是產(chǎn)出的嬰兒通常是畸形兒，與此相反，倒位的片段越短，基因缺失或重復(fù)片段就越長(zhǎng)，這種狀況的合子不容易生長(zhǎng)發(fā)育，較大可能會(huì)引發(fā)死胎或流產(chǎn)。本研究110例不良孕產(chǎn)史夫婦中，2例出現(xiàn)倒位，均有不良孕產(chǎn)史。

染色體多態(tài)性為染色體的諸多微小變異，通常出現(xiàn)于染色體之異染色質(zhì)區(qū)域內(nèi)，這一區(qū)域DNA序列高度重復(fù)，其中結(jié)構(gòu)基因幾乎不含編碼，往往不具有轉(zhuǎn)錄活性，所以染色體多態(tài)性通常不會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重后果，因此，能夠同傳統(tǒng)染色體異常區(qū)分[14]。多態(tài)性變異通常僅涉及同源染色體一對(duì)中的一個(gè)，特征是16、1、9號(hào)染色體次縊痕區(qū)縮短或變長(zhǎng)，著絲粒區(qū)域熒光強(qiáng)度變異、G或D組短臂增長(zhǎng)等。Y染色體長(zhǎng)臂變異也包含在多態(tài)性變異內(nèi)。多態(tài)性變異發(fā)生于異染色質(zhì)區(qū)域，因此，攜帶者表型被影響的程度通常不明顯，異染色質(zhì)區(qū)DNA序列高度重復(fù)，且在遺傳上不活躍，所以傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為不良孕產(chǎn)史同多態(tài)性沒(méi)有顯著關(guān)系。然而相關(guān)學(xué)者認(rèn)為異染色質(zhì)區(qū)域增減DNA序列，能干擾細(xì)胞分裂進(jìn)而引發(fā)同源染色體配對(duì)困難，出現(xiàn)非整倍體胚胎、不平衡配子的概率增加，最終引發(fā)流產(chǎn)、死胎等[15]。本研究110例不良孕產(chǎn)史夫婦中，13例出現(xiàn)多態(tài)性，均有不良孕產(chǎn)史。

相關(guān)文獻(xiàn)顯示，于反復(fù)流產(chǎn)夫婦中，女性染色體異常率明顯高于男性，認(rèn)為主要是因?yàn)槟信臣?xì)胞數(shù)目差異導(dǎo)致，異常核型攜帶者的精子于受精期間通過(guò)優(yōu)勝劣汰選擇[16]。然而，本次研究顯示，22例異常核型病人中，10例為女性，檢出率為18.18%，12例為男性，檢出率為21.82%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，所以需對(duì)不良孕產(chǎn)史夫婦雙方進(jìn)行染色體檢查。本研究有43例患者因自然流產(chǎn)就診，占比78.18%，于自然流產(chǎn)病人中檢出染色體異常的概率為20.93%，同自然流產(chǎn)胚胎內(nèi)的染色體異常檢出率（50%～60%）[17]相比，明顯較低。本研究顯示，不同流產(chǎn)次數(shù)檢出染色體異常的概率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

綜上所述，染色體異常為造成不良孕產(chǎn)的一個(gè)重要原因，細(xì)胞遺傳學(xué)研究對(duì)于明確不良孕產(chǎn)史夫婦的病因有幫助。