呼吸道合胞病毒致毛細支氣管炎患者腸道菌群變化分析及與病情嚴重程度的關系研究

陳蓉燕

（湖南省婦幼保健院普兒科，湖南長沙 410008）

毛細支氣管炎為細支氣管的急性炎癥，毛細支氣管炎患兒常于病毒感染后，臨床多表現為流涕、咽炎、喉炎等前屈癥狀，部分患兒可伴有發熱，且2~3 d后逐漸出現咳嗽、氣促、喘憋及呼吸困難等，嚴重者將會引起喂養困難、煩躁不安、呼吸音粗等[1]。既往研究表明[2]，該疾病病理表現為黏膜下水腫、支氣管上皮細胞壞死脫落，從而引起氣道分泌物增多，最終引起小氣道阻塞。腸道微生態系統開始初步構建發生在孕期內，母體腸道中的特異性菌株能通過胎盤傳遞給胎兒，定植在胎兒結腸，并在娩出后2周內完成初步演替[3]。腸道微生態是指腸道正常菌群與宿主之間相互作用、相互影響的統一體[4]。新生兒娩出后腸道為無菌的，免疫系統尚未發育，導致大量細菌定植。同時，腸道菌群能影響全身免疫狀態，影響機體多個免疫系統[5]。呼吸道合胞病毒(RSV)是毛細支氣管主要病原體，能引起機體免疫損害[6]。本研究以RSV毛細支氣管炎嬰幼兒及健康嬰幼兒為對象，探討RSV致毛細支氣管炎患兒腸道菌群變化及其與病情嚴重程度的關系，結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年1月至2021年3月湖南省婦幼保健院兒科收治的呼吸道合胞病毒(RSV)致毛細支氣管炎的101例嬰幼兒為觀察組，其中男患兒51例，女患兒50例；年齡2個月~2歲，平均年齡（1.21±0.46）歲；病程1~7 d，平均病程（3.51±0.49）d。對患兒病情進行評估，根據評估結果分為A組（輕度，41例）、B組（中度，32例）和C組（重度，28例）。另選同期健康體檢的健康嬰幼兒30例作為對照組，其中男性18例，女性12例；年齡3個月~2歲，平均年齡（1.19±0.44）歲。組間臨床資料比較差異不具有統計意義（P＞0.05），具有可比性。本研究獲得湖南省婦幼保健院醫學倫理委員會批準，患兒父母或法定監護人知情并簽署知情同意書。納入標準：①符合諸福棠實用兒科第七版毛細支氣管炎診斷標準[7]；②均能完成患兒疾病分級，且可耐受本研究過程；③具有完整的臨床資料及隨訪資料。排除標準：①近2個月內發生腹瀉或服用益生菌制劑；②入院前2周內服用糖皮質激素、免疫調節劑、抗組胺藥；③合并呼吸、循環系統疾病或胃食管返流癥。

1.2 研究方法 根據《毛細支氣管炎診斷、治療與預防專家共識（2014年版）》[8]分級方法對患兒病程進行評估，具體方法如下。輕度：喂養量正常，呼吸頻率正常或稍增快，輕度胸壁吸氣性三凹征；未見鼻翼煽動或呻吟，血氧飽和度＞92.0%，精神正常；中度：喂養量下降到正常一半，呼吸頻率＞60次/min，中度胸壁吸氣性三凹征；未見鼻翼煽動或呻吟，血氧飽和度88%~92.0%；伴有輕微或間斷煩躁；重度：喂養量下降一半以上或拒食；呼吸頻率＞70次/min；重度胸壁吸氣性三凹征，存在鼻翼煽動或呻吟，血氧飽和度＜88.0%，伴有極度煩躁不安、嗜睡。

采用細菌16SrDNA熒光定量聚合酶鏈式反應（FQ-PCR）方法測定各組小兒糞便中雙歧桿菌（B）、大腸桿菌（E）數量，計算雙歧桿菌/大腸桿菌值（B/E值）。嬰幼兒的糞便3 g，將其放置在無菌瓶中并完成編號，置于低溫下，備用。腸道菌群分析方法：進行快速薄層涂片、固定、革蘭染色、鏡檢，根據油鏡（10×100倍）下每視野平均細菌數將菌群密集度分為Ⅰ~Ⅳ級，Ⅰ級：1~10 個，Ⅱ級：10~100 個，Ⅲ級：100~1000個，Ⅳ級：1000個以上，鏡下所見數量最多的微生物定義為優勢菌；分別記錄每組油鏡視野下的細菌總數，分別記錄革蘭陽性桿菌（G＋b）、革蘭陰性桿菌（G－b）和革蘭陽性球菌（G＋c）構成比。鏡下所見數量最多微生物為優勢菌。

1.3 統計學分析 采用SPSS 13.0軟件處理數據，計量資料以（）表示，采用t檢驗；多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗。采用Pearson相關性分析軟件對腸道微生態與毛細支氣管炎病情進行相關性分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 觀察組與對照組腸道微生態比較 兩組均完成腸道微生態測定，并完成相關數據的分析與整理，結果表明：觀察組毛細支氣管炎患兒B、B/E值低于對照組，E值高于對照組，差異均有統計學意義（均P＜0.05），見表1。

表1 觀察組與對照組腸道微生態比較（ ）

表1 觀察組與對照組腸道微生態比較（ ）

B：雙歧桿菌；E：大腸桿菌；B/E：雙歧桿菌/大腸桿菌。

組別 例數 B（克隆數） E（克隆數） B/E觀察組 101 7.41±0.59 7.36±0.53 1.01±0.34對照組 30 7.99±0.67 6.32±0.37 1.26±0.37 t值 -4.581 10.033 -3.465 P值 0.000 0.000 0.000

2.2 觀察組不同病情組別腸道微生態比較 A組患兒B、B/E值均高于B組和C組，E值低于B組和C組，差異均有統計學意義（均P＜0.05）；B組患兒B、B/E值均高于C組，E值低于C組，差異均無統計學意義（均P＞0.05），見表2。

表2 觀察組不同病情下腸道微生態比較（ ）

表2 觀察組不同病情下腸道微生態比較（ ）

注：與A組比較，*P＜0.05。B：雙歧桿菌；E：大腸桿菌；B/E：雙歧桿菌/大腸桿菌。

組別 例數 B（克隆數） E（克隆數） B/E A 組 41 7.92±0.64 6.35±0.39 1.25±0.25 B 組 32 7.42±0.60* 7.38±0.52* 1.01±0.21*C 組 28 7.15±0.53* 7.49±0.59* 0.95±0.15*F值 14.832 58.854 19.786 P值 0.000 0.000 0.000

2.3 腸道微生態與毛細支氣管炎病情相關性分析 毛細支氣管炎病情嚴重程度與B、B/E值呈負相關性，差異有統計學意義（P＜0.05）；與E值呈正相關性，差異有統計學意義（P＜0.05），見表3。

表3 腸道微生態與毛細支氣管炎病情相關性分析

3 討論

毛細支氣管炎好發于嬰幼兒，且能引起局部流行。毛細支氣管炎的病變主要發生在肺部細小支氣管，常由普通感冒、流行性感冒等引起，亦可由細菌感染引起，患兒發病后以喘息、三凹征、氣促等為主[9]。RSV是毛細支氣管炎主要致病病原體，患兒感染RSV后會引起免疫損害。“腸道菌群假說”提出，腸道共生菌在誘導免疫系統促進發育和促進免疫平衡中發揮重要作用。由于嬰幼兒免疫系統和呼吸系統正處于發育成熟階段，當患兒受到某些病原體感染時，則會影響機體的免疫和呼吸系統發育，引發喘息等諸多臨床癥狀，嚴重者將會演變為哮喘[10]。觀察組毛細支氣管炎患兒B、B/E值均低于對照組，E值高于對照組；A組患兒B、B/E值均高于B組和C組，E值均低于B組和C組。毛細支氣管炎患兒常伴有腸道微生態異常，其能反映患兒的疾病嚴重程度，這主要是由于腸道微生態的平衡能影響機體免疫，可減輕胃腸道黏膜充血狀況。同時，毛細支氣管炎患兒發病后可出現低氧血癥，能損害腸黏膜屏障功能，影響腸道正常菌群[11]。

毛細支氣管炎經典的Th1/Th2失衡理論已經得到廣泛認可，但是近年來一些臨床與實驗室研究結果并不能完全用該理論解釋[12]。研究表明在人體生命早期，腸道正常菌群的建立是促進機體免疫系統發育和成熟的重要因素[13]。有研究表明，嬰兒個體間腸道菌群結構的差異與毛細支氣管炎的發展存在緊密的聯系，腸道梭狀芽孢桿菌定植數量增多，能加劇病情的變化[14]。腸道微生物中的菌體能利用纖維合成多聚糖，而多聚糖又能調節T細胞分泌白細胞介素-10，起到強烈的抗炎作用[15]。為了進一步分析腸道微生態與RSV致毛細支氣管炎病情的關系，本研究中對二者進行Pearson相關性分析。結果表明，毛細支氣管炎病情嚴重程度與B、B/E值呈負相關性，與E值呈正相關性，說明毛細支氣管炎的發生、發展與腸道微生態存在緊密的聯系。因此，臨床上對于確診的毛細支氣管炎患兒應加強腸道微生態調理，改善患兒預后。

綜上所述，毛細支氣管炎患兒常伴有腸道微生態異常，且與病情嚴重程度存在相關性，能為臨床診療提供參考依據。