脂肪非典型鈣黏蛋白 4及 O型蛋白酪氨酸磷酸酶受體與胃癌預后的關系研究

劉真真，潘妍，胡輝歌

1西安市人民醫院（西安市第四醫院）胃腸內鏡診療中心，西安 710000

2空軍軍醫大學第一附屬醫院消化內科，西安 710032

3西安國際醫學中心醫院消化內科，西安 710000

近年來隨著醫學技術的發展，胃癌發病率呈逐漸下降趨勢，但其病死率仍居高不下[1]。有研究發現，胃癌的發生與遺傳學、表觀遺傳學的改變密切相關，而多種原癌基因激活、抑癌基因失活也與胃癌發生有直接的聯系[2]。脂肪非典型鈣黏蛋白4（FAT atypical cadherin 4，FAT4）是鈣黏蛋白中的一員，屬于重要的抑癌基因。有研究發現，FAT4在乳腺癌中為重要的抑癌基因，通過檢測發現復發性胃癌患者外顯子測序中，FAT4與術后復發轉移密切相關，FAT4表達下調可促進腫瘤細胞侵襲、轉移[3]。O型蛋白酪氨酸磷酸酶受體（protein tyrosine phosphatase receptor type O，PTPRO）屬于候選抑癌基因，與胃癌預后可能存在一定的聯系[4]。本研究通過對比分析FAT4及PTPRO在胃癌患者中的表達情況，了解其與胃癌患者預后的關系，為臨床診療胃癌提供新思路，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2015年1月至2021年1月西安市第四醫院收治的胃癌患者的病歷資料。納入標準：①均經手術后病理檢查證實為胃癌；②臨床資料、病理資料完整；③年齡≥18歲。排除標準：①非首次治療；②合并其他部位腫瘤；③隨訪資料缺失。根據納入、排除標準，共納入112例胃癌患者，其中男64例，女48例；年齡45～78歲，平均（56.61±3.24）歲。選擇距腫瘤≥5 cm處無癌變正常胃組織作為對照。本研究經醫院倫理委員會批準，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 FAT 4及PTPRO檢測方法將標本使用常規石蠟包埋，行4 μm厚連續切片，癌旁組織進行相同的處理，FAT4及PTPRO均使用免疫組化檢測。FAT4蛋白表達檢測試劑為美國No-vus Biologicals公司提供的兔多克隆FAT4抗體（1∶150稀釋）；PTPRO蛋白表達檢測試劑為Abcam公司提供的兔抗人PTPRO多克隆抗體（1∶500稀釋）；陰性對照采用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）代替，已知陽性切片作為陽性對照。結果判定：FAT4以細胞質為黃色或黃棕色為陽性；PTPRO以細胞質為棕褐色為陽性。評價標準：陽性細胞數＜10%為1分，10%～39%為2分，40%～75%為3分，≥76%為4分；1分為陰性，＞1分為陽性。

1.2.2 收集資料收集患者臨床資料，包括年齡、性別、TNM分期（Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期）、分化程度（低分化、中～高分化）、分型（腸型、彌漫型）、淋巴結轉移、腫瘤大小（≤5 cm、＞5 cm）等。

1.2.3 隨訪在患者治療后進行為期6個月的隨訪以了解患者預后情況，根據有無復發/轉移分為預后不良組與預后良好組。

1.3 觀察指標

對比不同組織中FAT4及PTPRO表達情況，分析影響胃癌預后的危險因素。

1.4 統計學方法

采用SPSS 18.0軟件進行統計分析，計數資料以例數及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，影響因素分析采用多元Logistic回歸分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 FAT 4及PTPRO表達情況的比較

正常胃組織中FAT4及PTPRO陽性表達率均高于胃癌組織，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表1）

表1 胃癌組織與正常胃組織中FAT 4及PTPRO表達情況的比較[ n（%）]

2.2 胃癌預后影響因素的單因素分析

112例患者中，預后良好91例，預后不良21例。預后良好與預后不良患者TNM分期、分化程度、淋巴結轉移情況、FAT4表達情況、PTPRO表達情況比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）；預后良好與預后不良患者年齡、性別、分型、腫瘤大小比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。（表2）

表2 胃癌預后影響因素的單因素分析

2.3 胃癌預后影響因素的多因素分析

將單因素分析中差異有統計學意義的指標作為自變量，胃癌預后作為因變量，經非條件多因素Logistic回歸模型分析顯示，TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為低分化、淋巴結轉移、FAT4陰性、PTPRO陰性均是胃癌患者預后不良的獨立危險因素（P＜0.05）。（表3）

表3 胃癌預后影響因素的多因素分析

3 討論

FAT鈣黏蛋白家族由32～34次的重復鈣黏蛋白組成，最早在果蠅中被發現[5]。FAT鈣黏蛋白家族中的各成員雖有著相似的細胞外結構，但其細胞內結構有所不同，從而形成了每一個FAT鈣黏蛋白家族的獨特功能。FAT1是目前臨床研究最多的FAT鈣黏蛋白家族成員，在細胞黏附、神經元功能、細胞遷移中均有重要的團控作用。在以往研究中也發現，FAT1在多種疾病及多數惡性腫瘤中表達明顯下降[6]。但FAT1在惡性腫瘤中并不完全一致，在乳腺癌、口腔癌中其表達下調，但在肺癌、小腸癌、白血病中其表達上調，因此FAT1在不同的研究中可表現出抑癌基因和致癌基因的功能[7]。FAT4則是與FAT1序列最為相似的成員，在目前多數研究中均顯示，FAT4與多種惡性腫瘤之間存在明顯相關性。有研究發現，FAT4表達下調對內皮細胞的運動及轉移有促進作用，提示FAT4在腫瘤細胞的遷移中具有一定的作用[8]。此外，也有研究顯示，FAT4屬于細胞黏附性蛋白，可影響細胞的遷徙運動。在魏東等[9]研究中，發現FAT4為影響胃癌復發、轉移的重要抑癌基因，其低表達可促進胃癌轉移。在本研究中也發現，FAT4在正常胃組織中陽性表達率高于胃癌組織，與上述研究結果相符。

酪氨酸磷酸化對細胞的內通訊、轉錄、存活、分化等有重要的作用，而此種變化與酪氨酸激酶和酪氨酸磷酸酶之間的平衡密切相關[10]。PTPRO與酪氨酸磷酸酶作用相反，PTPRO具有抑癌因子的大部分特征[11]。在以往研究中通過建立肝細胞肝癌大鼠模型發現，在其癌前病變、腫瘤組織中PTPRO啟動因子出現甲基化改變，在肝癌細胞中也出現甲基化，但在正常的大鼠肝臟中并未出現甲基化[12]。PTPRO在大鼠原發性肝癌中表達明顯下調，通過DNA甲基化酶抑制劑脫氧5-氮雜胞苷使細胞中PTPRO去甲基化后，PTPRO表達上調，腫瘤也隨之縮小[13]。此外，在乳腺癌、白血病、肺癌等研究中，與正常組織相比，PTPRO在腫瘤組織中表達被抑制[14]。有研究通過使用基因表達譜芯片對胃腺癌患者相關基因進行篩查，胃腺癌與正常胃黏膜間多種基因表達存在差異，表達下調的基因中PTPRO可抑制細胞增殖[15]。在本研究中通過免疫組化法發現PTPRO在正常胃組織中陽性表達率明顯高于胃癌組織。且通過影響因素分析發現，TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為低分化、淋巴結轉移、FAT4陰性、PTPRO陰性均為影響胃癌患者預后的危險因素，與以往研究結果相符[16]，提示FAT4、PTPRO下調可能預示著患者預后不良，兩者均可發揮抑制腫瘤的作用。

綜上所述，FAT4、PTPRO在胃癌組織中表達下調，與預后密切相關。在臨床中檢測胃癌患者FAT4、PTPRO表達可為患者預后評估及術后治療提供依據。